Modelowanie kolonizacji komórek raka jajnika sieci komórkowej: metoda ex vivo do ustalenia kolonizacji plamki mlecznej znakowanych fluorescencyjnie komórek raka jajnika w mysich eksplantatach sieci

Sieć, bogata w tłuszcz tkanka w jamie otrzewnej, składa się z magazynów tłuszczu, które zapewniają odpowiednie mikrośrodowisko dla przerzutowych komórek rakowych do kolonizacji i tworzenia guzów wtórnych. Aby zbadać tę kolonizację ex vivo, zacznij od umieszczenia przepuszczalnej błoniastej wkładki do hodowli komórkowej wewnątrz płytki hodowlanej.

Nałóż klej tkankowy na wewnętrzną część membrany wkładki. Umieść mysi eksplant na kleju, aby unieruchomić tkankę. Delikatnie umieść zawiesinę znakowanych fluorescencyjnie komórek raka jajnika na wierzchu sieci komórkowej.

Następnie wypełnij boki studzienki odpowiednim podłożem, aby uzupełnić wzrost komórek i inkubować przez żądany czas. Tkanka jajowa zawiera wyspecjalizowane struktury zwane plamkami mlecznymi, które są skupiskami komórek odpornościowych upakowanych wokół sieci naczyń krwionośnych. Te komórki odpornościowe wydzielają pewne czynniki chemiczne, które przyciągają komórki rakowe i sprzyjają ich implantacji. Skolonizowane komórki rakowe namnażają się, symulując warunki przerzutowe.

Na koniec wyrzuć zużyte nośniki. Obserwuj kulturę za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego, aby ocenić fluorescencyjne kolonie komórek rakowych w tkance omentalnej.

Hoduj i przygotuj fluorescencyjnie znakowane komórki i ponownie zamieszaj w stężeniu 2 milionów komórek na mililitr. Nałóż około 6 mikrolitrów kleju tkankowego na membranę wkładki hodowlanej i pozostaw do wyschnięcia na powietrzu. Następnie umyj membranę dwukrotnie sterylną wodą, aby usunąć nadmiar kleju przed wysuszeniem membran na powietrzu pod laminarnym kapturem.

Ostrożnie wytnij omentę i przymocuj ją do membrany pokrytej klejem za pomocą sterylnych kleszczyków. Po pozostawieniu tkanki do przylegania do błony przez jedną minutę, dodaj 500 mikrolitrów zawiesiny komórkowej na wierzch każdej sieci w każdej wkładce hodowlanej.

Następnie wypełnij obszar wokół komory transwell 2,5 mililitra pożywki DME/F-12. Inkubuj omentę z zawiesiną komórkową przez sześć godzin w temperaturze 37 stopni Celsjusza w środowisku 5% CO2. Ostrożnie wyjmij i umyj omentę około 10 mililitrami PBS. Na koniec uwidocznij ogniska fluorescencyjnych komórek rakowych za pomocą odpowiedniego systemu obrazowania fluorescencyjnego.

• Omentum – An adipose-rich tissue within the peritoneal cavity.
• Omental Tissue – Tissue providing a microenvironment for cancer cells.
• Ovarian Cancer – Cancer that seeds and proliferates on the omentum.
• Milky Spots – Structures that attract and support cancer cell implantation.
• Omental Metastasis – Secondary tumor colonization within the omental tissue.

• Omentum is a fat-rich depot providing a home for cancer cells (e.g., omental tissue).
• The omental tissue contains specialized structures known as milky spots (e.g., theory).
• Milky spots secrete chemicals, attracting and supporting cancer cells (e.g., processes).
• The seeded cancer cells proliferate, simulating metastatic conditions (e.g., experiment).

• What is the role of omentum and milky spots in ovarian cancer metastasis?
• What causes proliferation of cancer cells within the omental tissue?
• How do milky spots support cancer cell implantation?

• This research can contribute to new treatment strategies for ovarian cancer (e.g., technology).
• The findings can impact healthcare by improving understanding of metastasis (e.g., healthcare).
• The research could lead to improved quality of life for patients with ovarian cancer (e.g., sustainability).
• The research paves the way for advancement in the treatment of metastatic cancers (e.g., innovations).