Implantacja pod kontrolą ultradźwięków: technika wszczepiania komórek gruczolakoraka przewodowego trzustki dorosłej myszy

- Ultradźwięki zapewniają obrazy o wysokiej rozdzielczości, które pomagają wszczepić komórki rakowe w określone miejsce tkanki przy minimalnym stanie zapalnym podczas wstrzykiwania komórek nowotworowych. Przede wszystkim używamy modeli ortotopowych do przeszczepiania komórek nowotworowych do odpowiedniego narządu pochodzenia nowotworowego. Narząd naśladuje pierwotne mikrośrodowisko guza i ułatwia przerzuty.

Zacznij od zawieszenia komórek nowotworowych w zimnym PBS, aby utrzymać pH i umieść probówkę na lodzie. Następnie umieść mysz anestezjologiczną na stoliku USG i zabezpiecz kończyny taśmą laboratoryjną. Nałóż wymaganą ilość żelu ultradźwiękowego na ogolony brzuch i dostosuj pozycję sondy ultradźwiękowej, aż trzustka będzie wyraźnie widoczna. Załadować strzykawkę zawiesiną komórek nowotworowych i ostrożnie wstrzyknąć komórki do trzustki.

Na obrazie ultrasonograficznym pojawia się pęcherzyk płynu, potwierdzający udaną implantację. Odczekaj 5 sekund, aby zapobiec cofaniu się komórek i delikatnie wyjmij igłę. Umieść zwierzę z powrotem w czystej klatce i monitoruj, aż dojdzie do siebie po znieczuleniu. W ciągu kilku tygodni od wstrzyknięcia wstrzyknięte komórki rakowe w trzustce szybko się dzielą i tworzą guz. W poniższym protokole wykonamy implantację pod kontrolą USG mysich komórek gruczolakoraka przewodowego trzustki do trzustki modelu ortotopowego.

- Przed rozpoczęciem zabiegu należy ponownie zawiesić interesującą nas linię komórkową gruczolakoraka przewodowego trzustki w odpowiedniej objętości sterylnego zimnego PBS na lodzie. Umieść klatki na płycie grzewczej o temperaturze 37 stopni Celsjusza i dokładnie wyczyść szafkę bezpieczeństwa biologicznego, komorę indukcyjną i scenę ultradźwiękową odpowiednim środkiem sterylizującym. Ustaw funkcję rozgrzewczą stolika ultrasonograficznego na 37 stopni Celsjusza i po indukcji znieczulenia nałóż maść na oczy pierwszego zwierzęcia.

Umieść mysz w pozycji grzbietowej na stoliku USG i delikatnie przymocuj kończyny górne i dolne do etapu za pomocą taśmy. Użyj sterylnego aplikatora z bawełnianą końcówką, aby nałożyć obfitą warstwę kremu do depilacji na lewy górny kwadrant brzucha, w okolicy śledziony do linii środkowej. Po 1 minucie użyj suchego gazika, aby delikatnie usunąć włosy, a następnie usuń nadmiar kremu do depilacji za pomocą mokrej gazy z soli fizjologicznej. Następnie umieść mysz w jednej z nowych czystych klatek na podgrzewaczu.

W przypadku implantacji komórek nowotworowych pod kontrolą ultradźwięków wyreguluj platformę ultradźwiękową tak, aby powierzchnia była równoległa do podłogi i stań po lewej stronie zwierzęcia z głową myszy skierowaną w prawo. Dostosuj pozycję przetwornika tak, aby uzyskać poprzeczny obraz brzucha i przymocuj kończyny myszy do platformy za pomocą taśmy. Delikatnie opuść przetwornik, aby zetknął się z brzuchem myszy i wyreguluj przetwornik, aż trzustka będzie wyraźnie widoczna. Zlokalizuj lewą nerkę i śledzionę, aby zapewnić dokładną orientację w jamie brzusznej.

Po zlokalizowaniu miejsca wstrzyknięcia załaduj półcalową strzykawkę insulinową o rozmiarze 29 z 25 mikrolitrami zawiesiny komórek nowotworowych i przetrzyj końcówkę igły sterylnym wacikiem nasączonym alkoholem. Użyj kleszczyków o krawędziach, aby chwycić skórę myszy i ścianę otrzewnej, aby zwiększyć napięcie w miejscu wstrzyknięcia. Trzymając strzykawkę pod kątem około 25 do 45 stopni do powierzchni platformy ultradźwiękowej, powoli przesuwaj igłę przez skórę i ścianę otrzewnej. Upewnij się, że igła przebiła się przez ścianę otrzewnej przed wykorzystaniem wizualizacji ultradźwiękowej, aby wprowadzić igłę bezpośrednio do trzustki.

Gdy igła jest na miejscu, powoli wstrzyknij komórki nowotworowe. Tworzenie się płynnego bolusa w trzustce będzie widoczne w prawidłowo wstrzykniętej trzustce za pomocą ultradźwięków. Po wstrzyknięciu pełnej objętości zawiesiny i zaobserwowaniu płynnego bolusa za pomocą ultradźwięków, należy trzymać strzykawkę nieruchomo przez kilka sekund, a następnie powoli wycofać igłę z brzucha myszy, uważając, aby nie naruszyć wstrzykniętych komórek. Następnie umieść mysz w nowej, czystej klatce na podgrzewaczu z monitorowaniem aż do pełnego wyzdrowienia.

- Prawidłowe umieszczenie igły w trzustce, w tym głębokość i kąt igły, jest kluczowym krokiem w tym protokole. Wizualizacja bolusa płynowego pomaga potwierdzić udane wstrzyknięcie guza. Kontrolowanie głębokości wtrysku jest najtrudniejszym aspektem. Radzę ćwiczyć z zastrzykami z trypan-niebieskim i potwierdzać bolus płynny zarówno za pomocą ultradźwięków, jak i sekcji zwłok.