Przeszczepienie całego szpiku nerkowego u dorosłego danio pręgowanego

Nazywam się Jocelyn Blank. Jestem technikiem w laboratorium Lauren Z. Badam hematopoezę i danio pręgowanego. Staramy się więc dowiedzieć więcej o hematopoezie, zwłaszcza w przypadku hematopoezy.

To jest ogólny schemat hematopoezy. Tak więc zaczynasz od długoterminowej meta komórki macierzystej, która może się samoodnawiać, a także może wytworzyć krótkoterminową komórkę macierzystą, która z kolei może uczynić z komórek progenitorowych limfoidalnych i przodków szpiku. A następnie tworzą one odpowiednio komórki limfoidalne lub szpikowe.

Jesteśmy bardzo zainteresowani początkową częścią tego, jak HSC może tworzyć płcie, które następnie tworzą zróżnicowane komórki. Promieniuję dziką rybą w wieku 25 szarych dwa dni przed przeszczepem. I tak mamy wtedy czysty system i możemy przeszczepić szpik dawcy od fluorescencyjnych dawców transgenicznych, a następnie możemy, w ten sposób możemy obserwować komórki, które przeszczepiamy i zobaczyć, czy mogą ponownie zasiedlić krew w dniu przeszczepu Poświęć odpowiednią liczbę dawców fluorescencyjnych w trikanie.

Poczekaj tylko, aż skrzela już się nie poruszają. Więc po prostu kładę to trochę na naczyniu, takim jak to, platformie, a następnie robię małe nacięcie tuż pod jego brzuchem, a następnie mogę włożyć nożyczki i przyciąć brzuch. Ten? Tak, więc teraz jest przecięty aż do samego dołu i w pewnym sensie trzyma rybę otwartą.

A potem z drugim wyciągnij drugi narząd. Tak więc nerka znajduje się wzdłuż grzbietu ryby. Czy mogę wziąć mój dobry kleszcz i złapać go na górze, a potem odkleja się i schodzi w dół i coś w rodzaju paska, który tam jest, i wkładam go do środka, więc teraz po prostu przeniosę go do stożkowej rurki i po prostu położę to w górę iw dół.

Aby rozbić kawałki nerki, rozbijemy je za pomocą strzykawki o grubości 10 mil i przeniesiemy igłę o rozmiarze 18 i pół do probówki i napełnimy roztworem PBS. Zakręć w dół przy 5 000 RRP M o tym, aby zawiesić p bsm lub sitko mikronowe komórki. Chcę odcedzić sitko i nie złapię żadnych dużych kawałków, które masz.

Wylej zawiesinę Resus w jednym milionie PBS plus zlicz komórki. Oblicz liczbę komórek do przeszczepu, Sacrifice Fish i tri coat, końcówka rury z heparyną. Przebić skrzela końcówką pipety, dodać krew do roztworu PBS.

Spęk, resus, zawiesz, ponownie opuść, opuść. Przefiltruj przez 40 mikronów komórek filtra, tak jak w przypadku całego szpiku nerkowego. Zamierzam więc napełnić strzykawkę komórkami do pięciu mikrolitrów, upewniając się, że w strzykawce nie ma pęcherzyków.

Ryba zostanie znieczulona w trica przed wstrzyknięciem. Do wstrzyknięcia należy wstrzyknąć pięć mikrolitrów całego szpiku nerkowego i roztworu krwi obwodowej do serca każdego biorcy za pomocą strzykawki Hamiltona. A potem zamierzam włożyć strzykawkę trochę z powrotem.

Serce jest mniej więcej tutaj, więc tam chcę skończyć. Zamierzam go wbić, pozostając bardzo płytkim. A potem zamierzam poszperać tutaj, gdzie jest serce.

A czasami widzisz wybuch krwi, co oznacza, że trafiłeś w serce. Czasami nie. Nie widzę żadnej krwi, więc po prostu zamierzam zrobić zastrzyk.

Otóż to. Trzymaj ryby z dala od przepływu przez tydzień, aby uniknąć infekcji. Trzymaj około pięciu do 10 ryb w klatce, usuwając martwe każdego dnia i ręcznie zmieniaj wodę każdego dnia.

Tak więc szpik nerkowy jest miejscem, w którym naszym zdaniem znajdują się komórki macierzyste i tam wytwarzają swoje potomstwo. To trochę jak ze szpikiem kostnym u ludzi. Więc kiedy wszczepiamy szpik kostny ludziom, to jest dokładnie ten sam pomysł, gdy przeszczepiamy je do serca zwierzęcia.

Po prostu próbowaliśmy różnych sposobów. Jest to najskuteczniejszy sposób na wprowadzenie komórek do krążenia. Tak więc szpik nerkowy jest miejscem, w którym HSP może tworzyć całe swoje białko.

Tak więc HSE muszą znaleźć drogę do szpiku nerkowego, aby mogli to zrobić poprzez krążenie. Jeśli dojdzie do ponownego zasiedlenia szpiku, to wiemy, że przeszczepiamy go do długotrwałej hematonowej komórki macierzystej, ponieważ jest to jedyna komórka, która może ponownie zasiedlić i wytworzyć wszystkie te komórki. To nas najbardziej interesuje.

Więc zdecydowanie powiedziałbym, że rzeczywiste zastrzyki, które wymagają dużo praktyki, wiele ryb umrze. Zasadniczo, próbując dostać się do serca, co nie zawsze jest pewne, czy wprowadzamy to do serca, jest to bardzo trudne do zauważenia. A także po prostu nie zabijać ryb zastrzykiem.

Tak więc podczas wstrzykiwania możesz uderzyć w inne narządy wewnętrzne, co może spowodować śmierć lub mogą dostać infekcji po wstrzyknięciu. Próbujemy więc jednej rzeczy, więc zazwyczaj wiele ryb umiera następnego dnia po wstrzyknięciu. Staramy się teraz utrzymać wszystko tak sterylne, jak to tylko możliwe, aby nie wrzucać ryb z powrotem do wody, ponieważ może dojść do infekcji w wodzie.

Więc trzymamy je oddzielnie, zmieniamy wodę każdego dnia i myślimy o dodaniu do wody antybiotyków, tego typu rzeczy, tylko po to, aby były zdrowsze podczas tego, ich kluczowego czasu zaraz po przeszczepie. Możemy więc wykorzystać go do badania mutantów. Jeśli uważamy, że mutant ma defekt w swoich komórkach macierzystych, możemy przeszczepić od niego szpik rybom typu dzikiego.

Możemy też przeszczepić szpik typu dzikiego do tych ryb i sprawdzić, czy jest jakiś problem z samymi komórkami macierzystymi lub niszą komórek macierzystych. Więc z jakiegoś powodu komórki macierzyste nie mogą znaleźć drogi do szpiku nerkowego, to byłby problem. Mogliśmy to zmierzyć na podstawie tego, czy ryba może się szczepić, czy nie.