Intraportal 이식 마우스 모델에서 췌 장 독도의

저는 독일 기센에 있는 Justus Liebig University의 당뇨병 연구 그룹의 수석 연구원인 Thomas Linn입니다. 췌장섬 이식은 제1형 당뇨병의 치료법입니다. 실험적인 섬 이식은 신장 캡슐에 수행되는 반면, 임상 프로그램은 intra-portal 경로를 선호합니다.

따라서 우리는 전임상 모델에서 문맥 내 섬 이식에 대한 더 많은 연구가 필요하다고 생각합니다. 예를 들어, 이식 부위가 혈관 내이기 때문에 혈액에 노출된 섬 부위가 있습니다. 더욱이 미세수술 기법은 약간의 경험이 필요합니다.

예를 들어, 문맥 주사 후 출혈이 발생하거나 마취 또는 수용 마우스의 체중 유지에 문제가 있을 수 있습니다. 따라서 절차에 대한 시각적 설명이 중요하다고 생각합니다. 이 비디오는 섬 이식의 포털 내 경로에 중점을 둡니다.

당뇨병 마우스에서 정상적인 혈당을 달성하기 위해 검은 마우스의 syngeneic 및 allogenic 이식에 사용할 수 있지만 누드 마우스 수혜자의 syngeneic 모델에도 사용할 수 있습니다. 인큐베이터에서 격리된 섬을 제거하고 플로우 벤치 아래에 놓습니다. 페트리 접시의 원형 스윙 동작으로 섬을 중앙에 놓습니다.

100마이크로리터 배지를 1ml 주사기에 파란색 바늘로 채웁니다. 그런 다음 300마이크로리터의 Hank's Solution에 350개의 섬을 추가합니다. 섬이 가라앉을 수 있도록 주사기를 수직 위치에 두십시오.

부피를 50마이크로리터로 줄입니다. 파란색 바늘을 갈색 바늘로 교체하십시오. 동일한 주사기에 150 마이크로 리터의 밀도 구배 매체를 맨 위에 추가하여 주사기에서 200 마이크로 리터의 최종 부피에 도달합니다.

기포를 피하십시오. 주사기를 수직 위치에 두십시오. 섬이 뭉치지 않도록 약간 회전하십시오.

섬은 2-3분 이내에 주사기 원뿔에 정착합니다. 스트렙토조토신 주사 3일 후, 휴대용 혈당 측정기로 꼬리 정맥에 구멍을 뚫어 혈당 수치를 확인합니다. 복강내 주사로 dalzylozine과 ketamine으로 마우스를 마취시킵니다.

마우스를 따뜻한 열판에 누운 자세로 놓습니다. 발가락을 꼬집어 깊이 마취를 확인합니다. 피부가 없는 감염제로 피부를 청소하십시오.

눈이 건조해지는 것을 방지하기 위해 안연고로 촉촉하게 유지하십시오. 집게로 피부를 잡고 가위로 2-3cm 길이의 중간 절개를 만들어 전기절개술을 시작합니다. 상처 가장자리에 멸균 젖은 거즈를 올려 촉촉하게 유지합니다.

장 좌측좌식을 복강 바깥쪽으로 유지한다. 십이지장을 움직여 췌장을 찾습니다. 손가락과 엄지 손가락을 사용하여 문맥을 노출시킵니다.

200 마이크로 리터의 섬을 문맥에 천천히 주입합니다. 검지 손가락으로 천자 부위를 6분 동안 압박하여 출혈을 멈춥니다. 장 좌위, 복막, 복부 근육층을 조심스럽게 제자리로 되돌립니다.

집게를 사용하여 피부를 들어 올리고 근육 절개 부위를 닫고 흡수성 실크 봉합사로 피부층 상부를 닫습니다. 상처 치료제를 바르십시오. 따뜻한 열판에서 체온을 섭씨 37도로 유지하십시오.

쥐가 충분한 의식을 회복할 때까지 관찰하십시오. 통증을 관리하기 위해 수액과 함께 트라마돌을 제공하십시오. 섬을 이식한 후, 연쇄상구균에 의한 당뇨병 마우스에서 1일차에 혈당 수치가 리터당 23밀리몰에서 리터당 4.6밀리몰로 급격히 떨어지는 것이 관찰되었습니다.

정상 혈당은 최대 121일 동안 유지되었습니다. 체중과 혈당 수치는 대략 같은 패턴을 따랐다. 스트렙토조토신 주사 및 수술 후 체중이 감소했습니다. 2일차부터는 25.3g에서 29.7g으로 정상으로 증가하는 경향이 있습니다.

섬 이식 후 주요 조직 적합성 불일치 마우스에서 혈당 수치는 리터당 4.4 밀리몰로 떨어졌고 정상 혈당은 최대 10일 동안 관찰되었습니다. 그 후, 거부하기 시작합니다. 당뇨병이 있는 쥐의 체중도 비슷한 패턴을 따른다.

이식된 췌장 섬을 간으로 성공적으로 생착시킵니다. 이 연구에서는 섬 이식의 포털 내 경로를 탐구합니다. 이 프로토콜은 당뇨병성 스트레스를 완화하는 데 매우 효율적이며 섬 이식을 탐구할 수 있는 심층적인 기회를 제공합니다.

이 프로토콜은 약 350개의 섬이 고혈당 상태를 역전시킬 수 있음을 확인합니다. 더욱이, 시술 중에 사망한 쥐는 한 마리도 없었고, 혈당 조절이 유지되었다.