Ilościowa reakcja łańcuchowa polimerazy w celu zliczenia bakteriofagów

Przygotować premiks qPCR dla 10 biopanowanych próbek fagów o nieznanym stężeniu i 7 próbek o standardowych stężeniach w trzech egzemplarzach, co daje premiks dla 51 próbek zawierających 255 mikrolitrów qPCR Master Mix, 51 mikrolitrów starterów i 102 mikrolitry wody.

Podwielokrotność 8 mikrolitrów przygotowanego PCR wymieszać do 51 dołków 96-dołkowej płytki qPCR. Następnie dodaj dwa mikrolitry poddanych obróbce cieplnej próbek fagów T7 do każdej z tych studzienek, dozując je pod powierzchnię premiksu qPCR. Za pomocą folii samoprzylepnej uszczelnij płytkę.

Owiń płytkę folią aluminiową, aby zminimalizować fotowybielanie fluorescencyjne, a następnie przystąp do uruchamiania płytki na sprzęcie qPCR. Ustaw warunki cykliczne i ustawienia krzywej topnienia zgodnie z opisem w protokole tekstowym.