Name: 당뇨병 토끼에서의 뒷 사지의 전 임상 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-02T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 34 s
Description: 배우세요 당뇨병 및 고지혈증 토끼에서 말초 허혈을 유도하는 수술적 방법을 통한 전임상 모델 구축 기법을. 혈관조영술로 허혈 정도와 관류 회복을 평가하여 말초동맥질환 치료제 개발에 활용할 수 있습니다.

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저자 들은 국방부의 의회 의원 지향 연구 프로그램 (DOD CDMRP)을 통해 기금을 기꺼이 인정 한다. W81XWH-16-1-0582)를 ABB 및 RS에 제공 합니다. 저자는 또한 미국 심장 협회 (17IRG33410888), DOD CDMRP (W81XWH-16-1-0580) 및 국립 보건 연구소 (1R21EB024147-11A1; 1R01HL141761-01)를 통해 ABB에 게 자금을 인정 합니다.

동물을 포함 하는 연구는 오스틴에 있는 텍사스 대학의 대학과 휴스턴 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC), 동물 관리 및 사용 검토 사무소 (ACURO)의 UTHealth 과학 센터의 승인을 수행 했다 미국 육군 연구 보호의 의료 연구 및 물질 명령 사무실, 그리고 동물 관리를 위한 NIH 지침에 따라.
1. 당뇨병과 고 지 혈 증의 유도
<ol><li>뉴질랜드 토끼 (4 ~ 6 개월)를 표준 알 팔 파 차 한 컵에서 4 일 동안 콜레스테롤 차 우 0.1%까지 전환 합니다. 1 ~ 5 일에는 표준 차 우를 사용 하 여 1:0, 3:1, 1:1, 1:3 및 0:1의 콜레스테롤 차 우 비율을 각각 사용할 수 있습니다. 0.1%의 콜레스테롤 차 우에 2 주 후, 토끼를 유도 하 여 다음 단계에 설명 된 바와 같이 alloxan 주사를 사용 하 여 당뇨병을</li>
	<li>케 타 민를 사용한 토끼는 22g 카 테 터를 사용 하 여 왼쪽 귀 정 맥에 카 테 터를 도입 하 여 IV 주사를 위한 피하 주사 및 준비를 통해, 35mg/75mg/ml의 acepromazine을 사용 한다.</li>
	<li>초기 혈당 수준 (BGL) 측정을 위한 귀 정 맥 카 테 터의 허브를 통해 토끼에서 혈액 방울을 모으십시오. 모든 표준 미터 사용할 수 있습니다. 토끼에 대 한 정상 포도 당 수준은 일반적으로 80 150 Mg/dl의 범위에 있다.</li>
	<li>시린 지 펌프를 사용 하 여 8 분 동안 천천히이 어 카 테 터를 통해 8 mL의 부피로 생리 식 염 수로 재구성 된 100 밀리 그램/kg에서 alloxan을 주입 하십시오.</li>
	<li>다음 12 시간 동안 BGL이 저 혈당을 모니터링 하기 위해 표준 미터를 사용 하 여 매시간 확인 하십시오.<ol>
<li>토끼를 제한 수단은에 놓습니다.</li>
		<li>2.5% lidocaine/2.5% prilocaine 크림으로 귀 마 취.</li>
		<li>27G 바늘을 사용 하 여 측면 귀 정 맥에서 혈액을 채취 하 고 표준 측정기를 사용 하 여 BGL을 측정 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>처음 7 일 동안 BGL을 하루에 두 번 측정 하십시오. BGL이 350 mg/dl에 도달 하거나 초과 하는 경우 토끼에 게 인슐린 주사를 준다.</li>
	<li>수술 전날 혈관 그램 동안 크기 마커로이 식을 위한 3mm 스테인레스 스틸 공을 준비 하십시오.<ol>
<li>생 검 펀치를 사용 하 여 큰 시트에서 10 mm 원형 조각을 절단 합니다.</li>
		<li>투명 실리콘 실 란 트를 사용 하 여 시트의 중앙에 공을 마운트합니다.</li>
		<li>완전히 밀폐 제와 공을 커버. 최소 24 시간 동안 실 란 트를 치료할 수 있습니다.</li>
		<li>볼을 열린 2 인치 x 3 인치 저밀도 폴 리 에틸렌 봉지에 넣고 멸 균 백에 넣고 에틸렌 옥 사이드 가스로 소독 하십시오.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 수술 용 토끼의 준비
<ol><li>토끼를 피하 주사를 통해 20 ~ 40 밀리 그램/kg 케 타 민 및 midazolam 2mg/kg을 사용 하 여 마 취 시켰다. 토끼를 아이 소 루 레인 (일반적으로 2%)에 1.5%로 놓습니다. 마스크를 사용 하 여 초기 진정 작용을 통해. 3 밀리 그램/kg의 근육 내 주사를 통해 마 취를 유지 하기 위해 alfaxalone의 주사를 제공 하십시오.</li>
	<li>일단 마 취, 마스크를 제거 하 고 수 갑 기관 관을 삽입, 기도에 넣고 호흡기에 연결. 아이 소 루 레인의 1.5%를 계속 해 서 관리 한다.</li>
	<li>기저 화학 패널에 대 한 양쪽 귀에서 중앙 동맥에서 혈액을 수집.</li>
	<li>귀 정 맥 카 테 터 22 G을 옆 귀 정 맥에 놓고 수술 과정을 통해 간결한 링거 용액을 떨어 뜨 리 세요. 대안적으로, 통상의 식 염 수 (0.9% 염화 나트륨)가 사용 된다.</li>
	<li>반대쪽 귀에 있는 횡 정 맥을 사용 하 여 정 맥에 카 테 터를 놓고 alfaxalone 6 밀리 그램/kg/h로 전달 하십시오. 점차적으로 8 mg/kg/h로 alfaxalone 증가 하는 동안 아이 소 루 란을 준비 기간 동안 0.6%로 감소 시킵니다.</li>
	<li>통증과 감염의 위험을 제한 하기 위해, 부 프레 노르 핀 (0.01 밀리 그램/kg) 및 엔로 플 록 사신 (5mg/kg)을 사용 하 여 25 G의 바늘로 피하 주사를 투여 한다.</li>
	<li>목, 오른쪽 및 왼쪽 안쪽 허벅지에 머리를 손질 하 고 다시 클리퍼 (#40 블레이드)를 사용 하 여. 접지 패드와의 접촉을 유지 하기 위해 뒤쪽에서 머리카락이 제거 됩니다.</li>
	<li>각 뒷 다리에 혈압 커 프를 놓고 초기 혈압을 측정 합니다. 단지 측면 표면에 호크 위의 프로브와 무릎 아래에 팔목을 배치 합니다.</li>
	<li>그 뒤에 수술 테이블에 토끼를 배치 하 고 스크럽 및 수술 부위를 드 레이프. 이것은 대 퇴 동맥 접근을 위한 경 동맥 접근을 위한 목 및 안쪽 오른쪽 허벅지를 포함 합니다. 2%의 클 로르 헥 사 딘과 70% 에틸 알콜을 교대로 반복 하 여 살 균 스크럽을 수행 합니다. 이를 세 번 반복한 다음 2%의 클 로르 헥 딘 용액으로 최종 스프레이를 바릅니다.</li>
	<li>3mm의 스테인리스 스틸 볼을 저 농도의 폴 리 에테르 티 엔 백 내부에 살 균 하 여 허벅지 윗부분 근처의 오른쪽 (scrubbed) 다리 위에 놓고 혈관 그램 측정 시 크기 기준으로 사용할 수 있습니다. 수술 시간까지 다리 위에 무 균 드 레이프를 놓습니다. 첫 번째 혈관 그램 동안 멸 균 비닐 봉지 안에 공을 남겨 주세요.</li>
</ol>3. 혈관 조 영 법
<ol><li>오른쪽 일반적인 경 동맥을 노출<ol>
<li>#15 잎을 가진 메스를 사용 하 여 기관에 그냥 횡 절 개를 4 ~ 5cm 길게 하십시오.</li>
		<li>경 동맥을 노출 하 고 작은 Weitlaner 견인 기를 사용 하 여 절 개를 개방 하는 데 무딘 해 부를 사용 합니다. 경 동맥 정 맥 및 미주 신경에서 동맥을 조심 스럽게 분리 합니다. 전형적으로 곡선 메 젠 바 움가 위 및 곡선형 모기 객 혈은 무딘 해 부에 사용 됩니다. 신경에서 경 동맥을 완전히 분리 하 고 동맥을 리 게이트 하 여 합자를 만드는 정 맥을 확인 하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>노출 된 동맥의 근 위 및 말단 말단에 4-0 실크 봉합 사를 사용 하 여 합자를 배치 하십시오. 외과 의사의 매듭 뒤에 4 개의 정사각형 매듭으로 경 동맥 말단을 묶어. 근 위 끝에서 ligaloop을 사용 하 여 필요에 따라 조여 주거나 느슨하게 할 수 있습니다. 노출 된 동맥의 근 위 단 부에 놓이는 ligaloop의 사용은 인트로 듀 서와 카 테 터를 확보 하는 것을 도울 수 있습니다.</li>
	<li>IV를 통해 헤 파 린의 500 IU를 관리 하십시오. 노출 된 경 동맥을 따라 약 0.5 mL의 1% lidocaine를 사용 하 여 혈관을 팽창 시킵니다. 1 개의 처리는 일반적으로 충분 합니다, 그러나 필요에 따라 반복 될 수 있습니다. 메스 또는 아이리스가 위를 사용 하 여 경 동맥을 통해 약 반 방법을 자른 다음 4 인치 와이어 삽입 도구를 동맥에 놓습니다.</li>
	<li>0.014 인치 x 185 cm 가이드 와이어를 삽입 도구를 통과 하 여, 하강 하는 대동맥의 장 골 문장에서 대동맥으로 이송 합니다. 삽입 도구를 제거 하 고 3 층 피그 테일 혈관 그래픽 카 테 터를 와이어 위에 삽입 합니다.</li>
	<li>하강 하는 대동맥의 장 골 문장에서 대동맥 부 위에 2 cm 근 위부로 떠 꺼 머리 카 테 터를 전진.</li>
	<li>카 테 터의 끝을 일곱 번째 요 추와 첫 번째 천 골 척추 사이에 위치 시킵니다. 2 – 4 mL의 조 영제를 수동으로 주입 하 여 카 테 터의 위치를 테스트 합니다.</li>
	<li>혈관 확장을 높이기 위해 카 테 터를 통해 100 μ g의 글 리세 린 내 동맥 내 주사를 관리 합니다.</li>
	<li>카 테 터를 통해 토끼에 게 lidocaine 1%의 0.8 mL를 투여 하 여 혈관의 그램 동안 혈관 확장을 돕습니다. 인젝터 용 튜브를 카 테 터에 부착 하 고 라인의 기포를 제거 합니다. 카 테 터를 통해 자동 혈관 그래픽 인젝터를 사용 하 여 8-9 mL의 콘트라스트 미디어를 주입 합니다.</li>
	<li>혈관 조 영 법을 사용 하 여 뒷 다리의 연속 이미지를 기록 합니다.<ol>
<li>총 8-9 mL의 3 mL/초에서 대비를 주입 하도록 파워 인젝터를 설정 합니다. 초당 6 프레임에서 디지털 뺄셈 혈관 조 영 술을 수행 합니다.</li>
		<li>생성 된 시리얼 이미지를 선택 하 고 약-40% 설정을 사용 하 여 각 혈관 그램의 사진을 변경 하 여 뼈의 모양을 최소화 하 고 대조를 통해 혈관 관류의 완전 한 그림을 캡처합니다. 대 퇴 동맥 결 찰/절제 후의 혈관 흐름의 예 혈관 그램은 도 1에 나타나 있다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 대 퇴 동맥의 분리
<ol><li>메스 (#15 블레이드)를 사용 하 여 오른쪽 대 퇴 동맥을 통해 피부에 세로 절 개를 만듭니다. 절 개 부는 사 타 구니 인 대에서 inferiorly 확장 하는 것을 확인 하는 것은 단지 슬 골 (약 6cm)에 근 위 지역에서 끝나는.</li>
	<li>구부러진 메 첸 바 움가 위 또는 구부러진 모기 객 혈이 있는 무딘 해 부를 사용 하 여 대 퇴 동맥을 노출 시킵니다.</li>
	<li>열 절 개를 유지 하기 위해 Weitlaner 견인 기를 사용 하십시오.</li>
	<li>Lidocaine 1%의 0.5 mL를 추가 하 여 신경 자극을 줄이고 혈관 확장을 촉진 합니다.</li>
	<li>열 등 상 복 부, 깊은 대 퇴, 횡 방향 우회 및 표면 상 복 부가 동맥을 포함 하 여 대 퇴 동맥의 모든 지점과 함께 대 퇴 동맥의 전체 길이를 확보 하기 위해 조직의 둔 부를 계속 합니다 (그림 2a) .</li>
	<li>외부 장 골 동맥 뿐만 아니라 슬와 및 사 골 동맥을 따라 더 해를 분해 한다 (도 2a). 조직 손상 으로부터 보호 하기 위해 정기적으로 염 수로 부위를 적셔 줍니다. 무딘 해 부는 대 퇴 홈을 따라 수행 되는 경우 (근육 사이) 근육을 절단 할 필요가 없다.</li>
	<li>도 2b, C에 도시 된 바와 같이 정 맥과 신경 으로부터 동맥을 조심 스럽게 분리 한다. 동맥을 절단 하는 그들 사이 충분 한 공간을 가진 두 개의 관계를 배치 하 여 4.0 실크 봉합 사로 다이어그램에 의해 표시 된 동맥을 ligate. 이 관계는 외과 의사의 매듭 뒤에 4 개의 정사각형 매듭으로 수행 됩니다.</li>
	<li>작은 멧 젠 바 움가 위를 사용 하 여 결 찰 된 동맥의 두 관계를 절단 합니다. 외부 장 골 동맥의 지점으로 그 근 위 원점 으로부터 대 퇴 동맥을 소비 하는 지점으로 bifurcates, 슬와 동맥을 형성 하 게 된다.</li>
</ol>5. 반복 혈관 조 영 법
<ol><li>4-0 실크 봉합 사를 사용 하 여 3 mm 스테인레스 스틸 볼을 사각형 근육의 윗부분에 부착 합니다. 제자리에 있는 후에 공을 통해 피부를 당깁니다.</li>
	<li>혈관 확장을 높이기 위해 카 테 터를 통해 100 μ g의 글 리세 린 내 동맥 내 주사를 관리 합니다.</li>
	<li>필요 하다 면, 카 테 터를 통해 토끼에 게 lidocaine 1%의 또 다른 0.8 mL를 투여 하 여 혈관 내에서 혈관 확장을 돕습니다.</li>
	<li>자동 혈관 그래픽 인젝터를 사용 하 여 8-9 mL의 콘트라스트 미디어를 주입 합니다.</li>
	<li>3.9 단계에서 설명한 바와 같이 혈관 조 영 술을 수행 한다.</li>
</ol>6. 부상 폐쇄 및 회복
<ol><li>오른쪽 동맥에서 카 테 터를 제거 합니다. 이미 동맥 주위에 위치 하 고 있는 4-0 실크 봉합 사를 사용 하 여 동맥을 묶습니다.</li>
	<li>두 상처가 닫힌 봉합. 연속 봉합 사 패턴의 4-0 폴 리 옥 시 원 또는 3-0 polyglactin 910을 사용 하 여 근육 및 subcuticular 레이어를 닫습니다 ( 재료 표참조). 4-0 폴 리 옥 시 에틸렌 또는 4-0 polyglactin 910를 사용 하 여 피부를 닫고 역방향 절단 바늘에 ( 재료 표참조) 묻혀 있는 연속 subcuticular 봉합 사 패턴. 참고: 가능한 경우, 다이 옥 타 원 모두에 대해 바람직하다.</li>
	<li>25 G 바늘로 주사기를 사용 하 여 절 개에 가까운 0.25% bupivacaine의 피 내 주사를 관리 하십시오. 바늘을 삽입 하 고 바늘을 다시 당기는 동안 0.5 mL를 주사 하십시오. 목에 절 개 (목에 두 개의 주사) 및 다리에 절 개에 대 한 상처의 측면 당 두 개의 주사에 대 한 상처의 측면 당 하나의 주사를 제공 (다리에 4 개의 주사; 총 여섯 주사). 주입 된 총 부피는 3ml(0.5 mL x 6 주사) 이다.</li>
	<li>0.12 밀리 그램/kg에 멜 록 시 캄 및 서방 형 부 프레 노르 핀 0.5의 피하 주사를 투여 한다.</li>
	<li>마 취에서 회복 토끼를 모니터링 합니다. 토끼는 마 취에서 깨어났을 때 자동으로 삼키기 시작 합니다. 삼 킴 반응이 일어나면 기관 내 튜브를 제거 하십시오. 토끼가 심혈 관 기능과 체온을 유지할 수 있을 때까지 가까운 모니터링과 열 지원을 제공 합니다. 그것은 통을 할 수 있게 되 면 그 인클로저에 토끼를 돌려줍니다.</li>
	<li>토끼가 수술 후 차 우를 용납 하지 않는 경우에 피하 식 염 액과 함께 중요 한 배려 규정식의 신선한 야채 및/또는 주사기 먹이를 사용 합니다. 양배추, 브로콜리, 콜 리 플라워, 당근 등 제철 채소를 사용할 수 있습니다. 야채를 조각 하 고 함께 혼합 하 여 토끼가 먹기로 돌아가는 것을 돕습니다.</li>
</ol>7. 모니터링
<ol><li>2.8 단계에서 설명한 바와 같이 양 다리에 혈압을 얻기 위해 2 주마다 토끼를 마 취 시켰다. 혈액 화학 분석에 사용 하기 위해 귀의 중앙 동맥에서 혈액을 수확 합니다. 양자 택일로, 정 맥 또는 두 부 정 맥에서 혈액을 취할. 각 시점에서 약 2 mL를 복용 하십시오. 분석을 위해 표준 혈액 화학 패널을 사용 합니다. 필요한 경우 저밀도 지 단백질 (LDL), 고밀도 지 단백질 (HDL) 또는 헤모글로빈 A1c (HbA1c)에 대 한 테스트를 추가 합니다.</li>
	<li>BGL 측정을 위해 매우 적은 양의 혈액을 섭취 하십시오.</li>
</ol>8. 치료
<ol><li>치료, 담 체 및 가교 링커로 10 개의 주사기를 준비 합니다. 100 μ l의 칼슘 설 페이트 슬러리를 사용 하기 직전에 각각의 주사기를 채운 다음, 성장 인자 또는 알 긴 산 나트륨과 함께 2% 소 듐 알지 네이트의 100 μ l를 주사기의 팁에 가장 근접 하 게 한다.</li>
	<li>다음을 준비 하기 전에 근육에 준비 한 주사를 관리. 이는 알 긴 산이 주사기에서 황산 칼슘과 상호작용 하는 시간을 감소 시킨다. 허벅지에 대 퇴 동맥의 양쪽을 따라 고르게 주사를 공간. 균일 한 주사를 달성 하기 위해, 다른 연구19에 기술 된 바와 같이, 주입을 안내 하는 구멍이 있는 실리콘 시트를 생성 한다. 이것은 시판 되는 실리콘 시트에 구멍을 만들기 위해 생 검 펀치를 사용 하 여 쉽게 준비할 수 있습니다.</li>
</ol>9. 종점 혈관 조 영 술, 안락사, 관류 고정 및 조직 수확
<ol><li>종점 날짜에서 3 단계에서 설명한 바와 같이 혈관 조 영 법을 수행 하 되, 접근을 위해 왼쪽 경 동맥을 사용 한다.</li>
	<li>혈관 조 영 술 후, 동물을 네 롭 시 테이블로 옮기고, 뒷 사지 조직을 보존 하기 위해 관류 고정을 수행 합니다.<ol>
<li>아이 소 루 레인을 3%-4%로 증가 시키고 마 취를 충분히 깊이 확인 하기 위해 발가락 핀치를 수행 합니다.</li>
		<li>정 맥의 헤 파 린 1000-2000 IU를 관리 하십시오.</li>
		<li>흉 곽의 중간 선을 따라 절 개를 만들고 #20 블레이드가 있는 메스를 사용 하 여 다이어 프 램의 길이를 확장 합니다.</li>
		<li>리브 케이지를 노출 시킨 후 리브 커터를 사용 하 여 중간 선 왼쪽의 리브를 자릅니다. 심 박수를 사용 하 여 심장을 노출 시킵니다.</li>
		<li>내부 직경이 1/8 인치이 고 끝에 18G 바늘이 있는 출력 튜브가 있는 펌프를 설정 합니다. 식 염 액으로 라인을 미리 로드 하 고 관류를 위한 별도의 용기에서 제조 된 염 분 및 포 르 말린 적어도 600 mL을 갖는다.</li>
		<li>심장의 꼭대기를 통해 좌 심 실로 펌프에 연결 된 18 G 바늘을 삽입 하십시오. 다른 18 G 바늘 (아무것도 첨부 되지 않음)을 우 아 트리 움에 삽입 하 고 혈액이 네 롭 테이블의 하향 구배에 흘러 들어갈 수 있게 하십시오.</li>
		<li>관류 펌프를 사용 하 여 심장에 생리 식 염 수의 약 500 mL의 흐름을 제어 합니다. 유량 110 mL/min으로 펌프 설정을 사용 하십시오.</li>
		<li>심장에서 나오는 유체가 맑은 되 면, 식 염 수 저장소에서 튜브를 10% 포 르 말린 용액으로 채워진 하나에 옮깁니다. 관류가 제대로 작동 하는 경우 경련은 네 사지 모두에서 발생 합니다. 포 르 말린 용액을 좌 심 실에 약 500 mL의 펌프.</li>
		<li>펌프를 끄고 심장에서 바늘을 제거 하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>#20 잎을 가진 메스로 엉덩이 관절 주위를 절단 하 여 엉덩이에서 양쪽 뒷 다리를 제거 하십시오. 작은 늑 골 절단기를 사용 하 여 사지를 제거 합니다. 비 허 혈 성 사지를 대조 군으로 사용 한다.</li>
	<li>사지를 4 ° c에서 24 시간 동안 포 르 말린에 저장 하 고 4°c에서 70% 에탄올에 저장 하였다.</li>
	<li>조직학 분석을 위해 사지에서 여러 생 검을 복용 하십시오. 우리는 두 팔 다리에 허벅지와 송아지를 가로질러 지역에서 찍은 8 개의 6mm 생 검을 사용 했습니다. 참고: 발목 혈압 측정 및 혈관 조 영 술은 혈 류의 회복을 측정 하는 데 가장 일반적으로 사용 되는 방법 이지만, 다른 방법은 도플러 초음파, 레이저 도플러 이미징, 적외선을 포함 한 동물의 회복을 추적 하는 데 사용할 수 있습니다. 서 모그래피 62, 마이크로 스피어는관류 63,64, 전산화 단층 촬영 및 자기 공명 영상 (MRI)65을 결정 했습니다.</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없습니다.

우리는 토끼에서 당뇨병과 고 지 혈 증으로 뒷 다리 허 혈을 유도 하기 위한 전 임상 모델을 제시 했습니다. 많은 연구에서, 토끼에서 뒷 다리 허 혈을 만드는 데 사용 되는 기술에 모호함이 있습니다. 생쥐에서, 허 혈의 중증도 및 회복은 국 소 빈 혈을 유도 하는데 사용 되는 결 찰 및 기술 위치에 크게 의존 한다. 이 작업에서 제시 된 기술의 중요성은 당뇨병 동물에서 8 주 후에 완전히 회복 되지 않는 허 혈의 일관 된 유도를 허용 한다는 것입니다. 특히, 동물이 더 높은 콜레스테롤과 지방 규정식을 주어질 때, 그들은 사지 혈압 비율의 기준선 수준 근처에 복구할 수 있었습니다. 또한, 높은 지방 다이어트에 동물 간 손상을 제안 하는 간 효소에 변경 했다. 따라서, 더 낮은 수준의 콜레스테롤/지방으로 당뇨병 모델은 사지에서 만성 허 혈의 보다 일관 되 고 관련성 있는 모델 인 것으로 보인다.
당뇨병의 유도, 혈관 조 영 술, 대 퇴 동맥의 외과 결 찰 및 치료 적용을 포함 하 여...

말 초 동맥 질환 (PAD)은 죽 상 경 화성 플 라크 형성의 진행이 신체의 사지에서 혈관의 협 착으로 이어지는 일반적인 순환 장애입니다. 최근 당뇨병, 비만 및 비활동을 포함 한 동맥 경화 증에 대 한 위험 요소의 증가는 혈관 질환1의 보급을 증가 시키는 것으로 이어졌습니다. 현재, 그것은 추정 된다 12%-20% 60 세 이상의 일반 인구의 말 초 동맥 질환2. 말 초 동맥 질환의 주요 결과는 말 초 허 혈의 발달 이며, 가장 일반적으로 하 부 사지에서 발견 됩니다. 심한 경우에, 환자는 중요 한 사지 허 혈을 개발할 수 있습니다, 혈액의 흐름의 부족으로 인해 일정 한 통증이 있는 상태. 중요 한 사지 허 혈을 가진 환자는 진단의 1 년 안에 1 개의 사지가 있는 경우에 50%의 가능성을가지고 있습니다. 게다가, 당뇨병을 가진 환자는 혈관 형성3,4를 위한 내정간섭 뒤에 말 초 동맥 질병 그리고 나쁜 결과의 더 높은 부각이 있습니다. 말 초 허 혈에 대 한 현재 치료법은 죽 절제술 및 스 텐트 팅 또는 외과 우회와 같은 경 피 적 개입을 포함 한다. 그러나, 많은 환자에 대 한 이러한 치료는 단기 혜택을 제공 하 고 많은 주요 수술 절차에 대 한 충분 한 건강 하지 않습니다. 이 작업에서, 우리는 당뇨병 질환 상태의 맥락에서 수술 적 결 찰을 통해 토끼에서 말 초 허 혈의 발생을 통합 하는 말 초 혈관 질환을 표적화 하는 새로운 치료법을 시험 하기 위한 전 임상 동물 모델을 기술 한다.
토끼에서의 뒷 다리 허 혈 모델은 반 세기 이상5,6에 대 한 인간 연구에 폐색 성 혈관 질환 및 임상 전 구체를 위한 생리 적 모델로 사용 되 고 있다. 토끼는 종종 발목과 종 아리 근육의 개발 근육에의 한 말 초 허 혈에 대 한 연구를 위한 바람직한 종으로, 대조적으로 일반적인 큰 동물 모델은 ungulates (hooves를 가진 동물). 몇몇 최근 리뷰는 인간7,8에서 말 초 혈관 질환을 모델링 하 고이 모델 및 다른 사람의 사용을 해결 하였다. 토끼에서의 뒷 다리의 허 혈을 이용한 유사 모델은 성장 인자9,10,11,12,13의 전 임상 연구에서 사용 되었으며, 22,16,18, 20유전자 요법21,23 24일,29일,31일,32 33,34,35,3637, 38, 42,43, 44및 줄기 세포45, 46, 47, 48 ,51은 사지의 치료 적 혈관 신생을 위한 것 이다. 불행 하 게도, 이러한 성공적인 동물 연구를 따라 임상 시험 환자에 대 한 상당한 혜택을 보여주지 않았다52.
이러한 번역 실패에 대 한 이유의 한 가지 설명은 인간 환자에서 말 초 허 혈의 상태는 혈관 신생 신호에 대 한 저항성을 포함 하는 것이 하나53,54,55, 56 , 57 , 58 , 59. 몇몇 연구는 당뇨병과 고 혈당 증에서 혈관 신생 신호 전달 경로의 결점을 보여주었습니다. 당뇨병 및 고 지 혈 증은 헤 파란 황산 염 proteoglycans을 절단 하는 효소의 증가와 헤 파란 황산 염의 손실로 이어질 수 있으며, 성장 인자60 의 치료 적 혈관 형성/동정에 대 한 저항성을 위한 잠재적인 기전을 제시 한다 , 61. 따라서, 말 초 허 혈에 대 한 모델의 주요 특징은 치료가 인간 환자에 존재 하는 질환 상태의 맥락에서 평가 될 수 있도록 치료 적 저항의 양태를 포함 한다.
이 작업에서는 대 퇴 동맥의 외과 적 결 찰을 통해 말 초 허 혈의 토끼 모형을 기술 합니다. 당뇨병과 고 지 혈 증의 유도와 함께 리드 인 기간이 모델에 통합 된다. 우리는 당뇨병 없이 높은 지방 다이어트를 통합 하는 다른 모델에이 모델을 비교 하 고 당뇨병과 고 지 혈 증의 낮은 수준의 모델은 혈관 성장을 감소에 더 효과적 이었다 발견. 우리의 모델은 별도의 그룹에 의해 사용 된 발전을 결합, 말 초 혈관 질환 연구에서 일관 된 결과를 달성 하기 위해 실용적이 고 표준화 된 방법을 제공 하는 것을 목표로.

<table><tbody><tr><td>0.9 % 염화나트륨</td><td>Henry Schein 의료</td><td>1537468 / 1531434</td><td>250 mL 백 / 1000 mL 관개 btl</td></tr><tr><td>1 mL 주사기</td><td>VWR</td><td>BD309628</td><td></td></tr><tr><td>10 mL 주사기</td><td>VWR</td><td>BD309695</td><td></td></tr><tr><td>10 % 포르말린</td><td>Fisher-Scientific</td><td>23-245684</td><td></td></tr><tr><td>18G 바늘</td><td>VWR</td><td>89219-294</td><td></td></tr><tr><td>20G 바늘</td><td>VWR</td><td>89219-340</td><td></td></tr><tr><td>25G 바늘</td><td>VWR</td><td>89219-290</td><td></td></tr><tr><td>27G 바늘</td><td>VWR</td><td>89219-288</td><td></td></tr><tr><td>5 mL 주사기</td><td>VWR</td><td>BD309646</td><td></td></tr><tr><td>5% 포도당</td><td>패터슨 수의학</td><td>07-800-9689</td><td></td></tr><tr><td>Acepromazine</td><td>Patterson 수의학</td><td>VEDC207</td><td></td></tr><tr><td>Alfaxalone</td><td>Patterson 수의학</td><td>07-891-6051</td><td></td></tr><tr><td>알긴산</td><td>시그마-알드리치</td><td>PHR1471-1G</td><td></td></tr><tr><td>알록산 일수화물</td><td>시그마-알드리치</td><td>A7413</td><td></td></tr><tr><td>혈관 조영술 장비</td><td>도시바</td><td>Infinix-i</td><td></td></tr><tr><td>혈관 조영술 인젝터</td><td>메드라</td><td></td><td></td></tr>드 <tr><td>안티 마우스 Ab Alexa 594</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11032</td><td>2차 항체 IHC</td></tr><tr><td>Anti-Rabbit Ab Alexa 488</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11008</td><td>2차 항체 IHC</td></tr><tr><td>A-SMA 항체</td><td>Abcam</td><td>ab5694</td><td>1차 항체 IHC</td></tr><tr><td>Baytril</td><td>Bayer Animal Health</td><td>724089904201</td><td>Enrofloxacin</td></tr><tr><td>혈액 화학 패널</td><td>IDEXX</td><td>2616</td><td>토끼 패널</td></tr><tr><td>혈압 커프</td><td>WelchAllyn</td><td></td><td>Flexiport 일회용 BP 커프 - 유아 크기 7</td></tr><tr><td>혈압 모니터</td><td>Vmed 기술</td><td></td><td>Vmed Vet-Dop2</td></tr><tr><td>Bupivacaine</td><td>Henry Schein Medical</td><td>6023287</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>Patterson 수의학</td><td>42023017905</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine SR</td><td>ZooPharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>황산 칼슘</td><td>CB 미네랄</td><td></td><td>식품 및 제약 등급 USP 및 FCC</td></tr><tr><td>클로르헥시딘 스크럽</td><td>패터슨 수의학</td><td>07-888-4598</td><td></td></tr><tr><td>클로로포름</td><td>Fisher-Scientific</td><td>C298-4</td><td></td></tr><tr><td>콜레스테롤</td><td>시그마-알드리치</td><td>C8503</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>62248</td><td></td></tr><tr><td>귀 정맥 카테터</td><td>Patterson 수의학</td><td>SR-OX165</td><td>Surflo IV 카테터</td></tr><tr><td>기관내 튜브</td><td>Patterson 수의학</td><td></td><td>Sheridan 브랜드, 토끼 크기에 따라 다름</td></tr><tr><td>혈당계</td><td>아마존</td><td></td><td>B001A67WH2 Accu-Chek Aviva</td></tr><tr><td>혈당계 테스트 스트립</td><td>McKesson 의료 외과</td><td>788222</td><td>Accu-Chek Aviva Plus</td></tr><tr><td>Guidewire</td><td>Boston Scientific</td><td>39122-01</td><td></td></tr><tr><td>이발기</td><td>아마존</td><td>B000CQZI3Q</td><td>Oster #40 블레이드</td></tr><tr><td>가열 패드</td><td>신시내티 Subzero</td><td>273</td><td></td></tr><tr><td>가열 패드 펌프</td><td>Gaymar</td><td></td><td>Gaymar T/펌프</td></tr><tr><td>지혈 Fine</td><td>Science Tools</td><td>13009-12</td><td>곡선 모기 지혈</td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Patterson 수의학</td><td></td><td></td></tr><tr><td>삽입 도구</td><td>Merit Medical Systems</td><td>MAP550</td><td>금속 와이어 삽입 도구</td></tr><tr><td>인슐린</td><td>HPB 약국</td><td></td><td>Novalin R & Novalin N</td></tr><tr><td>인슐린 주사기</td><td>McKesson 의료-외과</td><td>942674</td><td></td></tr><tr><td>소개자</td><td>쿡 의료</td><td>G28954</td><td>3F 체크 플로 퍼포머 소개자</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Henry Schein 의료</td><td>1100734</td><td></td></tr><tr><td>케타민</td><td>Patterson 수의학</td><td>856440301</td><td></td></tr><tr><td>젖산 링거</td><td>McKesson 의료-외과</td><td>186662</td><td></td></tr><tr><td>리도카인</td><td>McKesson 의료-외과</td><td>239936</td><td></td></tr><tr><td>리도카인/프릴로카인 크림</td><td>McKesson 의료-외과</td><td>761240</td><td></td></tr><tr><td>Ligaloop</td><td>V. Mueller</td><td>CH117 / CH116</td><td>화이트 미니/옐로우 미니</td></tr><tr><td>마졸라 옥수수 기름</td><td>아마존</td><td>B0049IIVCI</td><td></td></tr><tr><td>Medrad 주사기</td><td>McKesson 의료-외과</td><td>346920</td><td>150mL</td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td>Patterson 수의학</td><td></td><td></td></tr><tr><td>금속 볼 봉합사</td><td>Ethicon-Johnson & Johnson</td><td>K891H</td><td>4-0 실크 C-1 30"</td></tr> <tr><td>Metzenbaum 가위</td><td>정밀 과학 도구</td><td>14019-13</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Henry Schein Medical</td><td>1215470</td><td></td></tr><tr><td>Nitroglycerin</td><td>McKesson 의료 수술</td><td>927528</td><td></td></tr><tr><td>PECAM 항체</td><td>Novus Biologicals</td><td>NB600-562</td><td>IHC</td></tr><tr><td>관류 펌프</td><td>용 기본 항체Masterflex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>피그테일 카테터</td><td>Merit Medical Systems</td><td>1310-21-0053</td><td>3F 피그테일</td></tr><tr><td>폴리다이옥사논(PDS II) 봉합사</td><td>McKesson Medical-Surgical</td><td>129271</td><td>4-0 테이퍼 RB-1(바늘이 봉합사에 임)</td></tr><tr><td>폴리다이옥사논(PDS II) 봉합사</td><td>McKesson Medical-Surgical</td><td>129031</td><td>4-0 리버스 커팅 FS-2</td></tr><tr><td>폴리글락틴 910(Vicryl) 봉합사</td><td>버틀러</td><td>7233-41</td><td>3-0 테이퍼 RB-1</td></tr><tr><td>Polyglactin 910 (Vicryl) 봉합사</td><td>McKesson</td><td>104373</td><td>4-0 역 절단 FS-2</td></tr><tr><td>Rabbit Chow (알팔파)</td><td>LabDiet</td><td>5321</td><td></td></tr><tr><td>토끼 재조정</td>기 <td>VWR</td><td>10718-000</td><td></td></tr><tr><td>Rib Cutters</td><td>V. Mueller</td><td></td><td></td></tr><tr><td>메스</td><td>Fine Science Tools</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>메스 블레이드</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>10015-00</td><td>#15 블레이드</td></tr><tr><td>실크 봉합</td>사 <td>Ethicon-Johnson & Johnson</td><td>A183H</td><td>4-0 실크 넥타이 18"</td></tr> <tr><td>스테인레스 스틸 볼</td><td>McMaster-Carr</td><td>1598K23</td><td>3mm 직경</td></tr><tr><td>수술용 드레이프</td><td>Gepco</td><td>8204S</td><td></td></tr><tr><td>주사기 펌프</td><td>DRE 수의학</td><td></td><td>Versaflow VF-300</td></tr><tr><td>Visipaque 대조 매체</td><td>McKesson 의료-외과</td><td>509055</td><td></td></tr><tr><td>Weitlaner 견인기</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>17012-13</td><td></td></tr></tbody></table>

당뇨병 토끼에서의 뒷 사지의 전 임상 모델

Preclinical Model of Hind Limb Ischemia in Diabetic Rabbits

말 초 혈관 질환은 전세계적으로 수백만 명의 환자에 게 영향을 미치는 광범위 한 임상적 문제입니다. 말 초 혈관 질환의 주요 결과는 허 혈의 발병입니다. 심한 경우에, 환자는 그들은 지속적인 통증과 사지 절단의 증가 위험을 경험 하는 중요 한 사지 허 혈을 개발할 수 있습니다. 말 초 허 혈에 대 한 현재 치료법은 혈액 흐름을 회복 시키기 위해 스 텐트 또는 죽 상 절제술을 사용한 혈관 성형 술과 같은 경 피 개입 또는 우회 수술을 포함 한다. 그러나, 이러한 치료법은 종종 혈관 질환 또는 재 협 착의 지속적인 진행에 실패 하거나 환자의 전반적인 건강 불량으로 인해 금기 된다. 말 초 허 혈을 치료 하는 유망한 잠재적인 접근법은 환자가 담보 혈관 구조를 개발할 수 있도록 치료 적 혈관 신생의 유도를 수반 한다. 이 새로 형성 된 네트워크는 영향을 받는 부 위에 관류를 복원 하 여 말 초 허 혈을 완화 한다. 말 초 허 혈에 대 한 가장 빈번 하 게 사용 되는 전 임상 모델은 대 퇴 동맥 결 찰을 통해 건강 한 토끼에서의 뒷 사지 허 혈의 생성을 활용 한다. 과거에, 그러나, 전 임상 연구의 성공과 말 초 허 혈에 대 한 치료에 관한 임상 시험의 실패 사이의 강력한 단절 되었습니다. 건강 한 동물은 전형적으로 외과 적으로 유발 된 허 혈에 반응 하 여 강력한 혈관 재생을 가지 며, 만성 말 초 허 혈을 갖는 환자의 감소 된 바소 및 재생과는 대조적 이다. 여기서, 우리는 고 지 혈 증 및 당뇨병을 포함 하는 토끼의 말 초 허 혈을 위한 최적화 된 동물 모델을 기술 한다. 이 모델은 더 높은 콜레스테롤 다이어트 모델과 비교 하 여 부수적인 형성과 혈압 회복을 감소 시켰습니다. 따라서, 모델은 말 초 혈관 질환을 동반 하는 일반적인 공동 morbidities 로부터 손상 된 혈관 신생을 가진 인간 환자와 더 나은 상관관계를 제공할 수 있다.

당뇨병의 유도 및 0.1% 콜레스테롤 다이어트의 개시에 따라, 당뇨병 및 콜레스테롤 식이와 함께 토끼에 대 한 총 콜레스테롤은 123.3 ± 35.1 Mg/dl (수 컷 토끼)의 평균 전체 시간 지점과 토끼 였다. 이들 토끼에 대 한 BGL 레벨은 248.3 ± 50.4 Mg/dl (수 컷 토끼) 이었다. 일반적인 토끼의 혈액 화학 및 다리 혈압 비에 대 한 시간 과정은 더 높은 콜레스테롤 다이어트 (1% 콜레스테롤) 아래 토끼에 비해 그림 3 에 나타나 있다. 비 당뇨병 동물에서, 심지어 높은 콜레스테롤, 우리는 최종 시점에서 혈관 그램에서 허 혈 성 사지 및 혈관에서 혈압의 증가 회복 했다 발견 (그림 3). 높은 콜레스테롤/지방 규정식에 있는 동물 또한 지 단백질 A의 증가 수준을 보였다, 간장에 스트레스를 제안. 따라서, 콜레스테롤의 저수준을 가진 당뇨병은 연구 종점에 더 손상 한 관류를 이끌어 냅니다....

우리는 고 지 혈 증 및 당뇨병을 가진 토끼에 있는 말 초 허 혈을 유도 하기 위하여 이용 된 외과 절차를 기술 합니다. 이 수술은 환자의 말 초 동맥 질환에서 경험 하는 조건에 대 한 전 임상 모델 역할. 혈관 조 영 법은 또한 관류의 도입 된 허 혈 및 회수의 정도를 측정 하는 수단으로 서 기술 된다.

Peripheral vascular disease is a widespread clinical problem that affects millions of patients worldwide. A major consequence of peripheral vascular ...

말초 동맥 질환에 대한 재생 치료는 매우 유익할 것이며이 동물 모델은 실험 치료가 인간 환자에서 작동 할 수 있는지 여부를 더 잘 테스트 할 수 있습니다. 우리의 절차는 개선 된 모델을 제시하는 것을 목표로합니다. 당뇨병이나 고지혈증 환자에서 발생하는 치료 저항을 보다 정확하게 복제하는 것입니다.이 동물 모델은 말초 허혈에 대한 새로운 치료법을 테스트하는 데 사용할 수 있으며 허혈에 대한 신생 혈관화를 손상시킨 전임상 모델을 제공합니다. 마취 된 4 ~6 개월 된 당뇨병 및 고지성 토끼에서 뒷발 핀치에 대한 응답의 부족을 확인 한 후, 기관의 오른쪽에 4 ~ 5 센티미터 긴 절개를하고 오른쪽 일반적인 경동맥을 노출하는 무딘 해부를 사용하여 숫자 15 블레이드와 메스를 사용합니다. 작은 Weitlaner re트랙터를 사용하여 절개를 열고 경정맥과 미주 신경에서 경동맥을 조심스럽게 분리하십시오.경동맥이 신경과 경정맥에서 완전히 분리되면, 노출된 동맥의 근위 및 단종 에 4-O 실크 봉합사를 놓고 외과 의사의 매듭과 4 평방 매듭으로 경동맥의 말단 끝을 묶습니다. 근부 끝에, 필요에 따라 혈관 실리콘 넥타이를 사용하여 선박의 조임 또는 느슨해질 수 있습니다. 다음으로, 혈관 확장을 촉진하고 신경 자극을 줄이기 위해 노출 된 경동맥 및 신경을 따라 1 %의 리도카인약 0.5 밀리리터를 적용하십시오.헤파린 IV의 500 개의 국제 단위를 관리하십시오.4 인치 와이어 삽입 도구를 동맥에 놓습니다. 내림차순 대동맥의 일리악 문장에서 대동맥 분비화에 삽입 도구를 통해 0.014 인치를 공급하고 와이어 위에 세 개의 프랑스 피그 테일 혈관 관증 카테터를 진행합니다. 피그테일 카테터를 내림차순 대동맥의 일리악 문장에서 대동맥 분비화까지 2센티미터 의 근위체로 전진시키고, 일곱 번째 요추와 첫 번째 대목 척추 사이에 카테터의 끝을 배치한다.콘트라스트에이전트의 2~4밀리리터를 수동으로 주입하여 카테터의 위치를 테스트합니다. 올바른 위치 지정이 확인되면 카테터를 통해 100 마이크로그램의 니트로글리세린을 자궁 내 주사하여 혈관 확장을 증가시킵니다. 그런 다음 카테터를 통해 0.8에서 1 밀리리터를 투여하여 혈관 확장을 돕고 카테터를 분리된 식염수로 플러시합니다.자동 혈관 주사기용 튜브를 카테터에 부착하여 라인에서 공기를 제거하십시오. 자동화된 혈관 조인터를 사용하여 초당 3밀리리터에서 카테터를 통해 9밀리리터의 콘트라스트 배지를 전달하고 초당 6프레임의 디지털 감산 혈관조영예를 수행합니다. 직렬 이미지를 선택하고 영하 40%의 설정을 사용하여 혈관사진의 이미지를 변경하여 뼈의 모양을 최소화하고 대조적으로 혈관 관류의 전체 그림을 캡처합니다.대퇴 동맥을 분리하려면 숫자 15 메스 블레이드를 사용하여 오른쪽 대퇴 동맥에 세로 피부 절개를하고 절개가 인구 인대에서 열등하게 확장되어 슬개골과 근간이 되는 부위에서 끝납니다. 무딘 해부를 사용하여 대퇴 동맥을 노출하고 Weitlaner re트랙터와 절개를 엽니다. 신경 자극을 줄이고 혈관 확장을 촉진하기 위해 로컬로 1 %의 약 0.5 밀리리터를 적용하십시오.열등한 상복부, 깊은 대퇴, 측면 둘레, 피상적 상복부 동맥을 포함하여 모든 가지와 함께 대퇴동맥의 전체 길이를 해방하기 위해 조직의 무딘 해부를 계속한다. 포라이트 및 수페누스 동맥뿐만 아니라 외부 장악 동맥을 따라 해부하여 조직 손상으로부터 보호하기 위해 식염수로 부위를 주기적으로 수분화합니다. 대퇴골 동맥을 대퇴 정맥과 신경에서 조심스럽게 분리하고 두 개의 4-O 실크 봉합사를 대퇴동맥에 놓고 봉합사 사이에 충분한 공간을 두어 동맥을 절단할 수 있도록 합니다.그런 다음 작은 Metzenbaum 가위를 사용하여 회개 동맥의 두 가지 관계 사이를 잘라냅니다. 동맥이 사페누스와 포플라이트 동맥을 형성하기 위해 분기하는 곳에서 대퇴 동맥을 소비하고, 근교적으로 작동하며, 모든 측면 가지를 묶어 대퇴동맥의 나머지 부분을 과류 동맥 바로 아래에 소비합니다. 반복 혈관 조영술의 경우 3mm 스테인레스 스틸 볼장착된 시트를 사용하십시오.스테인레스 스틸 볼을 사두근 근육의 상부에 4-O 실크 봉합사로 부착합니다. 제자리에 있을 때 피부를 공 위로 당깁니다. 혈관 확장을 증가시키기 위해 카테터를 통해 니트로 글리세린 100 마이크로 그램의 내동맥 주입을 관리합니다.필요한 경우, 혈관 확장을 돕고 헤파린화 된 식염수로 플러시하기 위해 카테터를 통해 1 % 리도카인의 0.8 - 1 밀리리터를 투여하십시오. 동일한 설정에서 자동화된 혈관 조인터를 사용하여 또 다른 9밀리리터의 콘트라스트 배지를 주입합니다. 그런 다음 설명한 대로 다른 혈관 검사를 수행합니다.절차가 끝나면 오른쪽 동맥에서 카테터를 제거하고 동맥 주변에 이미 배치 된 4-O 실크 봉합사를 사용하여 동맥을 묶습니다. 이어서 4-O 폴리디옥사논 또는 3-O 폴리글락틴 910 봉합사를 테이퍼 바늘에 연속 봉합봉 패턴으로 닫고 4-O 폴리디옥사논 또는 4-O 폴리글락틴 910 봉합사를 사용하여 매장된 연속 피자 수목 패턴의 역절단 바늘에 봉합사를 사용한다. 비 당뇨병 동물에서는 콜레스테롤이 높더라도 당뇨병 동물에 비해 마지막 시점에서 혈관그램의 허혈성 사지 및 혈관에서 혈압이 회복됩니다.조직학적으로, 부종 및 허혈성 손상과 일치하는 근육 구조의 변화는 근육 섬유의 손실 또는 중단으로 관찰된다. 또한, PECAM 1 및 알파 평활근 액틴에 대한 면역염색을 조직 섹션에서 혈관의 수와 크기를 식별하는 데 사용될 수 있다. 도플러 초음파, 레이저 도플러 이미징, 적외선 전서조 및 MRI와 같은 다른 이미징 방법을 추가하여 허혈성 사지 재퍼퓨전의 추가 모니터링을 위해 첨가될 수 있다.치료 저항의이 통합으로, 우리의 모델은 말초 동맥 질환에 대한 새로운 치료의 평가를 진행, 병들 상태에서 허혈을 더 정확하게 모방.

preclinical-model-of-hind-limb-ischemia-in-diabetic-rabbits

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

일방적 hindlimb의 국소 빈혈의 유도에 대한 수술은 레이저 도플러 재관류 이미징에 의해 국소 빈혈의 확인과 증명합니다.

Hindlimb 국소 빈혈의 Murine 모델

우리는 중앙 동맥과 신경 및 두개골 neurovascular 번들을 나누어 토끼 허혈성 귀에 상처 모델을 만들려면 최소한 침략적 기법을 개발했습니다. 피하 터널 그러면 모두 피하 조직이 생기죠. 이 절차는 최소한의 피부에 혼란을 초래하고 안전하게 당뇨병 동물에서 사용할 수 있습니다.

허혈성 상처 모델 생산을위한 단순화된 테크닉

이 동영상은 토끼 모델에서 혈관 관류를 시각화하기 위해 하행 대동맥에 조영제를 주입하여 혈관 조영술을 수행하는 기술을 설명합니다. 이 기술은 막힌 혈관과 회복 중 치료 후의 관류를 이해하는 데 도움이 됩니다.

혈관 조영술을 통한 혈관 관류 평가: 토끼 모델에서 혈관 관류를 시각화하기 위해 하행 대동맥에 조영제를 도입하는 기술

이 비디오에서는 토끼의 대퇴동맥 결찰을 통해 말초 허혈을 유도하는 수술 절차를 보여줍니다. 이 방법은 말초 혈관 질환 연구를 위한 효과적인 실험 모델을 제공합니다.

말초 허혈의 실험적 모델: 토끼에서 대퇴 동맥 결찰을 통해 말초 허혈을 생성하는 절차

마우스에서 뒷다리 허혈의 외과적 유도는 혈관 신생을 검사하는 데 유용하지만, 현저한 허혈 유발 조직 괴사를 나타내는 특정 근친 마우스 균주에서는 손상됩니다. 점진적인 동맥 폐색의 유도를 통해 이 문제를 회피하기 위해 아메로이드 수축기를 사용하여 아급성 사지 허혈을 유도하는 방법이 설명되어 있습니다.

급성 및 아 급성 쥐 뒷다리 국소 빈혈하는 방법

동맥 경화 증의 동물 모델 메커니즘을 이해 하 고 패 개발 또는 파열, 산업화 된 세계에서 죽음의 주요 원인이 방지 하기 위해 새로운 접근을 조사 하기 위해 필수적입니다. 이 프로토콜 풍선 부상과 콜레스테롤 풍부한 다이어트의 조합을 사용 하 여 토끼 장 골 동맥에 동맥 경 화성 플 라크를 유도.

가속된 동맥 경화의 토끼 모델: 장 골 동맥 풍선 상해의 방법 론 적 관점

본 프로토콜은 정맥 이식편을 사용하여 정맥 혈관 화 수술 후 정맥 심상 증식을 감쇠하는 전략을 개발하기 위한 동맥 혈압에 정맥을 복종시킴으로써 정맥 친혈증을 실험적으로 만드는 것을 목표로 합니다.

정맥 이식편을 사용하여 동맥 혈압하에서 인티맥 증식을 평가하는 재혈관 외과를 모방한 토끼 정맥 중개 모델

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지속적인 동맥 혈압 기록을 통해 다양한 혈역학 적 매개 변수의 영향을 조사 할 수 있습니다. 이 보고서는 뇌졸중 병태생리학, 다양한 혈역학적 요인의 영향 및 새로운 치료 접근법의 평가를 결정하기 위해 허혈성 뇌졸중의 대규모 동물 모델에서 지속적인 동맥 혈압 모니터링의 적용을 보여줍니다.

허혈성 뇌졸중의 토끼 모델에서 혈압의 실시간 모니터링 및 조절

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배우세요 당뇨병 및 고지혈증 토끼에서 말초 허혈을 유도하는 수술적 방법을 통한 전임상 모델 구축 기법을. 혈관조영술로 허혈 정도와 관류 회복을 평가하여 말초동맥질환 치료제 개발에 활용할 수 있습니다.

당뇨병 토끼에서의 뒷 사지의 전 임상 모델

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