식품 철의 생체이용률 측정을 위한 Caco-2 세포 생물학적 분석

철(Fe) 생체이용률에 대한 Caco-2 세포 생물학적 분석은 식품, 식품, 보충제, 식사 및 다이어트 요법에서 Fe 생체이용률을 평가하기 위한 비용 효율적이고 다재다능한 접근 방식을 나타냅니다. 인체 실험을 통해 철저하게 검증된 이 제품은 Fe 생체이용률 연구를 위한 최첨단 기술을 대표합니다.

철의 생체 이용률에 대한 지식은 식품에 함유된 철분의 영양 품질을 평가하는 데 필수적입니다. Caco-2 세포 생물학적 분석은 이러한 중요한 연구 요구를 충족하기 위해 개발되었습니다. 이 생물학적 분석은 다양한 식단에서 철의 생체 이용률을 결정하기 위한 비용 효율적이고 처리량이 많은 접근 방식입니다.

철의 생체 이용률에 영향을 미치는 요인을 특성화하고 in vivo 연구 목표를 개선하는 데 사용할 수 있습니다. 절차를 시연하는 것은 제 연구실의 연구 기술자인 Yongpei Chang이 맡을 것입니다. 먼저 Caco-2 세포를 7-10일 동안 배양하고 충분한 세포를 사용할 수 있게 되면 콜라겐이 코팅되지 않은 플라스크에 세포를 파종합니다.

그런 다음 7일 동안 플라스크에서 세포를 성장시키고 격일로 배지를 변경합니다. 7일째에는 다중 웰 플레이트를 파종하기 위해 셀을 사용합니다. 50의 조밀도에 Caco-2 세포를 씨를 뿌린다, 6개의 좋은 교원질에 의하여 입힌 판에 있는 센티미터 평방 당 000의 세포

HEPES, FBS 및 1% 항생제 항진균 용액이 보충된 DMEM을 플레이트에 추가합니다. 그런 다음 섭씨 37도에서 12일 동안 5%의 이산화탄소로 배양합니다. 일관된 일일 일정으로 최소 이틀에 한 번씩 매체를 계속 변경하십시오.

그런 다음 파이프, 항생제 항진균 용액, 하이드로 코르티손, 인슐린, 셀레늄, 트리요오드 티로닌 및 표피 성장 인자를 보충 한 최소 필수 배지를 준비합니다. 배양 배지를 이 준비된 배지 2ml로 교체하십시오. 다음 날에는 pH 7에서 최소 필수 배지 1ml로 교체하십시오.

이제 산성 세척 투석막이 장착된 실리콘 O-링을 사용하여 멸균된 인서트 링을 만듭니다. 13일째에는 냉장고에서 인서트를 제거하고 물을 빼고 0.5몰 염산으로 교체하십시오. 사용하기 전에 최소 1시간 동안 층류 후드에 두십시오.

그런 다음 0.5몰의 염산을 배출하고 멸균 18메가옴의 물로 헹굽니다. 사용할 준비가 될 때까지 층류 후드에 멸균 18메가옴의 물에 보관하십시오. 6개의 웰 플레이트의 세포가 들어 있는 웰에 링을 삽입하여 2개의 챔버 시스템을 만든 다음 인서트가 있는 플레이트를 인큐베이터로 되돌립니다.

판크레아틴-담즙 용액을 준비하기 위해 가용화된 판크레아틴과 담즙 추출물에 약한 양이온 교환 수지 87.5g을 넣고 실온에서 30분 동안 셰이커를 사용하여 성분을 혼합합니다. 슬러리를 큰 기둥에 붓고 기둥을 배수합니다. 그런 다음 컬럼 용리액을 원심분리합니다.

멸균 50ml 원심분리기 튜브에서 샘플의 무게를 잰다. 염산을 사용하여 pH를 조정하고 140 밀리몰 염화나트륨과 5 밀리몰 염화칼륨을 함유 한 생리 식염수 10 밀리리터를 첨가합니다. 그런 다음 준비된 돼지 펩신 용액 0.5ml를 샘플에 첨가하여 위 소화 과정을 설정합니다.

그런 다음 섭씨 37도에서 1시간 동안 부드러운 설정으로 흔들 쉐이커에서 배양하고 1.0몰 중탄산나트륨으로 pH를 5.5에서 6.0으로 조정하여 각 샘플의 장 소화 과정을 시작합니다. 각 샘플 튜브에 판크레아틴 담즙 용액 2.5ml를 추가하고 1.0몰 중탄산나트륨으로 pH를 6.9-7.0으로 조정합니다. 140 밀리몰의 염화나트륨과 5 밀리몰의 염화칼륨이 함유된 용액을 사용하여 각 튜브에 정확히 15g의 총 물질이 포함되도록 액체를 추가합니다.

이제 각 장 소화물 1.5ml를 6개의 웰 배양판의 Caco-2 세포가 들어 있는 웰의 상부 챔버로 옮깁니다. 플레이트 덮개를 교체하고 섭씨 37도에서 5% 이산화탄소를 넣은 흔들 셰이커에서 2시간 동안 분당 6회 진동으로 배양합니다. 다이제스트가 있는 인서트 링을 제거합니다.

그런 다음 pH 7의 최소 필수 배지 1ml를 각 웰에 추가하고 플레이트를 22시간 동안 인큐베이터에 다시 보관합니다. 이제 세포 배양 배지를 제거하고 세포 모노 층에 18 메가 옴 물 2 밀리리터를 추가합니다. 초음파 처리기로 옮기고 세포 단백질 및 세포 페리틴 분석을 위해 전체 세포 용해물을 마이크로 원심분리 튜브로 수확합니다.

manteca 품종은 2년 연속 수확 연도 동안 흰색과 빨간색으로 모델링된 색상 등급의 참조 대조군에 비해 더 높은 철 가용성을 보여주었습니다. 흰콩과 황콩 품종의 철분 생체 이용률은 가루로 가공한 후 증가한 것으로 나타났습니다. 그러나 철의 생체 이용률은 크랜베리, 적색 강장 및 검은색 품종에서 감소를 보였습니다.

적절한 Caco-2 세포 단층 배양은 이 생물학적 분석의 성공적인 사용을 위해 필수적입니다. 성장 및 유지의 세부 사항에 대한 정확한 주의는 생물학적 분석의 일관된 반응의 핵심입니다. 이 모델은 다른 접근 방식의 단점과 높은 비용을 무효화하고 연구자가 메커니즘을 식별하고 철의 생체 이용률을 억제하고 촉진하는 요인을 보다 완벽하게 평가할 수 있도록 합니다.