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JoVE Journal Medicine
Advanced Imaging of Lung Homing Human Lymphocytes in an Experimental In Vivo Model of Allergic Inflammation Based on Light-sheet Microscopy

고급 폐 유도 빛 시트 현미경 검사 법에 따라 알레르기 염증의 Vivo 모델에서 실험에서 인간 림프 톨의 이미징

Full Text
8,224 Views
10:39 min
April 16, 2019

DOI: 10.3791/59043-v

Anja Schulz-Kuhnt1, Sebastian Zundler1, Anika Grüneboom2, Clemens Neufert1, Stefan Wirtz1, Markus F. Neurath1, Imke Atreya1

1Department of Medicine 1,University Hospital of Erlangen, 2Department of Medicine 3,University Hospital of Erlangen

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This protocol enables the imaging and quantification of lung-homing human immune cells in a mouse model of allergic inflammation. It provides insights into T cell lung homing under in vivo inflammatory conditions.

Key Study Components

Area of Science

  • Immunology
  • Inflammatory Diseases
  • Translational Research

Background

  • Understanding T cell lung homing is crucial for developing therapies for pulmonary diseases.
  • Activated immune cells accumulate in lung tissue during chronic inflammation.
  • Current methods lack precision in imaging these processes.
  • This protocol addresses these gaps by utilizing light-sheet fluorescence microscopy.

Purpose of Study

  • To characterize the lung homing capacity of primary human lymphocytes.
  • To provide a method for imaging immune cell infiltration in lung tissue.
  • To support research in identifying new therapeutic targets for allergic and inflammatory lung diseases.

Methods Used

  • Use of a micropipet to deliver papain solution into the nostril of anesthetized mice.
  • Density gradient separation of human peripheral blood using Ficoll medium.
  • Light-sheet fluorescence microscopy for imaging cleared lung tissue.
  • Quantification of immune cell accumulation in the lungs.

Main Results

  • Successful imaging of human immune cells in the lungs of mice.
  • Demonstrated the influence of inflammatory conditions on T cell homing.
  • Provided a reliable method for studying immune cell behavior in vivo.
  • Highlighted the potential for identifying new therapeutic targets.

Conclusions

  • This technique is valuable for immunological research in chronic lung diseases.
  • It allows for a better understanding of T cell dynamics in inflammatory environments.
  • The protocol can aid in the development of optimized therapies for pulmonary conditions.

Frequently Asked Questions

What is the significance of T cell lung homing?
T cell lung homing is crucial for understanding immune responses in pulmonary diseases and developing targeted therapies.
How does this protocol improve upon existing methods?
This protocol utilizes light-sheet fluorescence microscopy for precise imaging of immune cells in the lung, which is more effective than traditional methods.
What type of mice are used in this study?
C57 black 6J mice are used for the experiments.
What is the role of papain in this protocol?
Papain is used to induce inflammation in the mouse model, facilitating the study of immune cell behavior.
Can this method be applied to other types of immune cells?
Yes, this method can potentially be adapted to study various immune cell types in different inflammatory contexts.
What are the implications of this research?
The findings may lead to new therapeutic strategies for managing allergic and inflammatory lung diseases.

여기 소개 된 프로토콜 vivo에서 염증 성 조건 하에서 기본 인간 림프 톨의 폐 유도 용량 특성을 수 있습니다. 알레르기 염증의 마우스 모델에서 adoptively 전송된 인간의 면역 세포의 폐 침투 몇 군데 하 고 화학적으로 허가 폐 조직의 빛 시트 형광 현미경 검사 법에 의해 측정할 수 있습니다.

우리의 기술은 T 세포 폐 호밍의 과정에 흥미 진진한 통찰력을 제공하는 생체 내 염증 조건에서 폐 축적 된 인간 면역 세포의 정확한 이미징을 허용합니다. 이 프로토콜은 T 세포 폐 호밍에 대한 번역 연구를 지원하고 염증성 또는 알레르기 성 폐 질환의 최적화 된 치료를위한 새로운 표적의 식별에 도움이 될 수 있습니다. 특히, T세포 폐호밍에 대한 질병특이적 면역세포 특성, 폐조직 조직 및 염증성 밀리우의 영향을 고려하는 능력은 이 방법을 매우 유리하게 만든다.

전반적으로, 우리의 기술은 수시로 활성화된 면역 세포의 압도적인 조직 축적에 의해 구동되는 만성 선동적인 폐 질병의 필드에 있는 면역학 연구를 위한 높은 가치입니다. 적어도 16그램, 6주 된 마취 C57 블랙 6J 마우스에서 발가락 핀치에 대한 반응의 부족을 확인한 후, 마이크로 파이프를 사용하여 갓 준비된 파파인 10 마이크로리터를 3일 연속으로 마우스의 한 콧구멍으로 천천히 전달한다. 마지막 papain 행정 다음 날, 10 층 건강한 자원 봉사자로부터 인간의 말초 혈액 아래 Ficoll 배지의 층 10 밀리리터는 원심 분리에 의한 밀도 그라데이션 분리를 위해 PBS에서 1 대 2 비율로 미리 희석됩니다.

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