Name: 분광학 그리고 스캐닝 전자 현미경 검사 법에 의해 섬유 소 혈전 구조에 β 아 밀 로이드 유도 비정상의 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-30T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 27 s
Description: 학습하세요 베타아밀로이드가 섬유소 혈전 구조에 미치는 영향을 분석하는 방법을 배우세요. 이 프로토콜은 터빌디티 분석과 주사전자현미경을 사용하여 신경퇴행성 질환 연구에 활용됩니다.

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저자 마사 노리 가와사키가 즈 요 시 아소, 그리고 마이클 폴 리 트라이 기관 치료제 발견 연구소 (TDI), Aβ-fibrinogen 상호 작용 억제제의 합성에 대 한 뉴욕 및 그들의 귀중 한 제안에서 감사합니다. 저자는 또한 유용한 토론에 대 한 스 트 릭 랜드 연구소의 회원을 감사합니다. 이 작품에 의해 지원 되었다 NIH 그랜트 NS104386, 질병의 약물 발견 재단, 그리고 로버트 슨 치료 개발 기금 랭에 대 한 NIH 부여 NS50537, 트라이 기관 치료제 디스커버리 연구소 Alzheimer 약물 발견 재단, Rudin 가족 재단과 S.S.의 존 A. 에르난데스

1. 분석을 위한 Aβ42 및 Fibrinogen의 준비
<ol><li>동결 건조 된 분말에서 단위체 Aβ42 준비<ol>
<li>1500 x g 30에 내려 실내 온도와 회전 Aβ42 분말을 따뜻한 s.</li>
		<li>Aβ42 분말의 0.5 밀리 그램 당 100 µ L의 얼음 hexafluoroisopropanol (HFIP)를 추가 하 고 얼음에 30 분 동안 품 어. 주의: HFIP을 처리할 때 주의 사용 하 고 화학 후드에 있는 모든 단계를 수행.</li>
		<li>20 µ L aliquots 고 영화 공기 건조에 2-3 헤 영화에 대 한 화학 후드-20 ° c.에 저장 될 수 있다 준비</li>
		<li>실 온에서 10 분 동안 목욕 sonicator에 동요 하 여 신선한 디 메 틸 sulfoxide (DMSO)의 10 µ L에서 단위체 Aβ42 영화를 다시 구성.</li>
		<li>50 mM tris (hydroxymethyl) aminomethane (Tris) 버퍼 (pH 7.4)의 190 µ L을 추가 하 고 부드럽게 위아래로 플라스틱.</li>
		<li>20 분 동안 4 ° C에서 20,817 x g에서 원심 분리 하 여 단백질 집계를 제거 합니다.</li>
		<li>4 ° C에서 상쾌한 하룻밤을 위해 품 어 고 다음날 원심 단백질 집계 더 이상 삭제 20 분 4 ° C에서 20,817 x g에서 솔루션.</li>
		<li>Bicinchoninic 산 (BCA) 분석 결과를 Aβ42 농도 측정 한다. 직렬 희석 소 혈 청 알 부 민 (BSA) 1 mg/mL에서 0.0625 mg/mL 단백질 표준 생산, 3 중에서 다 잘 접시의 우물에 각 표준의 10 µ L을 추가 하 게 정화. Aβ 샘플 1: 4을 묽 게 하십시오 고 3 중에 우물에 10 µ L를 추가 합니다. BCA 솔루션 A와 B를 혼합 하 고 추가 200 µ L 각 잘. 37 ° C에서 30 분 동안 품 어와 읽기 562에서 플레이트 리더에 nm. 얼음에 나머지 Aβ 솔루션을 유지 하 고 탁도 분석 결과 및 SEM.에 대 한이 준비를 사용 하 여</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fibrinogen 솔루션 준비<ol>
<li>15 mL 튜브에 fibrinogen 동결 건조 된 분말의 20 밀리 그램을 측정 하 고 다시 20 m m hydroxyethylpiperazine 탄 술 폰 산 (HEPES) 버퍼 (pH 7.4) 미리 데워 진된 2 mL와 함께 일시 중단.</li>
		<li>10 분 동안 37 ° C 물 욕조에 품 어.</li>
		<li>0.2 µ m 주사기 필터를 통해 솔루션을 필터링 하 고 30 분 동안 4 ° C에서 저장 합니다. 솔루션 4 ° C, 필터에서 밖으로 다시 0.1 µ m 주사기 필터를 통해 fibrinogen 집계를 제거 하거나 기존 섬유 소.</li>
		<li>BCA 분석 결과를 fibrinogen 농도 측정 한다. 1.1.8 단계에서 지침을 따릅니다. 4 ° C에서 나머지 fibrinogen 솔루션을 유지 하 고 탁도 분석 결과 및 SEM.에 대 한이 준비를 사용 하 여</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 병 탁도 분석 결과
<ol><li>그것의 최종 농도 버퍼의 200 µ L에서 3.0 µ M 96 잘 접시의 각 실험 잘 하려면 단계 1.1.8에서에서 30 µ M Aβ42 솔루션의 20 µ L를 추가 합니다. 50 mM Tris 버퍼 (pH 7.4) 96 잘 접시 웰 스 제어 버퍼에 5 %DMSO 동일한 볼륨을 추가 합니다. 참고:이 단계에서 Aβ42의 정확한 볼륨 중요 하지 않습니다. 낮은 농도 준비에 대 한 높은 볼륨을 사용할 수 있습니다, 그리고 응고 형성 버퍼의 볼륨을 조정할 수 있습니다. 마지막 볼륨 200 µ L을 유지 한다.</li>
	<li>억제 화합물을 테스트 하는 경우 희석 DMSO로 작업 농도에 화합물. 추가 화합물 또는 DMSO 우물 Aβ42와 잘 혼합 하는 컨트롤에 대 한 혼자. 참고: Aβ42 솔루션 우물, 화합물의 하단에 이산 물방울을 형성 한다 또는 DMSO는 물방울의 센터에 직접 pipetted 한다.</li>
	<li>단계 1.2.4 응고 형성 버퍼에서에서 fibrinogen 재고 솔루션을 희석 (20 mM HEPES buffer (pH 7.4), 5mm CaCl2, 그리고 137 mM NaCl) 96 잘 접시의 Aβ42 포함 하 고 제어 우물에 추가. 되도록의 최종 농도 1.5 µ M에 총 200 µ L 반응 fibrinogen 솔루션의 볼륨을 조정 합니다. 플라스틱 솔루션 천천히 하 고 거품 형성 방지. 회전 하는 플랫폼에 흔들어 30 분 동안 실내 온도에 격판덮개를 품 어. 참고: fibrinogen 솔루션의 볼륨의 재고 농도 따라 다를 수 있습니다 있지만 각 총 볼륨 잘 부 화 하면서 170 µ L 해야한다.</li>
	<li>DdH2O 50 U/mL의 재고 솔루션에서 상업적으로 순화 된 트 롬 빈 분말을 용 해 하 여 트 롬 빈 솔루션을 준비 합니다. 20 mM HEPES 버퍼 (pH 7.4)에 직접 사용 하기 전에 5 U/mL 작업 솔루션을 희석.</li>
	<li>외피의 30 분 후 동시에 트 롬 빈 솔루션 (5 U/mL)의 30 µ L에 추가 96 잘 접시에서 fibrinogen 솔루션 단계 2.3 멀티 채널 피 펫을 사용 하 여에서. 트 롬 빈의 추가 즉시 응고 형성을 시작 합니다. 따라서, 거품 형성 되지 않도록 주의와 fibrinogen 솔루션의 중심에 직접 트 롬 빈을 추가 합니다. 참고: 트 롬 빈 활동 사이 실험 조건, 트 롬 빈 많이 달라질 수 있습니다. 튼튼하게 혈전을 생성 하는 데 필요한 정확한 농도 경험적으로 결정 할 수 있습니다.</li>
	<li>트 롬 빈 추가 직후 플레이트 리더에 시험관에 응고의 흡 광도 읽으십시오. 350에서 흡 광도 측정 10 분, 매 30-60 미 수행 실 온에서 전체 분석 결과의 과정을 통해 nm. 참고: 일부 억제제 화합물 350 솔루션 흡 광도 변경할 수 있는 경우 탁도 405에서 측정 될 수 있다 nm nm.</li>
</ol>3. 스캐닝 전자 현미경 검사 법
<ol><li>응고, 고정, 및 세척의 준비<ol>
<li>깨끗 한 장소 시 집게를 사용 하 여 12 음 또는 24-잘 접시에 유리 원형 커버 슬라이드 (12mm).</li>
		<li>Fibrinogen 응고 형성 버퍼를 준비 합니다. 자세한 내용은 프로토콜 단계를 1.2를 참조 하십시오.</li>
		<li>섬유 소 혈전 구조에 Aβ fibrinogen 상호 작용 억제제의 효과 평가 하려면 탁도 분석 결과 (2 단계)에 대 한 설명 된 대로 부 화에 대 한 지침을 따르십시오. 항상 fibrinogen Aβ와 억제제의 부재에서를 포함 하는 컨트롤 웰 스를 포함 합니다.</li>
		<li>표지 슬라이드에 단계 3.1.3에서에서 fibrinogen 혼합물의 80 µ L 플라스틱 부드럽게 커버 슬라이드에 균등 하 게 분배 되도록 솔루션을 확산.</li>
		<li>트 롬 빈 재고 (50 U/mL) 2.5 U/mL의 최종 농도 20 mM HEPES 버퍼링 염 분으로 묽 게 하십시오 고 fibrinogen 솔루션의 중심에 직접 혼합 하지 않고 20 µ L를 추가 합니다. 참고: 필요한 경우 높은 트 롬 빈 작업 농도 (5 U/mL) 사용할 수 있습니다.</li>
		<li>12-잘 접시 플라스틱 뚜껑으로 커버 하 고 30-60 분 동안 실내 온도에 그것을 두고.</li>
		<li>응고 반응을 실행 하는 동안 탈수 및 고정 솔루션을 준비 합니다. 나트륨 cacodylate 버퍼 (0.1 m M, pH 7.4)을 준비 합니다. 나트륨 cacodylate 버퍼 (0.1 m M, pH 7.4) 2%도 솔루션을 작동 하 게 하려면 10%도 재고 솔루션을 희석. 얼음에 이러한 모든 솔루션을 유지. 1 주 이내 갓 희석된도 (2%)를 사용 해야 제대로 4 ° c.에는 냉장고에 저장 하는 경우</li>
		<li>두 배 증류수 (80%, 50%, 20% 에탄올)에 절대 에탄올 (100%)을 희석. 이러한 에탄올 솔루션 및 얼음에 절대 에탄올 (100%)를 유지. 주의: 나트륨 cacodylate와 글을 처리할 때 주의 사용 화학 후드에이 단계를 수행 하십시오.</li>
		<li>30 분 후 부드럽게 씻어 얼음 나트륨 cacodylate 버퍼 (0.1 m M)와 혈전 두 번. 혈전 완전히 빠져들 것 같은 각 잘을 버퍼의 2 개 mL를 추가 합니다. 뚜껑 잘 플레이트 커버 하 고 실내 온도에 2 분 동안 그것을 둡니다. 2 분 후 1 mL 피 펫 또는 좁은 줄기 전송 피 펫을 사용 하 여 버퍼를 제거 부드럽게 합니다. 한 번 반복 합니다.</li>
		<li>얼음도 (2%)와 혈전을 수정 합니다. 얼음에 잘 접시를 유지, 각 음에 2%도 약 2-3 mL를 추가 합니다. 혈전 완전히 빠져들 다는 것을 확인 하십시오. 커버 하 고 30 분 동안 얼음에 접시를 두고.</li>
		<li>30 분 후 부드럽게 각 우물에서 고도 제거 하 고 혈전 (2 분, 두 번) 위에서 설명한 대로 나트륨 cacodylate 버퍼 (0.1 m M)를 사용 하 여 세척. 얼음에 잘 접시를 유지.</li>
	</ol>
</li>
	<li>응고 및 한계점 건조의 직렬 탈수<ol>
<li>5 분 동안 단계 3.1.8 (20%, 50%, 80%, 100%, 및 again100%)에서 준비 얼음 에탄올 세척의 등급된 시리즈에서 혈전을 탈수. 각 에탄올 시리즈는 혈전 잠긴 것을 확인 하는 2-3 mL를 추가 합니다. 커버 하 고 얼음에 품 어.</li>
		<li>각 에탄올 단계 후 1 mL 피 펫 또는 일회용 피펫은 스포이드를 사용 하 여 에탄올 솔루션을 제거 합니다. 에탄올을 완전히 제거 하지 마십시오. 응고 표면 공기에 노출 되지 않습니다 있는지 확인 합니다. 참고: 탈수 절대 에탄올 (100%)에 두 번 수행 되어야 한다.</li>
		<li>최종 100% 에탄올에 빠져들 샘플을 유지 하면서 중요 한 포인트 드라이어 (일일) 전송. 일일 비용 챔버로 슬라이드를 전송 하기 위한 세탁기와 일일 비용 샘플 홀더 또는 커버 슬립 홀더를 사용 합니다. 각 슬라이드 사이 적어도 한 세탁기 배치.</li>
		<li>일일 약 실에서 커버 슬라이드 밖으로가 고 탄소 테이프를 사용 하 여 sem의 스텁에 마운트.</li>
	</ol>
</li>
	<li>스퍼터 코팅과 이미징<ol>
<li>스퍼터 코팅 챔버를 sem의 스텁 함께 모든 샘플을 전송 합니다.</li>
		<li>스퍼터 코트 20 미만 nm 금/팔라듐 또는 탄소, 진공 스퍼터 coater를 사용 하 여 같은 다른 전도성 물자의. 참고: 우리는 18 사용 금/팔라듐 코팅의 nm. 스퍼터 코팅 45 수행한 s와 코팅 속도 4 Å / s. 스퍼터 코팅 샘플은 몇 주 동안 실내 온도에 건조 한 환경에 제대로 보관 하면 안정. SEM 분석은 언제 든 지 수행할 수 있습니다.</li>
		<li>이미지 스캐닝 전자 현미경 4 SE2 검출기 장착에 kV. 참고: 이 이미지에는 이미지 픽셀 크기 13 nm-31 nm에서 범위를 설정합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Selkoe, D. J., Schenk, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+disease%3A+molecular+understanding+predicts+amyloid-based+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Pharmacology+and+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's disease: molecular understanding predicts amyloid-based therapeutics.</a> Annual Review of Pharmacology and Toxicology. 43, 545-584 (2003).</li>
<li>Kurz, A., Perneczky, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid+clearance+as+a+treatment+target+against+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Alzheimer%27s+Disease%22%5BJournal%5D)">Amyloid clearance as a treatment target against Alzheimer's disease.</a> Journal of Alzheimer's Disease. 24, 61-73 (2011).</li>
<li>Benilova, I., Karran, E., De Strooper, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+toxic+Abeta+oligomer+and+Alzheimer%27s+disease%3A+an+emperor+in+need+of+clothes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The toxic Abeta oligomer and Alzheimer's disease: an emperor in need of clothes.</a> Nature Neuroscience. 15 (3), 349-357 (2012).</li>
<li>Karran, E., Hardy, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critique+of+the+drug+discovery+and+phase+3+clinical+programs+targeting+the+amyloid+hypothesis+for+Alzheimer+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">A critique of the drug discovery and phase 3 clinical programs targeting the amyloid hypothesis for Alzheimer disease.</a> Annals of Neurology. 76 (2), 185-205 (2014).</li>
<li>Yoshikawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+of+cerebral+blood+flow+in+Alzheimer+disease+and+vascular+dementia%5BTitle%5D)+AND+%22AJNR%2C+American+Journal+of+Neuroradiology%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity of cerebral blood flow in Alzheimer disease and vascular dementia.</a> AJNR, American Journal of Neuroradiology. 24 (7), 1341-1347 (2003).</li>
<li>Strickland, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+will+out%3A+vascular+contributions+to+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Blood will out: vascular contributions to Alzheimer's disease.</a> The Journal of Clinical Investigation. 128 (2), 556-563 (2018).</li>
<li>Ahn, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+disease+peptide+beta-amyloid+interacts+with+fibrinogen+and+induces+its+oligomerization%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's disease peptide beta-amyloid interacts with fibrinogen and induces its oligomerization.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (50), 21812-21817 (2010).</li>
<li>Zamolodchikov, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+and+structural+analysis+of+the+interaction+between+beta-amyloid+and+fibrinogen%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Biochemical and structural analysis of the interaction between beta-amyloid and fibrinogen.</a> Blood. 128 (8), 1144-1151 (2016).</li>
<li>Cortes-Canteli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrinogen+and+beta-amyloid+association+alters+thrombosis+and+fibrinolysis%3A+a+possible+contributing+factor+to+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Fibrinogen and beta-amyloid association alters thrombosis and fibrinolysis: a possible contributing factor to Alzheimer's disease.</a> Neuron. 66 (5), 695-709 (2010).</li>
<li>Cortes-Canteli, M., Mattei, L., Richards, A. T., Norris, E. H., Strickland, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrin+deposited+in+the+Alzheimer%27s+disease+brain+promotes+neuronal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Aging%22%5BJournal%5D)">Fibrin deposited in the Alzheimer's disease brain promotes neuronal degeneration.</a> Neurobiology of Aging. 36 (2), 608-617 (2015).</li>
<li>Liao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+characterization+of+postmortem+amyloid+plaques+isolated+by+laser+capture+microdissection%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Proteomic characterization of postmortem amyloid plaques isolated by laser capture microdissection.</a> The Journal of Biological Chemistry. 279 (35), 37061-37068 (2004).</li>
<li>Zamolodchikov, D., Strickland, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abeta+delays+fibrin+clot+lysis+by+altering+fibrin+structure+and+attenuating+plasminogen+binding+to+fibrin%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Abeta delays fibrin clot lysis by altering fibrin structure and attenuating plasminogen binding to fibrin.</a> Blood. 119 (14), 3342-3351 (2012).</li>
<li>Ahn, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+Abeta-fibrinogen+interaction+inhibitor+rescues+altered+thrombosis+and+cognitive+decline+in+Alzheimer%27s+disease+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">A novel Abeta-fibrinogen interaction inhibitor rescues altered thrombosis and cognitive decline in Alzheimer's disease mice.</a> The Journal of Experimental Medicine. 211 (6), 1049-1062 (2014).</li>
<li>Singh, P. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aminopyrimidine+Class+Aggregation+Inhibitor+Effectively+Blocks+Abeta-Fibrinogen+Interaction+and+Abeta-Induced+Contact+System+Activation%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Aminopyrimidine Class Aggregation Inhibitor Effectively Blocks Abeta-Fibrinogen Interaction and Abeta-Induced Contact System Activation.</a> Biochemistry. 57 (8), 1399-1409 (2018).</li>
<li>Pretorius, E., Mbotwe, S., Bester, J., Robinson, C. J., Kell, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+induction+of+anomalous+and+amyloidogenic+blood+clotting+by+molecular+amplification+of+highly+substoichiometric+levels+of+bacterial+lipopolysaccharide%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Royal+Society+Interface%22%5BJournal%5D)">Acute induction of anomalous and amyloidogenic blood clotting by molecular amplification of highly substoichiometric levels of bacterial lipopolysaccharide.</a> Journal of the Royal Society Interface. 13 (122), (2016).</li>
<li>Veklich, Y., Francis, C. W., White, J., Weisel, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+studies+of+fibrinolysis+by+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Structural studies of fibrinolysis by electron microscopy.</a> Blood. 92 (12), 4721-4729 (1998).</li>
<li>Weisel, J. W., Nagaswami, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computer+modeling+of+fibrin+polymerization+kinetics+correlated+with+electron+microscope+and+turbidity+observations%3A+clot+structure+and+assembly+are+kinetically+controlled%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Computer modeling of fibrin polymerization kinetics correlated with electron microscope and turbidity observations: clot structure and assembly are kinetically controlled.</a> Biophysical Journal. 63 (1), 111-128 (1992).</li>
<li>Chernysh, I. N., Nagaswami, C., Purohit, P. K., Weisel, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrin+clots+are+equilibrium+polymers+that+can+be+remodeled+without+proteolytic+digestion%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Fibrin clots are equilibrium polymers that can be remodeled without proteolytic digestion.</a> Scientific Reports. 2, 879(2012).</li>
<li>Klunk, W. E., Jacob, R. F., Mason, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+amyloid+beta-peptide+%28Abeta%29+aggregation+using+the+Congo+red-Abeta+%28CR-abeta%29+spectrophotometric+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Quantifying amyloid beta-peptide (Abeta) aggregation using the Congo red-Abeta (CR-abeta) spectrophotometric assay.</a> Analytical Biochemistry. 266 (1), 66-76 (1999).</li>
<li>Zhao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+amyloid+formation+by+turbidity+assay-seeing+through+the+cloud%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Reviews%22%5BJournal%5D)">Measurement of amyloid formation by turbidity assay-seeing through the cloud.</a> Biophysical Reviews. 8 (4), 445-471 (2016).</li>
<li>Bester, J., Soma, P., Kell, D. B., Pretorius, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viscoelastic+and+ultrastructural+characteristics+of+whole+blood+and+plasma+in+Alzheimer-type+dementia%2C+and+the+possible+role+of+bacterial+lipopolysaccharides+%28LPS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Viscoelastic and ultrastructural characteristics of whole blood and plasma in Alzheimer-type dementia, and the possible role of bacterial lipopolysaccharides (LPS).</a> Oncotarget. 6 (34), 35284-35303 (2015).</li>
<li>Pretorius, E., Page, M. J., Mbotwe, S., Kell, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipopolysaccharide-binding+protein+%28LBP%29+can+reverse+the+amyloid+state+of+fibrin+seen+or+induced+in+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Lipopolysaccharide-binding protein (LBP) can reverse the amyloid state of fibrin seen or induced in Parkinson's disease.</a> PLoS One. 13 (3), e0192121(2018).</li>
<li>Kell, D. B., Pretorius, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteins+behaving+badly.+Substoichiometric+molecular+control+and+amplification+of+the+initiation+and+nature+of+amyloid+fibril+formation%3A+lessons+from+and+for+blood+clotting%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Biophysics+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Proteins behaving badly. Substoichiometric molecular control and amplification of the initiation and nature of amyloid fibril formation: lessons from and for blood clotting.</a> Progress in Biophysics and Molecular Biology. 123, 16-41 (2017).</li>
<li>Wolberg, A. S., Campbell, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombin+generation%2C+fibrin+clot+formation+and+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion+and+Apheresis+Science%22%5BJournal%5D)">Thrombin generation, fibrin clot formation and hemostasis.</a> Transfusion and Apheresis Science. 38 (1), 15-23 (2008).</li>
<li>Soon, A. S., Lee, C. S., Barker, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+fibrin+matrix+properties+via+knob%3Ahole+affinity+interactions+using+peptide-PEG+conjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Modulation of fibrin matrix properties via knob:hole affinity interactions using peptide-PEG conjugates.</a> Biomaterials. 32 (19), 4406-4414 (2011).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

여기에 설명 된 방법을 섬유 소 혈전 형성에서 체 외에서평가의 재현성 및 빠른 수단을 제공 합니다. 또한, 시스템의 단순은 섬유 소 혈전 형성 및 구조 상대적으로 곧장 앞으로 미치는 Aβ의 해석. 이 연구소의 이전 게시, 그것은 화합물 Aβ fibrinogen 상호 작용13,14을 억제 하기 위해 그들의 능력에 대 한 테스트를 이러한 분석을 사용할 수 있는 표시 했다. 이 두 가지 분석 실험을 사용 하 여, 합성된 화합물의 시리즈 Aβ fibrinogen 상호 작용을 억제 하는 기능에 대 한 분석 했다. 실제로,로 Aβ fibrinogen 상호 작용을 억제할 수 있는 모든 화합물 섬유 소 혈전 형성을 복원할 수도 있습니다 치료 잠재력 하는 히트 화합물의 수영장을 좁히는 병 탁도 분석 결과 사용할 수 있습니다.
문제 해결을 요구 하거나이 기술의 사용을 제한 하는...

Alzheimer의 질병 (광고), 신경 질환 노인 환자에서 인지 감소에 이어지는 주로 비정상적인 베타-아 밀 로이드 (Aβ) 식, 집계 및 장애인된 클리어런스 neurotoxicity1, 의 결과에서 발생 2. Aβ 집계 및 광고3사이 잘 특징이 협회에도 불구 하 고 근본적인 질병 병 리 정확한 메커니즘은 잘 이해4. 증거를 증가 제안 Aβ6순환 시스템 구성 요소와 직접 상호 작용으로 neurovascular 적자 진행 및 광고5, 심각도에 역할을 재생 합니다. Aβ는 fibrinogen7,8, 또한 광고 환자 및 마우스 모델9,,1011Aβ 예금 localizes와 높은 선호도 상호 작용. 또한, Aβ fibrinogen 상호 작용 fibrinolysis9,12저항 뿐만 아니라 비정상적인 섬유 소 혈전 형성 및 구조, 유도합니다. 광고, 치료 한 치료 가능성 Aβ 및 fibrinogen13,14사이 상호 작용을 억제 함으로써 순환 적자 경감 이다. 우리는, 그러므로, 높은 처리량 검열 및의 약 화학 접근13,14를 사용 하 여 Aβ fibrinogen 상호 작용을 억제 하는 여러 작은 화합물 확인. Aβ-fibrinogen 상호 작용 억제제의 효능을 테스트 하려면 우리 섬유 소 혈전 형성 체 외에서 의 분석을 위한 두 가지 방법을 최적화: 응고 탁도 분석 결과 및 스캐닝 전자 현미경 (SEM)14.
병 탁도 분석 결과 섬유 소 혈전 형성 UV 보이는 분광학을 사용 하 여 모니터링을 위한 스트레이트-앞으로 및 빠른 방법입니다. 섬유 소 혈전으로 형태, 빛은 점점 더 흩어져 하 고 솔루션의 탁도 증가 한다. 반대로, Aβ 있으면, 섬유 소 혈전의 구조 변경 및 혼합물의 탁도 감소 된다 (그림 1). 억제 화합물의 효과 병 탁 Aβ 유도 이상에서 복원 가능성에 대 한 평가 될 수 있습니다. 탁도 분석 결과 여러 조건의 신속한 분석에 대 한 수 있으며, 병 모양 및 구조에 제한 된 정보를 제공 합니다. SEM, 솔리드 객체의 지형 전자 조사에 의해 밝혀 수 응고15,16,,1718 의 3 차원 구조 분석 방법의 평가 대 한 Aβ의 존재와 또는 억제 화합물 그 구조9,14변경 합니다. 두 분석 및 SEM는 다양 한 목적을 위해 사용 된 고전적인 실험실 기술, 예, 분 광 광도 법 녹말 체 집계19,20모니터링을 위해 사용 됩니다. 마찬가지로, SEM 분석 파 킨 슨 병 및 thromboembolic 치기 환자21,,2223Alzheimer, 플라즈마에서 형성 된 섬유 소 병 하도 사용 됩니다. 여기에 제시 된 프로토콜은 재현 하 고 빠른 방식으로 섬유 소 혈전 형성 평가 적합 합니다.
다음 프로토콜 생체 외에서 섬유 소-응고를 모두와 함께 Aβ 없이 준비에 대 한 지침을 제공합니다. 그것은 또한 섬유 소 혈전 형성과 구조에 Aβ의 효과 분석 하는 방법을 자세히 설명 합니다. Aβ-fibrinogen 상호 작용의 억제를 측정 하기 위한이 두 가지 방법의 효과 TDI-2760, 작은 억제 화합물14를 사용 하 여 보여 줍니다. 이 방법을 개별적으로 함께, 섬유 소 혈전 형성 체 외에서 의 신속 하 고 간단 분석 허용.

<table><tbody><tr><td>피브리오겐, 플라스미노겐 고갈, 플라즈마</td><td>EMD Millipore</td><td>341578</td><td>수분 노출을 피하기 위해 뚜껑 파라필름을 감싸서 보관</td></tr><tr><td>베타-아밀로이드(1-42), 인간</td> 플라즈마의 인간 <td>Anaspec</td><td>AS-20276</td><td></td></tr><tr><td>트롬빈</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T7009</td><td></td></tr><tr><td>1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-propanol, 99%</td> 이상 <td>Sigma-Aldrich</td><td>105228</td><td></td></tr><tr><td>디메틸설폭사이드(DMSO), 멸균 여과</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2438</td><td></td></tr><tr><td>Pierce BCA 단백질 분석 키트</td><td>Thermo Scientific</td><td>23225</td><td></td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Fischer Scientific</td><td>BP152</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Fischer Scientific</td><td>BP310</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fischer Scientific</td><td>S271</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Fischer Scientific</td><td>C70</td><td></td></tr><tr><td>필터 주사기, 0.2&micro; M, 25mm</td><td>Pall</td><td>4612</td><td></td></tr><tr><td>Millex 멸균 주사기 필터, 0.1 um, PVDF, 33 mm dia.</td><td>Millipore</td><td>SLVV033RS</td><td></td></tr><tr><td>Solid 96 웰 플레이트, 높은 바인딩 인증 플랫 바텀,</td><td>Fischer Scientific</td><td>, 21377203</td><td></td></tr><tr><td>Spectramax Plus384</td><td>Molecular Devices</td>, <td>89212-396</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge, 5417R,</td><td>Eppendorf</td><td>5417R</td><td></td></tr><tr><td>, Branson 200 초음파 세척기,</td><td>Fischer Scientific</td>, <td>15-337-22</td><td></td></tr><tr><td>Lab Rotator</td><td>Thermo Scientific</td><td>2314-1CEQ</td><td></td></tr><tr><td>커버 슬립 홀더용 예비 와셔</td><td>Tousimis</td><td>8766-01</td><td></td></tr><tr><td>좁은 줄기 피펫 - Sedi-Pet</td><td>Electron Microscopy Sciences (EMS)</td><td>70967-13</td><td></td></tr><tr><td>CPD용 시료 홀더(커버 슬립 홀더)</td><td>Tousimis</td><td>8766</td><td></td></tr><tr><td>마운트 홀더 박스, 핀형</td><td>전자 현미경 과학(EMS)</td><td>76610</td><td></td></tr><tr><td>원형 유리 커버 슬라이드(12mm)</td><td>Hampton Research</td><td>HR3-277</td><td></td></tr><tr><td>10% 글루타르알데히드</td><td>전자 현미경 과학(EMS)</td><td>16120</td><td></td></tr><tr><td>에탄올</td><td>Decon Labs</td><td>11652</td><td></td></tr><tr><td>24 웰 플레이트</td><td>Falcon</td><td>3047</td><td></td></tr><tr><td>Na Cacodylate</td><td>Electron Microscopy Sciences (EMS)</td><td>11652</td><td></td></tr><tr><td>SEM 스텁, 테이퍼 엔드 핀.</td><td>전자 현미경 과학 (EMS)</td> <td>75192</td><td></td></tr><tr><td>PELCO 탭, 탄소 전도성 탭, 12mm OD</td><td>Ted Pella</td><td>16084-1</td><td></td></tr><tr><td>Autosamdri-815 임계 점 건조기</td><td>Tousimis</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Denton Desk IV Coater with Gold / Palladium Target</td><td>Denton Vacuum</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Leo 1550 FE-SEM</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Smart SEM Software</td><td>칼 자이스</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

분광학 그리고 스캐닝 전자 현미경 검사 법에 의해 섬유 소 혈전 구조에 β 아 밀 로이드 유도 비정상의 분석

Analysis of &#946;-Amyloid-induced Abnormalities on Fibrin Clot Structure by Spectroscopy and Scanning Electron Microscopy

이 문서는 체 외 섬유 소 혈전 생성 및 분석 하 여 응고 형성 및 구조에 베타-아 밀 로이드 (Aβ) 단백질의 효과 분석 하 고 스캐닝 전자 현미경 (SEM)에 대 한 방법을 선물 한다. Aβ, Alzheimer의 질병 (광고)에서 신경 녹말 체 집계를 형성, fibrinogen 상호 작용을 보였다. 이 Aβ fibrinogen 상호 작용 구조적으로 비정상적인 fibrinolysis에 저항 하 고 섬유 소 혈전을 만든다. 섬유 소는 혈액 응고에 이상이 Aβ 유도 또한 microinfarcts, 같은 광고 병 리의 뇌혈관 측면에 기여할 수 있습니다 염증, 뿐만 아니라, 대뇌 아 밀 로이드 angiopathy (CAA). 광고 병리학 neurovascular 적자의 잠재적으로 중요 한 역할을 감안할 때, 유망한 치료 가치는 억제 또는 Aβ fibrinogen 상호 작용을 줄일 수 있는 화합물을 개발. 생체 외에서 메서드는 섬유 소에 의해 응고 형성 평가 될 수 있다 쉽고 체계적으로 치료 화합물 개발을 위한 잠재적으로 유용한 도구입니다. 여기는 섬유 소 혈전의 생성 생체 외에서 Aβ 및 Aβ fibrinogen 상호 작용 억제제의 효과의 분석에 대 한 최적화 된 프로토콜이입니다. 병 탁도 분석 결과 신속 하 고 매우 재현 이며 Aβ fibrinogen 억제제의 다 수의 심사에 대 한 수 있도록 여러 조건을 동시에, 테스트를 사용할 수 있습니다. 이 심사에서 히트 화합물 더 SEM.를 사용 하 여 섬유 소 혈전 아키텍처의 구조 이상 Aβ 유도 개량 하는 능력에 대 한 평가 이러한 최적화 된 프로토콜의 효과 TDI-2760, 최근 확인 된 Aβ fibrinogen 상호 작용 억제제를 사용 하 여 여기 보여 줍니다.

시험관에 응고 (탁도) 분석 결과, 효소 트 롬 빈 섬유 소 네트워크24의 형성의 결과로 fibrinogen 앞. 이 섬유 소 혈전 형성 증가 탁도 (그림 1), (그림 2, 그린) 독서 기간의 끝 전에 頭 打 ち 상태에 따른 해결책을 통과 하는 빛의 산란을 발생 합니다. fibrinogen Aβ42의 알을 품는, 솔루션의 탁도 감소, 약 절반의 최대 높이 도달 하는 곡선 (그림 2A, 블루) 혼자 fibrinogen의. 최근 간행물에서 Aβ 집계 차단제의 시리즈는 합성 되었고 복합 TDI-276014식별 Aβ fibrinogen 상호 작용을 억제 하기 위해 그들의 능력에 대 한 평가. Aβ-fibrinogen ...

여기에 제시 된 분석 섬유 소 혈전 구조에 베타-아 밀 로이드의 효과 개별적으로 또는 조합에서 사용할 수 있는 두 가지 방법이 있습니다. 생체 외에서 섬유 소 혈전, 만드는 뒤에 병 탁도 및 스캐닝 전자 현미경 검사 법 방법 포함 된 프로토콜이입니다.

This article presents methods for generating in vitro fibrin clots and analyzing the effect of beta-amyloid (A&#946;) protein on clot formation and ...

이 플레이트 기반 탁도 분석의 주요 장점은 빠르며 정교한 설정이나 요구 사항없이 여러 아밀로이드 베타 피브리노겐 상호 작용 억제제를 한 번에 선별 할 수 있다는 것입니다. 피브린 탁도 분석에 있는 헤드 화합물은 전자 현미경 검사를 스캔하여 분석된 피브린 혈전에서 A-베타 유도 된 구조적 이상을 복원하는 능력에 대해 더욱 평가될 수 있다. 전자 현미경 분석을 스캔하기 위한 혈전 제제의 시각적 데모는 제제의 모든 변화가 실험 결과 내의 변화에 기여할 수 있기 때문에 매우 중요합니다.이 데모의 초점은 A-베타 피브리노겐 상호 작용에 있습니다. 이 프로토콜은 다른 단백질및 피브린 응고와의 화합물과의 다른 상호 작용을 분석하기 위해 쉽게 변형될 수 있다. 먼저 200마이크로리터의 응고 형성 버퍼에 갓 준비된 피브리노겐 1.5 마이크로몰라를 각 A-베타 네거티브(42)에 첨가하여 우물을 포함하고 제어하고 실온에서 회전 플랫폼에서 플레이트를 배양한다.30분 후, 30분 동안 새로 준비된 트롬빈 용액 30마이크로리터를 피브리노겐 함유 의 중앙에 직접 추가하여 혈전 형성을 시작하고 즉시 350나노미터에서 체외 혈전의 흡수를 판독하여 10분 동안 30~60초마다 측정을 반복합니다. 피브린 응고 구조에 대한 A-베타 피브리노겐 상호 작용 억제제의 효과를 평가하기 위해 먼저 집게를 사용하여 12웰 플레이트의 개별 우물에 12mm 실리콘 유리 원 덮개 를 넣고 80 마이크로리터의 피브리노겐을 각 커버 슬립에 부드럽게 추가하여 용액을 균등하게 분산시합니다. 혈전 형성을 시작하기 위해 각 웰에 20 마이크로리터의 혈전 용액을 추가합니다.실온에서 30~60분 동안 배양한 다음, 각 응고를 2밀리리터의 얼음냉나트륨 소염 버퍼에 2밀리리터로 부드럽게 담근 다음, 실온에서 두 번, 1밀리리터 파이펫을 사용하여 각 세척 후 버퍼를 조심스럽게 제거합니다. 마지막 세척 후, 커버 슬립에 응고 형성의 상태를 확인하고 30 분 동안 얼음에 얼음 차가운 2 % 글루타랄데히드의 2 ~ 3 밀리리터에 혈전을 수정합니다. 인큐베이션이 끝나면 각 우물에서 글루타랄데히드를 부드럽게 제거하고 얼음위에서 보여준 것처럼 신선한 나트륨 캐코디레이트 버퍼로 혈전을 씻습니다.공기 노출로부터 응고를 보호하기 위해 워시 사이에 에탄올을 완전히 제거하지 않고 얼음 에탄올을 완전히 제거하지 않고 얼음에 5분 짜리 얼음 차가운 에탄올 의 등급 시리즈에서 고정 된 혈전을 수화한다. 마지막 100% 에탄올 세척 중에 커버 슬립을 임계 점 건조기 샘플 홀더로 옮기고 각 커버 슬립 사이에 적어도 1 개의 와셔를 배치하고 홀더를 에탄올로 채워진 임계 점 건조기 챔버에 놓습니다. 30분간의 건조 주기 후에는 카본 테이프를 사용하여 개별 스캐닝 전자 현미경 스텁에 커버 슬립을 장착하고 샘플을 진공 스퍼터 코팅 소터의 스퍼터 코팅 챔버로 옮기십시오.그런 다음 초당 4개의 협스트롬에서 25초 동안 20나노미터 미만의 금 팔라듐 또는 기타 전도성 물질에 스퍼터 코트를 코팅하고 4킬로볼트에서 2형 이차 전자 검출기를 장착한 스캐닝 전자 현미경의 샘플을 이미지화한다. 피브린 응고 형성은 용액을 통과하는 빛의 산란을 일으켜 판독 기간이 끝날 때 고원도가 증가합니다. Fibrinogen이 A-베타(42)의 존재에서 배양되면 용액의 탁도가 감소하며 곡선은 피브리노겐의 약 절반높이에 도달한다.A-베타 42 상호 작용 차단제의 존재에서 베타 아밀로이드의 효과는 개량되고 탁도는 혼자 A-베타와 그보다 높다. 차단기의 효과는 A-베타가 없을 때 화합물이 피브린 응고 탁도를 변경하지 않기 때문에 배경 탁도로 인해 나타나지 않습니다. 또한, 피브린 중합화를 방해하는 것으로 알려진 펩티드인 GPRP의 존재내 응고 형성은 억제제의 부재 시 피브린 응고 형성에 비해 현저히 감소된 탁도를 나타낸다.혈전과 염화칼슘이 존재하여 생성된 피브리노겐은 피브린의 길쭉하고 상호 연관된 실과 더 큰 번들로만 피브린 메쉬를 형성합니다. A-베타가 존재할 때, 피브린 스레드는 골재에 여러 끈적끈적한 덩어리로 얇아졌고, 이는 A-베타 유도된 구조적 이상을 나타냅니다. 탁도 분석 결과와 일치하여, A-베타 피브리노겐 상호 작용 차단제의 존재내 응고 형성은 이 치료법으로 더 적은 덩어리가 관찰됨에 따라 A-베타 유도 된 변화로부터 피브린 응고의 구조를 부분적으로 복원한다.응고 탁도 분석 및 스캐닝 전자 현미경 분석 프로토콜은 여러 A-베타 피브리노겐 상호 작용 억제제를 빠르고 재현 가능한 방식으로 평가하기 위해 최적화되었습니다. 그리고 곧 데이터는 시험관 내 및 생체 내 의 추가 연구에 적용 될 수있는 피브린 응고 형성에 대한 귀중한 정보를 제공 할 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

출처: Balczon, R., et al. 녹농균에 의한 폐내피 세포 감염 후 세포독성 아밀로이드를 검출하는 방법. J. Vis. 경험. (2018년)이 비디오는 아밀로이드 베타 시트 구조에 결합하는 형광 염료인 티오플라빈 T를 사용하여 독성 박테리아에 감염된 폐 내피 세포의 배양 상청액에서 아밀로이드를 정량화하는 프로토콜을 보여줍니다. 기준선에 비해 형광의 증가는 배양 상청액에 아밀로이드가 존재함을 나타냅니다.

티오플라빈 T 형광을 이용한 박테리아 감염 유도 아밀로이드 정량

이 비디오는 형광 이미징을 위해 발광 결합 올리고티오펜 염료(헵타머-포르밀 티오펜 아세트산 또는 hFTAA)를 사용하여 조직 절편의 아밀로이드를 염색하는 기술에 대해 설명합니다. 아밀로이드는 β장이 풍부한 비정상 단백질 응집체입니다. 조직 샘플에서 이들을 검출하면 아밀로이드 관련 질환 또는 단백병증의 진단 및 치료에 도움이 됩니다.

아밀로이드 침전물의 hFTAA 염색: 조직 절편에서 형광 이미징을 위해 올리고티오펜 기반 염료를 사용하여 아밀로이드 피브릴을 시각화하는 기술

이 동영상은 용액 탁도 변화의 함수로 불용성 피브린 응고 형성을 모니터링하기 위해 UV 가시광선 분광 광도계를 사용하는 방법을 보여줍니다. UV 가시광선 분광 광도계는 시간 경과에 따른 용액의 흡광도를 측정하며, 이는 불용성 섬유소 응고 형성으로 인한 탁도 변화를 나타냅니다.

피브린 응고 형성 모니터링을 위한 UV-Visible 분광법

출처: Nyström, S., et al., 초분광 컨포칼 현미경 및 형광 수명 이미징에 의한 발광 복합 올리고티오펜으로 염색된 아밀로이드 조직 이미징. J. Vis. 특급 (2017). 이 동영상은 hFTAA 염료를 사용하여 아밀로이드 조직을 반영하는 색상으로 구분된 이미지에서 소형 코어를 파란색/녹색으로, 불안정한 주변부를 빨간색/노란색으로 표시하여 형광 수명 이미징 현미경 또는 FLIM으로 아밀로이드 구조를 분석하는 방법을 보여줍니다.

Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy를 사용한 조직 절편의 아밀로이드 구조 분석

이 원고에서는 질병 상태로 인한 정상 및 비정상 혈전 구조 간의 형태학적 차이를 조사하기 위해 혈액 준비, 컨포칼 현미경 검사 및 용해 속도 분석을 포함한 실험 기술을 제시합니다.

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아 밀 로이드 증 착 다른 질병의 특징은 고 고생 많은 다른 기관. 이 문서에서는 발광 활용된 oligothiophene 형광 형광 현미경 검사 법 기술 함께에서 얼룩의 응용 프로그램을 설명 합니다. 이 얼룩 메서드 검색 및 임상과 과학적인 설정에 단백질의 탐사를 위한 강력한 도구를 나타냅니다.

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간단한 방법은 다음 폐 피 내 막의 감염 세포 독성 amyloids의 생산 위한 녹 농 균에 의해 설명 되어 있습니다.

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