Wstrzyknięcie do klatki piersiowej: podanie związku do serca dorosłego danio pręgowanego

- Na początek umieść mokrą gąbkę ze szczeliną na szalce Petriego. Następnie znieczulij dorosłą rybę roztworem tricainy i ostrożnie przenieś ją do szczeliny stroną brzuszną skierowaną do góry. Umieść szalkę Petriego pod mikroskopem stereoskopowym i obserwuj ruch bijącego serca pod skórą.

Umieścić igłę do minimalnej iniekcji pod kątem 45 stopni od osi ciała powyżej bijącego serca znajdującego się między wieczkiem a obręczą piersiową. Delikatnie wsuń igłę przez skórę do osierdzia, cienkiej błony otaczającej serce. Dostarczyć mieszaninę do wstrzykiwań do osierdzia.

Śrut zawiera barwnik znacznikowy, taki jak czerwień fenolowa, który śledzi ruch roztworów. Wyciągnąć igłę z klatki piersiowej. Natychmiast przenieś rybę do zbiornika regeneracyjnego zawierającego wodę systemową i monitoruj ją pod kątem całkowitego powrotu do zdrowia po znieczuleniu. W poniższym protokole wykonamy wstrzyknięcie do klatki piersiowej w celu dostarczenia badanego związku i zbadania jego wpływu na regenerację serca.

- Użyj siatki, aby złapać dorosłą rybę i przenieś ją do roztworu znieczulającego. Po jednej do dwóch minut, gdy ryba przestanie pływać, a ruch wieczka zostanie zmniejszony, dotknij ryby plastikową łyżką, aby upewnić się, że nie reaguje na żaden kontakt. Następnie szybko i ostrożnie przenieś rybę do rowka mokrej gąbki brzuszną stroną do góry. Głowa ryby powinna być skierowana w stronę przeciwną do dominującej ręki operatora.

Pod mikroskopem stereoskopowym uważnie obserwuj ruch bijącego serca pod skórą ryby. Wizualnie określ punkt wstrzyknięcia powyżej bijącego serca i w środku trójkąta wyznaczonego przez brzuszne płytki chrzęstne. Włóż końcówkę kapilary pod kątem od 30 do 45 stopni w stosunku do osi ciała. Delikatnie wniknij końcówką mikrokapilary w skórę do osierdzia.

Gdy igła znajdzie się w osierdziu, naciśnij pedał mikrowstrzykiwacza, aby zakończyć wstrzykiwanie. Po wstrzyknięciu delikatnie wyjmij kapilarnę z klatki piersiowej i natychmiast przenieś rybę do zbiornika z wodą systemową w celu odzyskania. Monitoruj ryby, aż do całkowitego wyzdrowienia ze znieczulenia. Aby przeanalizować skutki wstrzyknięcia, należy pobrać serce w żądanym punkcie czasowym i przygotować je do dalszej analizy.