$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Eksperymenty na zwierzętach przeprowadzono zgodnie z Przepisami i Ogólnymi Zaleceniami Chińskiego Ustawodawstwa Administracji Zwierząt Doświadczalnych i zostały zatwierdzone przez Komitet Instytucji Opieki i Użytkowania Zwierząt Stołecznego Uniwersytetu Medycznego (nr ref. AEEI-2014-052). Wykorzystano samice myszy Balb/c w wieku od 6 do 8 tygodni.
1. Przygotowanie komórek i zwierząt
- Dzień przed operacją należy ogolić włosy wokół czwartego brodawki, aby odsłonić obszar operacyjny.
- Jedną ręką przytrzymaj mocno mysz z tyłu, aby upewnić się, że mysz nie będzie się swobodnie poruszać, podkręć mysz, aby odsłonić brzuch operatora, a następnie drugą ręką ogol futro wokół czwartych sutków za pomocą golarki elektronicznej.
- Nałóż cienką warstwę kremu do depilacji wokół sutków na 30 - 60 s, zmyj krem wodą destylowaną, a następnie osusz mysz miękkim papierem.
- W dniu operacji zbierz mysie komórki raka piersi (4T1-luc2), policz liczbę komórek i dostosuj gęstość komórek do 2 x 105 komórek/ml w soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS) w sterylnych probówkach do mikrowirówek i trzymaj je na lodzie. Dla każdej myszy przygotowuje się 1 x 104 komórek/50 μl w strzykawce o pojemności 1 ml.
2. Iniekcja ortotopowa
- Znieczulenie myszy
- Wywołaj znieczulenie. Umieść myszy w zamkniętym przezroczystym pojemniku i włącz 2% gaz izofluranowy, aby znieczulić myszy przez około 5 minut, aż wszystkie się położą i zasną.
- Utrzymuj znieczulenie. Przenieś myszy z pojemnika do indywidualnych masek anestezjologicznych, nałóż trochę maści weterynaryjnej na ich oczy, aby uniknąć wysuszenia, trzymaj myszy na wznak z sutkami wystawionymi na działanie operatora i pozwól im kontynuować wdychanie izofluranu przez kilka minut, aż do wykonania wstrzyknięcia.
- Potwierdź powodzenie znieczulenia przez brak odruchu wycofania szczypania palca u nogi.
- Nałóż maść okulistyczną na oczy myszy, aby zapobiec wysuszeniu oczu.
UWAGA W zależności od wielkości pojemnika i liczby dostępnych indywidualnych masek anestezjologicznych, grupa myszy może być znieczulana razem i wstrzykiwana jedna po drugiej w indywidualnym znieczuleniu.
- Wykonanie iniekcji
- Jedną ręką naciągnij skórę wokół czwartego sutka za pomocą pęsety, aby ustawić podniesiony "tunel", za którym będzie podążać strzykawka. Drugą ręką trzymaj strzykawkę z igłą skierowaną do góry, aby wprowadzić się w skórę podskórnie w odległości 5 - 10 mm od brodawki; Następnie podążaj za "tunelem", aż końcówka igły zbliży się do brodawki, ostrożnie przesuń końcówkę igły w górę do poduszeczki tłuszczowej sutka, aż ucho igły znajdzie się pod końcówką brodawki, wyrzuć pęsetę i powoli wstrzykuj komórki.
- Obrócić nieco igłę i powoli wycofać strzykawkę; za pomocą bawełnianego wacika dociskać nawiniętą igłę przez 10 - 20 sekund, aby upewnić się, że nie ma przesiąkania płynu.
- Obserwuj czwartą brodawkę, aby potwierdzić udane wstrzyknięcie: można zaobserwować jedną białą, przezroczystą płaską kulę, w której sutek znajduje się w środku (ryc. 1).
- Utrzymuj myszy w znieczuleniu przez kolejną minutę, aby uniknąć sytuacji, w której myszy dojdą do siebie i poruszają się zbyt szybko, co spowoduje otwarcie rany po wstrzyknięciu i wyciek komórek nowotworowych.
Rycina 1: Zdjęcia przed i po wstrzyknięciu ortotopowym w poduszeczkę tłuszczową samicy myszy Balb/c. Operacja została przeprowadzona, a zdjęcia zostały zrobione, gdy myszy były pod narkozą izofluranem. A, przed wstrzyknięciem, B, po wstrzyknięciu.