Het verzamelen van speeksel en meten cortisol en Alpha-amylase in Frail Gemeenschap wonende ouderen via mantelzorgers

Het algemene doel van deze procedure is om de verzameling en analyse van speekselbiometingen bij een gemeenschapsbewonende, medisch kwetsbare populatie te demonstreren. Dit wordt bereikt door eerst de benodigde speekselverzamelmaterialen samen te stellen. De tweede stap is het regelen van de thuisbezoek, om de benodigdheden te verstrekken en de speekselverzamelprocedures aan de verzorger te demonstreren.

Vervolgens, geeft u schriftelijke instructies en beantwoordt u eventuele vragen. De laatste stap is om de speekselmonsters terug te brengen naar het laboratorium en de testprocedures uit te voeren. Uiteindelijk is het protocol ontworpen om het diurnale profiel van speeksel-alfa-amylase en speekselcortisolconcentraties bij medisch kwetsbare patiënten die in de gemeenschap wonen, te meten.

Deze methode zal belangrijke vragen beantwoorden op het gebied van biogedragsonderzoek om ons begrip van biologische gevoeligheid en vatbaarheid rond stressgerelateerde processen te verbeteren. Voorafgaand aan het plannen van een thuisbezoek aan toestemmende deelnemers, verzamelen en stellen de deelnemers de benodigde materialen samen, waaronder vier psychometrische kinderenswabs, vier swabopslagbuisjes, vier op kleur gecodeerde dopjes voor de buisjes, vijf witte etiketten, een plastic Ziploc-zak, een speekselverzamelinstructieblad, vijf nitrohandschoenen en een opbergdoos. Gebruik een hand die een nitrohandschoen draagt om vier Salome kinderenswabs in de vier swabopslagbuisjes te plaatsen en sluit ze af met respectievelijk gele, oranje, blauwe en paarse kleurdoppen.

Plaats vervolgens een etiket op elk opslagbuisje om het tijdstip van verzameling aan te geven. Plaats de vier afgesloten opslagbuisjes, het speekselverzamelinstructieblad en vier nitrohandschoenen in de Ziploc-zak en label het met de proefpersoons-ID en de datum van verzameling. Volgend op dit schema, plan een kort thuisbezoek bij proefpersonen die eerder toestemming hebben gegeven en op de dag voorafgaand aan de speekselmonsterneming.

Na aankomst bij het huis van de proefpersoon, geeft u de plastic zak met benodigdheden en instructieblad aan de speekselverzamelaar. Bekijk het instructieblad en benadruk de noodzaak om de start- en stoptijden van de speekselverzameling te registreren door de geschreven instructies te markeren. Noteer de naam, dosering en het schema van alle voorgeschreven en vrij verkrijgbare medicijnen die de deelnemer in de afgelopen 48 uur heeft ingenomen.

Instrueer de speekselverzamelaar of SC om een nitrohandschoen op de dominante hand aan te trekken. Vertel de deelnemer om zijn of haar hoofd naar voren te kantelen zodat de speeksel zich op de bodem van zijn of haar mond kan verzamelen. Volgend hierop, instrueer de SC om de swabopslagbuisjes te openen en de orale swab te pakken.

Instrueer de SC om de orale swab onder de voorkant van de tong van de oudere volwassene te plaatsen om ongeveer drie druppels van het verzamelde speeksel te absorberen en om de orale swab twee minuten op zijn plaats te houden om ervoor te zorgen dat deze verzadigd is, laat de SC de verzadigde orale swab terug in het mandje van het swabopslagbuisje plaatsen en de dop erop terugdoen. Vervolgens moet de SC het buisje onmiddellijk in de opbergdoos plaatsen en in een vriezer leggen. Na het weggooien van de handschoen in de prullenbak, adviseert u de SC om de start- en stoptijden op het speekselinstructieblad te noteren.

Informeer vervolgens de SC dat ze op vier gelegenheden de volgende dag speekselmonsters zullen verzamelen, specifiek bij het ontwaken, 30 minuten na het ontwaken, midden in de ochtend en 's avonds, laat de SC de patiënt vertellen om zijn of haar mond 10 minuten voor de speekselverzameling met water te spoelen. Na de speekselverzameling, gooi de monsters weg die zichtbaar besmet zijn met bloed. Instrueer de SC dat de speekselmonsters in de vriezer moeten blijven totdat ze door het onderzoeksteam worden opgehaald.

Bel het onderzoeksteam om te bevestigen dat ze een tijdstip en dag zullen plannen om de bevroren monsters op te halen en nieuwe speekselverzamelmaterialen mee te brengen voor eventuele toekomstige verzamelingen. Zodra de monsters uit de vriezer van de proefpersoon zijn verwijderd, houd ze bevroren tijdens het transport naar het laboratorium door ze in een geïsoleerde vriezerzak te plaatsen. Bij aankomst in het laboratorium, vervang het witte etiket op elke buis door een sequentieel streepjescodelabel.

Controleer of de sequentiële streepjescode overeenkomt met de proefpersoons-ID, datum van verzameling en tijd van verzameling. Breng vervolgens de speekselmonsters terug naar een min 20 graden Celsius vriezer om het mucine te laten bezinken. Na het ontdooien van de speekselmonsters, centrifugeer de monsters gedurende 15 minuten bij 1500 keer de zwaartekracht.

Zodra de reagentia van het speekseltestkit op kamertemperatuur zijn geweest gedurende ongeveer 90 minuten, bereid de wasbuffer volgens de kitinstructies en pipet 25 microliter van de standaardcontroles en monsters in de juiste putjes van een 96-wellsplaat. Volgend hierop, pipet 200 microliter van een eerder bereide enzymconjugaat-oplossing in de putjes. Meng de monsters door de plaat vijf minuten op een rotator te plaatsen bij 500 RPM.

Na het incuberen van de monsters bij kamertemperatuur gedurende 55 minuten, was en dep de plaat met wasbuffer vier keer. Voeg vervolgens 200 microliter tetraethylbenzeen of TMB-oplossing toe. Zodra de monsters vijf minuten zijn gemengd.

Bij 500 RPM, bedek de plaat met aluminiumfolie en incubeer ze in het donker gedurende nog eens 25 minuten. Wanneer u klaar bent, voegt u 50 microliter stopoplossing toe en mengt u de monsters drie minuten bij 500 RPM. Binnen 10 minuten na het toevoegen van de stopoplossing, veegt u de bodem van de plaat af en leest u de plaat met een platelezer op 450 nanometer.

Bereken vervolgens de cortisolconcentratie met