Wspólna hodowla eksplantatu zwoju korzenia grzbietowego z komórkami Schwanna do mielinizacji neuronów

Rozpocząć od płytki wielodołkowej zawierającej szkiełko nakrywkowe pokryte poli-D-lizyną i pożywką do wzrostu neuronów.

Umieść embrionalny ganglion korzenia grzbietowego myszy lub DRG, bogaty w neurony czuciowe, w tej studni i inkubuj.

Neurony DRG wykorzystują składniki odżywcze i czynniki wzrostu, które ułatwiają ich wzrost, a następnie wydłużają się projekcje neuronalne, tworząc aksony.

Aksony te wyrastają z tkanki DRG, ustanawiając hodowlę eksplantatów DRG.

Zastąp pożywkę pożywką do kohodowli uzupełnioną kwasem askorbinowym z komórkami Schwanna, wyspecjalizowaną komórką glejową.

Z biegiem czasu aksony wydzielają cząsteczki sygnałowe, które wywołują migrację komórek Schwanna w kierunku aksonów.

Tymczasem kwas askorbinowy stymuluje różne szlaki sygnałowe w komórkach Schwanna.

Te aktywowane komórki zaczynają rozciągać swoje bogate w lipidy błony plazmatyczne wokół aksonów, owijając je wieloma warstwami, tworząc osłonkę mielinową.

Ta mielinizacja powoduje powstanie izolacyjnej powłoki wokół aksonów, która jest niezbędna do efektywnej komunikacji neuronalnej.

Weź czterodołkową płytkę zawierającą 190 mikrolitrów pożywki wzrostowej DRG w każdym dołku i ostrożnie przenieś pojedynczy DRG na środek każdej studzienki za pomocą drobnych kleszczy i szpatułki. Następnie umieść kultury eksplantatów DRG w inkubatorze w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% dwutlenku węgla. Następnego dnia ostrożnie dodaj 50 mikrolitrów pożywki wzrostowej DRG do każdej studzienki i obserwuj przyleganie DRG do eksplantatu i wzrost aksonów za pomocą mikroskopu codziennie. W celu wspólnej hodowli w trzecim dniu hodowli eksplantatów DRG ostrożnie zastąp pożywkę wzrostową DRG 250 mikrolitrami pożywki do kohodowli zawierającej 30 000 komórek Schwanna na studzienkę.