Name: Pre-klinische Orthotope muizenmodel van Human prostaatkanker (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Leer een orthotopisch muizenmodel opzetten voor prostaatkankeronderzoek met humane xenografts. Deze methode maakt het bestuderen van tumorgroei en metastase mogelijk voor preklinische therapie-evaluatie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We danken Dr. Roger Erickson voor zijn steun en assistentie bij de voorbereiding van het manuscript. Dit werk werd ondersteund door het National Cancer Institute bij de National Institutes of Health via subsidienummers RO1CA160079, RO1CA138642, UO1CA184966 en het door de VA gefinancierde programmaprojectnummer 1P1 BX001604.

Protocollen voor alle procedures waarbij dieren moeten worden beoordeeld en door een Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC) goedgekeurd. Volg officieel goedgekeurde procedures voor de verzorging en het gebruik van proefdieren. Intra-prostaat injectie vereist een open buikoperatie en dieren moeten in een pathogeen-vrije omgeving worden gehouden met een aangewezen operatiekamer waar een goede chirurgische aseptische technieken worden gebruikt tijdens de gehele procedure. 1. Bereiding van cellen voor implantatie OPMERKING: Op basis van onderzoek behoefte kan elke prostaatkanker cellijn worden gebruikt. Cellijnen worden gekweekt volgens de instructies van de leverancier. <ol><li> Voor de PC3M-Luc-C6-cellijn die op stabiele wijze tot expressie het vuurvlieg luciferasegen, kweekcellen in minimaal essentieel medium (MEM) aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS), 1 x niet-essentiële aminozuren, 1x fleomycine D1 en 1 mM natriumpyruvaat . Handhaaf cellen in een incubator wet een bevochtigde atmosfeer van 95% lucht en 5% CO2 bij 37 ° C. PC3M-Luc-C6-cellen werden verkregen van UCSF kernfaciliteit. </li><li> Oogst cellen door behandeling met trypsine. Was kweekplaten eenmaal met fosfaat- gebufferde zoutoplossing (PBS). Voeg 2 ml 0,05% trypsine een 10 cm schaal en incubeer gedurende 3-5 minuten in een incubator met een vochtige atmosfeer van 95% lucht en 5% CO2 bij 37 ° C totdat de cellen worden losgemaakt. <ol><li> Om te klonteren te voorkomen, niet de cellen ageren door het raken of het schudden van het gerecht tijdens het wachten voor cellen los te maken. Verzamel de cellen in 5 ml compleet medium en spin down gedurende 5 minuten bij 200 x g. Was de celpellet met PBS om trypsine te verwijderen. </li></ol></li><li> Inventariseer levende cellen door trypan blauw exclusie test. Mix 10 ul van de celsuspensie in PBS met 10 gl 0,4% (gew / v) trypan blauwe oplossing. Plaats het mengsel in een hemocytometer of telkamer glijbaan en cellen direct te tellen onder een microscoop of lees de kamer dia in een cel counter. <ol><li> Bereid een celsuspensie bevattende 2,5 x 10 5 cellen in 10 ul medium. Meng de celsuspensie met 10 pi basaal membraan-achtige extracellulaire matrix-extract en plaats de cellen op ijs. luciferine toevoegen aan de celsuspensie (1: 200 pl; voorraad 30 mg / ml concentratie) alvorens te injecteren in muizen. LET OP: Dit maakt onmiddellijke bio-imaging van de dieren om de consistentie van de cel injecties te controleren tussen de verschillende experimentele groepen. Injecteer cellen zo snel mogelijk, bij voorkeur binnen 30 minuten na behandeling met trypsine sinds cellevensvatbaarheid snel afneemt na onthechting. </li></ol></li></ol> 2. Voorbereiding van de chirurgische gebied <ol><li> Voer een operatie in een overzichtelijke, gedesinfecteerde gebied dat asepsis bevordert. </li><li> Ontsmetten de teller / lab bank met bleekwater oplossing voor de operatie. Opmerking: Het gebruik van alcohol afgeraden vanwege de lange contacttijd nodig effect (15 min) nemen. </li><li> Gebruik steriele doeken,reinigen absorbeerbare pads of handdoeken, en deze materialen na elke chirurgische sessie te vervangen. Steriliseren alle instrumenten voor gebruik. Voorkeursmethoden een stoom autoclaaf glaskraal sterilisator, ethyleenoxide gas, of waterstofperoxide dampsterilisatie. </li><li> Gebruik een aseptisch gereinigd ontleden microscoop om de chirurgische procedure uit te voeren of ervaren onderzoekers kan het uit te voeren zonder een microscoop. </li></ol> 3. Implantatie van tumorcellen <ol><li> Gebruik mannelijke 6-8 weken oude immunodeficiënte Balb / c of NOD / SCID-muizen. Opmerking: Het is moeilijker om op kleinere dieren en grotere dieren vaak langzamere kinetiek van tumorgroei en metastase. </li><li> Injecteren pre-operatie pijnmedicatie volgens de instructies van het dier faciliteit. Zo kan intraperitoneale buprenorfine in een dosis van 0,1 mg / kg lichaamsgewicht worden gebruikt. </li><li> Verdoven dieren door ze te plaatsen in een isofluraan kamer met 1-3% isofluraan in zuurstof en watotdat de dieren volledig verdoofd. Zorg ervoor dat er geen teen reflex van spiertonus op dit punt. Gebruik de juiste veterinaire oogzalf smeermiddel tot blindheid als gevolg van xerophthalmie tijdens algehele anesthesie te voorkomen. OPMERKING: Verdoven de dieren bij voorkeurswerkwijze bijvoorbeeld de onderzoeker voor natriumpentobarbital, is 0,05 mg per gram lichaamsgewicht toegediend intraperitoneale of ketamine / xylazine oplossing (concentratie: 17,16 mg / ml) in een dosis van 65 mg / kg lichaamsgewicht subcutaan wordt gebruikt. Isofluraan inhalatie is een voorkeurswerkwijze van verdoving. Het oog zalf moet voorzichtig worden toegepast zonder te wrijven tegen het hoornvlies. </li><li> Verwijder het dier uit de isofluraan kamer en plaats in een neuskegel inrichting met continue stroming van 1-2% isofluraan in zuurstof zodat het dier onder volledige narcose alvorens. <ol><li> Verwijder haar van muizen door het scheren of gebruik een Hair verwijderen Cream voor het begin van de procedure. LET OP: Het zou beter zijn om de muis op een steriele verwarming pad te plaatsen tijdens de operatie zijn. </li></ol></li><li> Plaats de muis in rugligging. Reinig de onderbuik met 10% w / w povidon-joodoplossing, gevolgd door 70% ethanol doekjes. </li><li> Met een paar fijne tang, tilt een deel van de huid 2 mm boven de preputiumklieren, ongeveer 1-2 cm boven de penis huls, en ongeveer 2-3 cm onder de onderkant van de ribbenkast. </li><li> Voeg een middellijn incisie van 1 cm lengte, eerst door de huid met een scalpel en daarna door de spierlaag met een schaar (figuur 1). </li><li> Zoek de blaas in de lichaamsholte. Het is een geel-lichtbruine bolvormige orgaan direct onder de incisie (figuur 1). </li><li> Met een paar fijne tang greep de blaas en til deze dan naar beneden uit de lichaamsholte naar de penis huls. Dit zullen de twee zaadblaasjes, die een paar witte saclike organen en duidelijk te onderscheiden zijn bloot te leggen. </li><li> Met eenwattenstaafje in elke hand, externaliseren de zaadblaasjes, één voor één, en trek ze uit de lichaamsholte en leg ze verdekt op de buitenkant van de buik met de blaas in het midden (figuur 2). </li><li> Met de wattenstaafjes voorzichtig terug kantelen de zaadblaasjes bij het inbrengpunt bij de blaashals, naar de penis huls, zodat de twee dorsale prostaat lobben zijn duidelijk zichtbaar. Gebruik natte wattenstaafjes weefselschade (figuur 3) te vermijden. </li><li> Schud de celsuspensie met een micropipet voordat de spuit. </li><li> Terwijl het plaatsen van de zaadblaasjes in positie met een wattenstaafje, steek de naald in de dorsale prostaat kwab onder de microscoop (figuur 4). Injecteer langzaam 20 ui celsuspensie tot een formatie bulla geïdentificeerd. Een uitpuilende bulla geeft aan dat de injectie correct is. </li><li> Terwijl het terugtrekken van de naald, druk licht op de injectieplaats meteen wattenstaafje en houden voor een paar seconden om lekkage te voorkomen. </li><li> Til de zaadblaasjes met wattenstaafjes en plaats ze terug in de lichaamsholte één voor één, gevolgd door de blaas. Vermijd &#39;twirling&#39; de inwendige organen tijdens het uitvoeren van deze procedure. </li><li> Na het plaatsen van de organen terug in de lichaamsholte, hechten de eerste spierlaag in een onderbroken patroon met absorbeerbare 4-0 chroomzuur catgut hechtingen gevolgd door de huid gesloten met niet-absorbeerbare 4-0 nylon chirurgisch hechtmateriaal. De huid kan ook samen worden getrokken en gesloten met chirurgische klemmen om de incisie volledig te sluiten. OPMERKING: Muizen hebben de gewoonte krabben en bijten op de wond, wat kan leiden tot heropening van de wond, waardoor het gebruik van weefsellijm wordt aanbevolen met hechtingen. Afbeelding dieren onmiddellijk om te verzekeren dat er gelijke lichtgevende intensiteit onder alle experimentele groepen. </li><li> Zet de dieren kooien schoon te maken en te houden onder een warming lamp of warmteing pad. Bewaken van de dieren continu totdat ze volledig te herstellen van de anesthesie en onderhouden borstligging. </li></ol> 4. Toezicht van Dieren <ol><li> Controleer de dieren regelmatig tot het einde van het experiment volgens de institutionele protocollen. Bij gebruik van chirurgische metalen clips, verwijderen nadat een tot twee weken. Duur van het experiment afhankelijk van de specifieke behoefte onderzoek. Opmerking: Dit experiment werd gedurende 21 dagen om de succesvolle vorming van de geïmplanteerde kankercellen in de prostaat muizen onderzocht. </li><li> Toedienen pijnstillers op basis van instructies van het dier faciliteit. Zo kan intraperitoneale buprenorfine in een dosis van 0,1 mg / kg lichaamsgewicht worden gebruikt op het moment van de procedure met een tweede dosis na 6 uur en bijkomende doses elke 8-12 uur indien nodig. </li><li> Monitor dier gewicht, voedselconsumptie, huidskleur en textuur, de activiteiten en de frequentie van het plassen en ontlasting. Euthanaseren dieren immediately als er een aanzienlijk verlies van lichaamsgewicht meer dan 15%. <ol><li> Euthanasie leveren CO2 uit een reservoir onder druk in een niet-druk kooi bij een debiet verdringen 10-30% van de kamer of kooi / minuut, waardoor CO 2 naar de kamer langzaam de druk zodat bewusteloosheid en volledig narcotizatie optreden voor het overlijden. </li><li> Handhaaf CO 2 stroom gedurende ten minste één minuut na ademstilstand en laat dieren in de ruimte gedurende voldoende tijd zodat overlijden voor het uitvoeren van een fysische methode. </li><li> Voer onthoofding, cervicale dislocatie of een andere IACUC goedgekeurd fysische methode na euthanasie de dieren chemisch. OPMERKING: Duidelijk verminderde lichaamsgewicht geeft vaak een lethargische toestand. Tumordragende dieren moeten in goede gezondheid uitzondering van de aanwezigheid van tumoren tot het einde van het experiment. Euthanasie moet in overeenstemming zijn met de AVMA richtsnoeren inzake euthanasie en moeten liste zijnd in de goedgekeurde IACUC protocol. </li></ol></li></ol> 5. Niet-invasieve bio-imaging of Animals <ol><li> Controleer de dieren wekelijks een niet-invasieve beeldvormingstechniek kolonisatie van kankercellen, tumorgroei en metastase elke afstand volgen. LET OP: Imaging modaliteiten zoals GFP-beeldvorming, Luciferase beeldvorming, X-stralen of 3D-micro computed tomography (UCT) enz. Kan worden gebruikt gebaseerd op de specifieke onderzoek nodig 12-15. </li></ol>

<ol><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2015%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2015.</a> CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).</li>
<li>Andrieu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+shock+protein+27+confers+resistance+to+androgen+ablation+and+chemotherapy+in+prostate+cancer+cells+through+eIF4E%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Heat shock protein 27 confers resistance to androgen ablation and chemotherapy in prostate cancer cells through eIF4E.</a> Oncogene. 29 (13), 1883-1896 (2010).</li>
<li>Fusi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+options+in+hormone-refractory+metastatic+prostate+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Tumori%22%5BJournal%5D)">Treatment options in hormone-refractory metastatic prostate carcinoma.</a> Tumori. 90 (6), 535-546 (2004).</li>
<li>Hughes, C., Murphy, A., Martin, C., Sheils, O., O'Leary, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+pathology+of+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Molecular pathology of prostate cancer.</a> J Clin Pathol. 58 (7), 673-684 (2005).</li>
<li>Pavese, J., Ogden, I. M., Bergan, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+murine+model+of+human+prostate+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An orthotopic murine model of human prostate cancer metastasis.</a> J Vis Exp. (79), e50873(2013).</li>
<li>Pettaway, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+of+highly+metastatic+variants+of+different+human+prostatic+carcinomas+using+orthotopic+implantation+in+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Selection of highly metastatic variants of different human prostatic carcinomas using orthotopic implantation in nude mice.</a> Clin Cancer Res. 2 (9), 1627-1636 (1996).</li>
<li>Rembrink, K., Romijn, J. C., van der Kwast, T. H., Rubben, H., Schroder, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+implantation+of+human+prostate+cancer+cell+lines%3A+a+clinically+relevant+animal+model+for+metastatic+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate%22%5BJournal%5D)">Orthotopic implantation of human prostate cancer cell lines: a clinically relevant animal model for metastatic prostate cancer.</a> Prostate. 31 (3), 168-174 (1997).</li>
<li>Kim, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+epidermal+growth+factor+receptor+signaling+in+tumor+cells+and+tumor-associated+endothelial+cells+for+therapy+of+androgen-independent+human+prostate+cancer+growing+in+the+bone+of+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Blockade of epidermal growth factor receptor signaling in tumor cells and tumor-associated endothelial cells for therapy of androgen-independent human prostate cancer growing in the bone of nude mice.</a> Clin Cancer Res. 9 (3), 1200-1210 (2003).</li>
<li>Kim, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+platelet-derived+growth+factor+receptor+on+endothelial+cells+of+multidrug-resistant+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Targeting platelet-derived growth factor receptor on endothelial cells of multidrug-resistant prostate cancer.</a> J Natl Cancer Inst. 98 (11), 783-793 (2006).</li>
<li>Park, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+SRC+family+kinases+inhibits+growth+and+lymph+node+metastases+of+prostate+cancer+in+an+orthotopic+nude+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Targeting SRC family kinases inhibits growth and lymph node metastases of prostate cancer in an orthotopic nude mouse model.</a> Cancer Res. 68 (9), 3323-3333 (2008).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AFAP-110+is+overexpressed+in+prostate+cancer+and+contributes+to+tumorigenic+growth+by+regulating+focal+contacts%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">AFAP-110 is overexpressed in prostate cancer and contributes to tumorigenic growth by regulating focal contacts.</a> J Clin Invest. 117 (10), 2962-2973 (2007).</li>
<li>Park, S. I., Kim, S. J., McCauley, L. K., Gallick, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-clinical+mouse+models+of+human+prostate+cancer+and+their+utility+in+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Pre-clinical mouse models of human prostate cancer and their utility in drug discovery.</a> Curr Protoc Pharmacol. Chapter 14, Unit 14.15(2010).</li>
<li>Johnson, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+live+animal+micro-CT+allows+for+quantitative+analysis+of+tumor-induced+bone+destruction%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Longitudinal live animal micro-CT allows for quantitative analysis of tumor-induced bone destruction.</a> Bone. 48 (1), 141-151 (2011).</li>
<li>Steinbauer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GFP-transfected+tumor+cells+are+useful+in+examining+early+metastasis+in+vivo%2C+but+immune+reaction+precludes+long-term+tumor+development+studies+in+immunocompetent+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Metastasis%22%5BJournal%5D)">GFP-transfected tumor cells are useful in examining early metastasis in vivo, but immune reaction precludes long-term tumor development studies in immunocompetent mice.</a> Clin Exp Metastasis. 20 (2), 135-141 (2003).</li>
<li>Yang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+fluorescent+orthotopic+bone+metastasis+model+of+human+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A fluorescent orthotopic bone metastasis model of human prostate cancer.</a> Cancer Res. 59 (4), 781-786 (1999).</li>
<li>Stephenson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+model+for+human+prostate+cancer+using+orthotopic+implantation+in+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Metastatic model for human prostate cancer using orthotopic implantation in nude mice.</a> J Natl Cancer Inst. 84 (12), 951-957 (1992).</li>
<li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+metastatic+mouse+models+for+anticancer+drug+discovery+and+evaluation%3A+a+bridge+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+New+Drugs%22%5BJournal%5D)">Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic.</a> Invest New Drugs. 17 (4), 343-359 (1999).</li>
<li>Wang, X., An, Z., Geller, J., Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-malignancy+orthotopic+nude+mouse+model+of+human+prostate+cancer+LNCaP%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate%22%5BJournal%5D)">High-malignancy orthotopic nude mouse model of human prostate cancer LNCaP.</a> Prostate. 39 (3), 182-186 (1999).</li>
<li>An, Z., Wang, X., Geller, J., Moossa, A. R., Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+orthotopic+implantation+allows+high+lung+and+lymph+node+metastatic+expression+of+human+prostate+carcinoma+cell+line+PC-3+in+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate%22%5BJournal%5D)">Surgical orthotopic implantation allows high lung and lymph node metastatic expression of human prostate carcinoma cell line PC-3 in nude mice.</a> Prostate. 34 (3), 169-174 (1998).</li>
<li>Kim, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+c-Met+expression+by+an+adenovirus+expressing+a+c-Met+ribozyme+inhibits+tumorigenic+growth+and+lymph+node+metastases+of+PC3-LN4+prostate+tumor+cells+in+an+orthotopic+nude+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Reduced c-Met expression by an adenovirus expressing a c-Met ribozyme inhibits tumorigenic growth and lymph node metastases of PC3-LN4 prostate tumor cells in an orthotopic nude mouse model.</a> Clin Cancer Res. 9 (14), 5161-5170 (2003).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen.

Dit manuscript beschrijft een gedetailleerde procedure voor de vaststelling van een mens orthotope prostaatkanker xenograft muismodel. Dit model werd gevestigd door directe implantatie van het humane prostaatkanker cellijn PC3M-Luc-C6 in de dorsale prostaat lobben van immunodeficiënte muizen. Men liet de tumoren te ontwikkelen in de loop van het experiment. De tumorgroei werd wekelijks gevolgd door een niet-invasieve bioluminescentie beeldvormingssysteem tijdens het experiment. De belangrijk...

Prostaatkanker is de tweede meest voorkomende doodsoorzaak kanker (9%) onder mannen in de Verenigde Staten, naast longkanker en bronchus (28%) 1. Volgens recente gegevens, wordt geschat dat 220, 800 nieuw gediagnosticeerde gevallen van prostaatkanker en 27, 540 doden zal plaatsvinden in 2015 1. De vijf jaar relatieve overlevingskans van vroeg stadium prostaatkanker is&gt; 99%, terwijl dat van geavanceerde metastatische ziekte is slechts 28% 1. Een belangrijke uitdaging voor de behandeling van gevorderde metastatische ziekte is het gebrek aan begrip van de moleculaire mechanismen waardoor de neiging van deze ziekte uitzaaien naar andere organen, met name voor het bot, dat is een frequente plaats voor prostaatkanker. Daarom is er een duidelijke behoefte om de moleculaire samenstelling van deze prostaattumoren te bestuderen met het oog op effectieve therapeutische behandelingen tegen progressie te ontwikkelen tot geavanceerde metastatische ziekte 2,3. Prostaattumoren tentoonstelling high biologische heterogeniteit zonder een goed gedefinieerde weg naar progressie. Metastasen komen vaak zonder voorafgaande aanduiding van tumor invasiviteit 4. Deze klinische heterogeniteit wordt toegeschreven aan de moleculaire diversiteit van prostaatkanker. Inzicht in de moleculaire samenstelling van deze dodelijke tumoren is de sleutel tot een betere diagnostische en therapeutische strategieën te ontwikkelen voor deze ziekte. Bijgevolg wordt prostaatkanker onderzoek momenteel gericht op het begrijpen en het voorkomen van metastase. Pre-klinische in vivo muizenmodellen bieden diverse mogelijkheden om de moleculaire mechanismen van prostaatkanker progressie tot gevorderde metastatische ziekte te begrijpen. Bovendien, deze modellen zijn belangrijk voor preklinische evaluatie van nieuwe therapieën tegen deze ziekte. De meest gebruikte diermodellen omvatten transgene muizenmodellen-staartader injectie, intra-cardiale implantatie en menselijke orthotope muismodellen. Transgene studies zijn tijd Consuming en correlatie van prostaatkanker ontwikkeling in muizen met die van mensen aangetoond variabiliteit 11. Spontane metastatische muismodellen, worden cellen direct geïnjecteerd in de bloedsomloop en hoewel ze een snelle doorlooptijd, kunnen ze niet worden gebruikt om de primaire tumor of de eerste stappen van de metastatische cascade 5 bestuderen. Orthotope xenograft modellen hebben de beperking van de ontwikkeling van bot uitgezaaide laesies, de gemeenschappelijke plaats van prostaatkanker metastase. Niettemin, het menselijke orthotope prostaatkanker xenograft muismodel is goed gekarakteriseerd en algemeen gebruikt om de moleculaire gebeurtenissen primaire tumorontwikkeling overspraak tussen tumor en organen micro, beginfase van de metastatische ziekte en het gebruik van experimentele medicijnen voor therapeutische interventie 6 bestuderen , 7,8-11.

<table><tbody><tr><td>PC3 prostaatkanker cellijn&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>CRL-1435</td><td></td></tr><tr><td>Minimum Essential Medium (MEM)&nbsp;</td><td>GIBCO,Life Technology</td><td>11095-080</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>GIBCO,Life Technology</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>GIBCO,Life Technology</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Zeocin</td><td>Invitrogen,Life Technology</td><td>R250-01</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin&nbsp;</td><td>GIBCO,Life Technology</td><td>25300-54</td><td></td></tr><tr><td>IVIS&nbsp;</td><td>Xenogen-Caliper</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Insulin Spuitjes (300 &micro;l, 28.5 g)</td><td>Becton Dickinson</td><td>309300</td><td></td></tr><tr><td>Muizen</td><td>Charles River Laboratories, Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alcohol wattenschijfjes</td><td>MEDEquip Depot</td><td>326895 BD</td><td></td></tr><tr><td>PVP Jodium Prep Pad</td><td>MEDEquip Depot</td><td>C12400PDI</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische CatGut Chroom Sutuur</td><td>Demetech</td><td>CC224017F0P</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354248</td><td></td></tr></tbody></table>

pre-klinische orthotope muizenmodel van human prostaatkanker

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

Om de veelzijdige biologie van prostaatkanker te bestuderen, bieden preklinische in vivo modellen een reeks opties om kritische biologische informatie over deze ziekte te ontdekken. Het humane orthotopische prostaatkanker xenograft muismodel biedt een nuttige alternatieve aanpak voor het begrijpen van de specifieke interacties tussen genetisch en moleculair gemodificeerde tumorcellen, hun orgaanmicro-omgeving, en voor de evaluatie van de effectiviteit van therapeutische regimes. Dit is een goed gekarakteriseerd model dat is ontworpen om de moleculaire gebeurtenissen van primaire tumorontwikkeling te bestuderen en het herhaalt de vroege gebeurtenissen in de metastatische cascade vóór embolie en binnenkomst van tumorcellen in de circulatie. Daardoor maakt het de verheldering van moleculaire mechanismen mogelijk die ten grondslag liggen aan de initiële fase van metastatische ziekte. Bovendien kan dit model geneesmiddeldoelen van klinische relevantie annoteren en is het een waardevol hulpmiddel om prostaatkankerprogressie te bestuderen. In dit manuscript beschrijven we een gedetailleerde procedure om een humaan orthotopisch prostaatkanker xenograft muismodel te vestigen.

Na orthotope implantatie van PC3M-Luc-C6 cellen in de prostaat achterste kwab werden muizen wekelijks afgebeeld door een levend dier bioluminescentie imaging systeem om de kolonisatie van cellen en tumorgroei in de loop van het experiment (figuur 5A - B) monitor. Kwantificering van de lichtgevende signaal aangegeven dat PC3M-Luc-C6-cellen met succes gekoloniseerd de prostaat lobben. Verhoogde bioluminescentie is indicatief voor verhoogde groei primaire t...

Prostaatkanker is de op een na meest voorkomende oorzaak van kankergerelateerde sterfgevallen in de Verenigde Staten. Een orthotopisch kankermodel biedt een nuttige benadering om de biologie van prostaatkanker te begrijpen en de werkzaamheid van therapeutische regimes te evalueren. Dit protocol beschrijft gedetailleerde stappen die nodig zijn om een orthotopisch muismodel voor prostaatkanker te vestigen.

Pre-klinische Orthotope muizenmodel van Human prostaatkanker

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

Het algemene doel van deze procedure is het tot stand brengen van een orthotoop xenograftmodel voor prostaatkanker in muizen, dat een nuttige benadering biedt voor het bestuderen van de moleculaire gebeurtenissen bij de ontwikkeling van primaire tumoren tijdens de vroege fasen van de metastatische cascade. Dit model kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen over de spastische interacties tussen genetisch en moleculair veranderde tumorcellen in de micro-omgeving van de groeiende tumor. Daarnaast kan het ondersteunen bij de preklinische evaluatie van nieuwe therapeutische benaderingen tegen humane prostaatkanker.Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van spontane metastatische modellen is dat het de studie van de moleculaire gebeurtenissen bij de ontwikkeling van de primaire tumor bevordert, alsmede de reproductie van de initiële fase van metastase voorafgaand aan de entry en embolisatie van tumorcellen in de circulatie. Het orthotoop model van prostaatkanker is een van de beste preklinische modellen om te begrijpen hoe prostaatkankercellen metastaseren naar verschillende organen. De meeste patiënten met prostaatkanker overlijden aan metastasen, waardoor dit m

pre-clinical-orthotopic-murine-model-of-human-prostate-cancer

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Blaastumoren zijn gevestigd in vrouwelijke muizen in een minimaal invasieve wijze via catheterisatie, lokale cauterisatie, en de daaropvolgende aanhechting van carcinoom cellen om de branden sites.

Een orthotope Model van Murine Blaaskanker

In this video, we demonstrate the procedure for administering intra-prostatic injection of prostate cancer cells into a mouse model. Orthotopic murine models can be used to study the disease origin and response to treatment therapies in a non-invasive and clinically relevant environment.

Intra-prostatic Injection of Cancer Cells: A Technique to Deliver Cancer Cells for Establishing Orthotopic Prostate Cancer Mouse Model

MR kanker moleculaire beeldvorming aantonen met een kleine peptide gerichte MRI-contrastmiddel specifiek voor clotted plasma-eiwitten in tumor stroma in een muizen prostaatkanker model.

MR Molecular imaging van prostaatkanker met een kleine moleculaire CLT1 Peptide Gerichte contrastmiddel

Dit orthotopisch model van menselijke prostaatkanker maakt kwantificering van tumorgrootte circulerende tumorcellen en de vorming van verschillende metastase naar de longen. Omdat de cellen van het belangrijkste orgaan moet ontsnappen, in de bloedsomloop, en implantaat in een tweede locatie, dit model effectief recapituleert het scenario bij de mens.

Een orthotope muizenmodel van menselijke prostaatkankercellen Metastasis

Dit manuscript beschrijft een methode die wordt gebruikt om xenografts (PDX's) van prostaatkankerpatiënten te genereren vanuit circulerende tumorcellen (CTC's). Het genereren van PDX-modellen uit CTC's biedt een alternatief experimenteel model om prostaatkanker te bestuderen; de meest vaak gediagnosticeerde tumor en een frequente doodsoorzaak door kanker bij mannen.

Generatie van prostaatkanker Patiënt Afgeleid xenotransplantaatmodellen van circulerende tumorcellen

Dit manuscript beschrijft de protocollen voor prostaat micro-dissectie en chirurgische castratie in het laboratorium muis. We tonen ook representatieve resultaten van deze protocollen. Tenslotte bespreken we de voordelen en het gebruik van deze protocollen.

Murine Prostaat Micro-dissectie en chirurgische castratie

Dit protocol beschrijft de generatie van muizen orthotope blaastumoren bij vrouwelijke C57BL / 6J muizen en de monitoring van tumorgroei.

Een muizen orthotope Blaas Tumor Model en Tumor Detection System

Het doel van dit protocol is om aan te tonen van de intra-prostaat injectie van prostaat kankercellen, met latere castratie. Orthotopic preklinische modellen van androgeen-afhankelijke en castratie-resistente prostaatkanker zijn cruciaal voor het bestuderen van de ziekte in het kader van een klinisch relevante tumor communicatie en een immunocompetent host.

Een bioluminescente en fluorescerende Orthotopic Syngeneic lymfkliertest Model van androgeen-afhankelijke en castratie-resistente prostaatkanker

Dit protocol beschrijft een nieuw opgerichte methode voor virus levering aan de lymfkliertest prostaat. Met behulp van technologie van de CRISPR/Cas9, gene overexpressie of Cre recombinase levering, de techniek kunt orthotopic wijziging van genexpressie en implementeert een roman muismodel voor prostaatkanker.

Virus levering van CRISPR gidsen voor de lymfkliertest prostaat voor Gene wijziging

Genetisch gemodificeerde muizen zijn nuttige modellen voor het onderzoek naar prostaatkanker mechanismen. Hier presenteren we een protocol om te identificeren en ontleden prostaat lobben van het urogenitaal systeem van een muis, onderscheiden van hen op basis van histologie, isoleren en cultuur de primaire prostaat cellen in vitro als spheroïden voor downstream analyses.

Identificatie en karakterisering van het histologische dissectie van de prostaat lobben van de muis voor In Vitro 3D sferoïde cultuur modellen

Hier presenteren we een protocol voor de intra-cardiale injectie van menselijke prostaatkankercellen om een muismodel met botmetastaselaesies te genereren.

Intra-cardiale injectie van menselijke prostaatkankercellen om een botmetastase xenograft muismodel te creëren

Leer een orthotopisch muizenmodel opzetten voor prostaatkankeronderzoek met humane xenografts. Deze methode maakt het bestuderen van tumorgroei en metastase mogelijk voor preklinische therapie-evaluatie.

Pre-klinische Orthotope muizenmodel van Human prostaatkanker

Meer video's verkennen