Name: 향상된 뇌 형광 염색 및 면역 염색을 위한 초파리 머리의 직접 동결 절편 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-07T14:10:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
Description: 학습하세요 Drosophila 뇌 조직 처리 프로토콜을 사용하여 형광 및 면역 염색을 통한 신경 구조 시각화 방법을. 이 단순화된 기법은 복잡한 해부 없이 정량적 이미징 분석을 가능하게 합니다.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>1000 uL 피펫</td><td>Eppendorf</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>1000 uL 피펫 팁</td><td>Olympus Plastics</td><td>23-165R</td><td></td></tr><tr><td>10X 인산염 완충 식염수(PBS)</td><td>Fisher</td><td>J62036.K7</td><td>ph=7.4</td></tr><tr><td>200 Proof Ethanol</td><td>Decon Laboratories</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>20X Tris 완충 식염수</td><td>Thermo Scientific</td><td>J60877.K2</td><td>pH=7.4</td></tr><tr><td>AF750 염소 안티 마우스 2차 항체</td><td>Alexa Fluor</td><td>A21037</td><td></td></tr><tr><td>안티 롤 유리</td><td>IMEB</td><td>AR-14047742497</td><td></td></tr><tr><td>ApoE 마우스 1차 항체</td><td>Santa Cruz</td><td>SC13521</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민</td><td>Fisher</td><td>9048-46-8</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기 튜브 1.5mL</td><td>Fisher</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>충전 슬라이드</td><td>Globe Scientific</td><td>1415-15</td><td></td></tr><tr><td>저온 절편 금형</td><td>Fisher</td><td>2363553</td><td></td></tr><tr><td>저온 유지 장치</td><td>Leica</td><td>CM 3050 S</td><td></td></tr><tr><td>저온 유지 장치 블레이드</td><td>C.L. Sturkey</td><td>DT554N50</td> 증류수 드라이 아이스???<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>???</td><td></td></tr><tr><td>Fine Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Fly Pad</td><td>Tritech Research</td><td>MINJ-DROS-FP</td><td></td></tr><tr><td>경화 장착 매체 Dapi</td><td>Vectashield</td><td>H-1800</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimtech</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>현미경</td><td>Olympus</td><td>SZ61</td><td></td></tr><tr><td>Nile Red&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>N3013</td><td></td></tr><tr><td>최적 절단 온도 화합물</td><td>Fisher</td><td>4585</td><td></td></tr><tr><td>오비탈 셰이커</td><td>OHAUS</td><td>SHLD0415DG</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드 20%</td><td>전자 현미경 과학</td><td>15713</td><td></td></tr><tr><td>면도날</td><td>Gravey</td><td>#40475</td><td></td></tr><tr><td>스프링 가위</td><td>미세 과학 도구</td><td>15000-10</td><td></td></tr><tr><td>설탕</td><td>피셔</td><td>S5-500</td><td></td></tr></tbody></table>

향상된 뇌 형광 염색 및 면역 염색을 위한 초파리 머리의 직접 동결 절편

Direct Cryosectioning of Drosophila Heads for Enhanced Brain Fluorescence Staining and Immunostaining

위에서 설명한 방법을 사용하면 성체 파리 뇌의 형광 이미징을 지루한 해부 없이 안정적으로 수행할 수 있습니다. 그림 1에서 간단히 볼 수 있듯이 이 방법은 간단하며 모든 시편, 장비 및 재료를 쉽게 구할 수 있는 경우 신속하게 수행할 수 있습니다. 또는 OCT 금형 단계에서 -80°C 보관을 사용하면 몇 주 후에 사용할 수 있도록 시편을 보관할 수 있습니다. 연구자들은 간단한 해부 및 임베딩 기술을 배우기 위해 오랜 시간 훈련을 받을 필요가 없으므로 이 방법을 쉽게 이용할 수 있습니다.
이 방법을 사용하여 수행된 형광 현미경 검사의 예는 그림 2A-D에서 볼 수 있습니다. 항체 태그(ApoE)와 형광 염색(Nile Red)의 ...

Immunostaining Drosophila melanogaster brains is essential for exploring the mechanisms behind complex behaviors, neural circuits, and protein expression ...

direct-cryosectioning-drosophila-heads-for-enhanced-brain

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 비디오는 신경교세포의 단세포 이미징을 위한 형질전환 초파리 뇌의 면역형광 염색을 보여줍니다. 뇌는 신경교세포 특이적 재조합효소 시스템의 제어 하에 항원 항원결정기의 다양한 조합과 융합된 막 표적 단백질을 발현합니다. 분리되고 고정된 뇌는 항원 항원결정기에 특이적인 1차 항체로 염색된 후 형광단 접합 2차 항체로 염색됩니다. 이 라벨링을 통해 다양한 뇌 영역에 걸쳐 서로 다른 신경교세포 하위 집단을 동시에 이미징할 수 있습니다.

신경교세포의 단세포 이미징을 위한 초파리 뇌의 면역형광 염색

면역염색은 조직 내의 특정 세포 유형과 단백질을 시각화하는 효과적인 기술입니다. 초음파 처리를 활용함으로써, 여기에 설명된 프로토콜은 면역 염색 전에 후기 단계의 배아와 유충에서 Drosophila melanogaster 조직을 해부해야 할 필요성을 완화합니다. 우리는 포름알데히드가 고정된 전체 산 유충의 면역 염색을 위한 효율적인 방법론을 제공합니다.

늦게 단계 배아와 애벌레의 초음파 - 촉진 면역 형광 염색<em&gt; 초파리</em&gt; 조직<em&gt; 제자리에서</em

성인 초파리 뇌는 신경 회로, 높은 뇌 기능, 복잡한 질환 연구를위한 유용한 시스템이다. 효율적인 방법은 뇌 기반 연구를 용이하게 작은 비행 머리에서 전체 뇌 조직을 해부한다. 여기에 우리가 잘 보존 된 형태와 성인 두뇌의 간단한 한 단계 해부 프로토콜을 설명합니다.

간단한 한 단계 성인의 전체 마운트 준비에 대한 해부 프로토콜<em&gt; 초파리</em&gt; 두뇌

이 프로토콜 설명 해 부와 성인 초파리 melanogaster 의 immunostaining 뇌 조직. 특히,이 프로토콜은 신경 개발의 많은 측면을 기본 일반적인 원리를 밝히기 위해 정확 하 게 사용할 수 있는 예제 신경 하위 집합으로 초파리 버섯 몸과 포토 리셉터 뉴런의 사용을 강조 표시 합니다.

해 부 및 Immunofluorescent 얼룩의 버섯 몸과 성인 초파리 melanogaster 두뇌 신경 세포 포토 리셉터

셀 다른 형태학을 표시 하 고 그들의 이웃과 상호 작용의 다양 한 설정. 이 프로토콜에는 단일 세포의 형태를 공개 하 고 확고 Gal4/UAS 식 시스템을 사용 하 여 세포 세포 상호 작용을 조사 하는 방법을 설명 합니다.

높은 해상도 단일 셀 형태학 초파리 에서 명과의 세포 상호 작용을 공부 하 고 다 색 FlpOut 기술의 응용

단백질 집계 및 autophagic 플럭스의 초파리 모델의 중앙 신 경계에서의 형광 이미징-기반 세포 생물학 연구에서 양적 데이터를 추출 하는 간단 하 고 융통성 있는 워크플로 개발 했습니다. neurodegeneration입니다.

ImageJ를 사용 하 여 붙일 태그가 단백질의 편견된 분석 통해 초파리 에서 Neurodegeneration의 양적 세포 생물학

이 문서는 초파리 번데기 망막 조직의 immunohistochemistry, 서쪽 분석 및 RNA 추출에 대 한 처리에 대 한 프로토콜 함께 해 부에 대 한 수술 메서드를 제공 합니다.

Immunohistochemistry, 서쪽 분석 및 RNA 격리에 대 한 초파리 번데기 망막의 해 부

Expansion-Assisted Iterescence In Situ Hybridization(EASI-FISH)은 확장 현미경 검사와 FISH(Fluorescence in situ hybridization)를 결합하여 두꺼운 조직에서 여러 유전자의 발현을 검출하는 강력한 기술입니다. 이 프로토콜은 이 방법의 최근 발전과 온전한 초파리 중추 신경계를 라벨링하기 위한 적응을 간략하게 설명합니다.

Expansion-Assisted Iterescence In Situ Hybridization을 사용한 온전한 초파리 뇌의 유전자 발현의 다중 검출

초파리 심장 절편 및 형광 이미징 프로토콜은 심장 구조 및 병리학 연구를 단순화합니다. 이 접근 방식에는 간단한 절편, 염색 및 이미징이 포함되며, 기존 박리에 필요한 기술적 전문 지식을 우회합니다. 접근성을 향상시켜 Drosophila를 더 넓은 과학 커뮤니티 내에서 심장 관련 연구에 더 널리 사용할 수 있는 모델로 만듭니다.

Drosophila Heart Fluorescence Staining with Cryosectioning을 위한 새롭고 효율적인 방법

이 프로토콜은 아닌 방사성을...

더블 형광 현장에서</em신선한 두뇌 섹션> 하이브 리다이 제이션

학습하세요 Drosophila 뇌 조직 처리 프로토콜을 사용하여 형광 및 면역 염색을 통한 신경 구조 시각화 방법을. 이 단순화된 기법은 복잡한 해부 없이 정량적 이미징 분석을 가능하게 합니다.

향상된 뇌 형광 염색 및 면역 염색을 위한 초파리 머리의 직접 동결 절편

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