JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:37 min. • July 8th, 2025
Weźmy zwój korzenia grzbietowego lub DRG, skupisko neuronów czuciowych, w zimnym podłożu zawierającym surowicę, aby chronić neurony podczas późniejszego przetwarzania.
Odwirować, a następnie usunąć supernatant.
Dodać bufor fosforanowy zawierający enzymy trawienne i inkubować z łagodnym mieszaniem.
Enzymy dysocjują macierz zewnątrzkomórkową lub ECM i tkankę DRG, rozluźniając komórki.
Dodaj pożywkę zawierającą surowicę, aby dezaktywować enzymy.
Odwirować, a następnie wyrzucić supernatant.
Ponownie zawiesić DRG i mechanicznie zdysocjować tkankę za pomocą pipet o stopniowo zmniejszających się rozmiarach, aby uzyskać zawiesinę komórek.
Ułóż komórki na gradiencie gęstości albuminy surowicy bydlęcej.
wirówka. Neurony osiadają na dnie, tworząc osad.
Wyrzuć warstwy zawierające resztki tkanek.
Ponownie zawiesić neurony w pożywce hodowlanej.
Dodaj neurony do naczynia hodowlanego pokrytego ECM i inkubuj.
Usuń pożywkę i dodaj komórki NK lub NK.
Dodaj pożywkę do kohodowli i zbadaj interakcję między tymi komórkami.
Zbierz DRG do 15-mililitrowej stożkowej rurki wypełnionej 10 mililitrami lodowatego, uzupełnionego DMEM. Następnie odwirować preparat przez 5 minut w temperaturze 200 g w temperaturze
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych