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비통합 방법을 사용하여 복부 피부에서 성인 인간 진피 섬유 아세포의 분리 및 유도 만능 줄기 세포의 생성
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JoVE Journal Bioengineering
Isolation of Adult Human Dermal Fibroblasts from Abdominal Skin and Generation of Induced Pluripotent Stem Cells Using a Non-Integrating Method

비통합 방법을 사용하여 복부 피부에서 성인 인간 진피 섬유 아세포의 분리 및 유도 만능 줄기 세포의 생성

Full Text
11,440 Views
10:52 min
January 19, 2020

DOI: 10.3791/60629-v

Immacolata Belviso*1, Anna Maria Sacco*1, Veronica Romano1, Fabrizio Schonauer1, Daria Nurzynska1, Stefania Montagnani1, Franca Di Meglio1, Clotilde Castaldo1

1Department of Public Health,University of Naples Federico II

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This protocol outlines the generation of autologous human-induced pluripotent stem cells (iPSCs) from human dermal fibroblasts. It utilizes non-modified RNAs and immune evasion factors to enhance reprogramming efficiency without viral methods.

Key Study Components

Area of Science

  • Cell Reprogramming
  • Stem Cell Biology
  • Regenerative Medicine

Background

  • iPSCs are crucial for regenerative medicine and disease modeling.
  • Traditional methods often involve viral integration, which can pose risks.
  • This protocol aims to provide a safer, non-viral approach.
  • Understanding the reprogramming process is essential for effective application.

Purpose of Study

  • To develop a protocol for generating iPSCs from dermal fibroblasts.
  • To facilitate research in regenerative medicine and disease modeling.
  • To provide a method accessible to researchers with limited experience.

Methods Used

  • Isolation of human dermal fibroblasts from skin punch biopsies.
  • Application of non-modified RNAs for reprogramming.
  • Incorporation of immune evasion factors to reduce cellular defenses.
  • Visual demonstrations to aid in the protocol execution.

Main Results

  • Successful generation of xeno-free iPSC colonies.
  • Protocol allows for efficient reprogramming with minimal contamination risks.
  • Autologous iPSCs can be utilized for various applications.
  • Guidance provided to avoid common experimental mistakes.

Conclusions

  • The protocol offers a reliable method for generating iPSCs.
  • It supports advancements in regenerative medicine and disease research.
  • Accessible to researchers with varying levels of experience.

Frequently Asked Questions

What are induced pluripotent stem cells (iPSCs)?
iPSCs are stem cells that can be generated directly from adult cells and have the ability to differentiate into any cell type.
Why is a non-viral method preferred for reprogramming?
Non-viral methods reduce the risk of insertional mutagenesis and other complications associated with viral vectors.
What is the significance of using autologous cells?
Autologous cells minimize the risk of immune rejection and enhance the compatibility of the stem cells for therapeutic applications.
How can iPSCs be used in disease modeling?
iPSCs can be differentiated into specific cell types to study disease mechanisms and test potential therapies in a laboratory setting.
What precautions should be taken during the reprogramming process?
It is essential to prevent microbial contamination and ensure the integrity of RNA used in the reprogramming process.

세포 재프로그래밍은 다능성 세포 상태를 조절하고 유지하는 주요 유전자의 도입을 요구합니다. 기술된 프로토콜은 바이러스/통합 방법 없이 인간 진피 섬유아세포로부터 유도된 만능 줄기 세포(iPSCs) 콜로니의 형성을 가능하게 하지만, 세포 방어 메커니즘을 감소시키는 면역 회피 인자와 결합된 비변형 RNA(NM-RNAs)를 사용한다.

다음 프로토콜은 피부 펀치 생검으로부터 분리된 인간 진피 섬유아세포의 빠르고 효율적인 재프로그래밍을 통해 자가 인간 유도 만능 줄기 세포를 생성하는 지침을 제공합니다. 절차는 세포 재프로그래밍에 있는 거의 또는 전혀 경험이 없는 연구원에 의해 수행될 수 있고 적당한 조정으로, xeno 자유로운 유도한 만능 줄기 세포의 제품을 허용합니다. 자가 IPS 세포는 재생 의학 응용 프로그램을 위해 그리고 근본적인 분자 기계장치에 조사하고 더 특정 한 치료를 개발하기 위하여 유전 무질서 또는 암 같이 질병을 모델링하기 위하여 이용될 수 있습니다.

워크로드가 높습니다. 시약 및 재료가 준비되어야하는 단계를 포함하여 실험을 신중하게 계획하기 전에 프로토콜을 연구하는 것이 매우 유용합니다. 절차의 시각적 데모는 거의 또는 전혀 경험이없는 연구가 가능한 미생물 및 RNA 오염과 관련된 일반적인 실수를 피하면서 세포 격리 및 재프로그래밍을 수행하는 데 도움이됩니다.

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생명 공학 문제 155 유도 만능 줄기 세포 (iPSCs) 세포 재프로그래밍 진피 섬유 아세포 비 변형 RNA NM-RNAs 통합 무료 방법 세포 배양 인간 재생 의학

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