Przeszczep ludzkich nerwowych komórek progenitorowych w mózgu myszy

Zabezpiecz znieczuloną mysz w stereotaktycznej ramce.

Nałóż maść do oczu, aby zapobiec wysuszeniu rogówki.

Ogol skórę głowy i zdezynfekuj skórę.

Włóż paski uszne, aby ustabilizować czaszkę.

Następnie wykonaj nacięcie w linii środkowej, aby odsłonić czaszkę.

Wywierć otwór w czaszce na współrzędnej celu.

Załaduj strzykawkę genetycznie zmodyfikowanymi ludzkimi neuronalnymi komórkami progenitorowymi lub NPC eksprymującymi lucyferazy i białkiem fluorescencyjnym w celu wizualizacji.

Wyrównać strzykawkę z miejscem docelowym i opuścić igłę na żądaną głębokość.

Nałóż klej tkankowy wokół igły, aby zapobiec wyciekowi komórek.

Wstrzykiwać komórki powoli, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie.

Przytrzymaj igłę na miejscu przez krótki czas, aby zapobiec cofaniu się zawiesiny komórek.

Na koniec powoli wycofaj igłę i zamknij nacięcie.

Model myszy z przeszczepionymi NPC jest teraz gotowy do wizualizacji.

Przetransportuj zwierzę z komory indukcyjnej do ramy stereotaktycznej, utrzymując znieczulenie za pomocą maski na twarz.

Zastosuj lubrykant okulistyczny, aby zapobiec wysuszeniu oczu. Ogol skórę głowy myszy elektryczną maszynką do golenia i zdezynfekuj skórę 5-procentowym roztworem betadyny za pomocą wacików. Zabezpiecz głowę myszy i włóż nauszniki do zewnętrznego przewodu moczowego.

Wywierć otwór o średnicy od dwóch do trzech milimetrów przez czaszkę za pomocą chirurgicznego wiertła dentystycznego. Ponownie zawiesić przygotowane komórki w probówce i pobrać dwa mikrolitry zawiesiny komórek do strzykawki. Umieść strzykawkę nad miejscem docelowym i powoli przesuń igłę na powierzchnię opony twardej i oblicz współrzędne głębokości.