Wstrzyknięcie domózgowo-komorowe w celu analizy dystrybucji mysiego wirusa cytomegalii w mózgu noworodka myszy

Weźmy zawiesinę mysiego wirusa cytomegalii, genetycznie zmodyfikowanego w celu ekspresji wzmocnionego białka zielonej fluorescencji, co pozwala na wizualizację.

Zawiesinę należy umieścić w strzykawce z dołączoną igłą.

Następnie znieczul szczeniaka myszy, umieszczając go na lodzie.

Zidentyfikuj miejsce wstrzyknięcia na głowie szczeniaka.

Włóż igłę prostopadle do powierzchni czaszki, aż dotrze do komory bocznej, płynu mózgowo-rdzeniowego lub jamy wypełnionej płynem mózgowo-rdzeniowym w mózgu.

Wstrzyknąć zawiesinę do komory bocznej.

Pozwól szczeniakowi dojść do siebie.

Wstrzyknięty wirus krąży w komorze płynu mózgowo-rdzeniowego, docierając do komórek wyściółki obszaru brzeżnego i komórek nabłonkowych splotu naczyniówkowego.

Wirus przyczepia się do receptorów powierzchniowych na tych komórkach, internalizuje się, ulega replikacji i rozprzestrzenia się z komórki na komórkę, powodując ostrą infekcję w splocie naczyniówkowym, obszarze brzeżnym i strefie podkomorowej.

Zacznij od wysterylizowania strzykawki o pojemności 10 mikrolitrów i igły o rozmiarze 27 z 70% alkoholem. Następnie załaduj 5 mikrolitrów mysiego roztworu do wstrzykiwań wirusa cytomegalii lub mikrogranulek fluorescencyjnych do igły, ostrożnie pociągając za tłok strzykawki.

Po znieczuleniu i unieruchomieniu nowonarodzonej myszy P0,5 poprzez umieszczenie jej na lodzie na trzy do czterech minut, użyj metody reakcji szczypania palców u stóp, aby określić głębokość znieczulenia. Zaznaczyć miejsce wstrzyknięcia na znieczulonej myszy nietoksycznym pisakiem laboratoryjnym w miejscu około 0,7 do 1,0 milimetra po boku szwu strzałkowego i 0,7 do 1,0 milimetra ogonowo od szwu noworodka. Ten diagram przedstawia witrynę bardziej szczegółowo.

Dla porównania, zaznacz 2 milimetry od końcówki igły nietoksycznym markerem. Następnie należy wprowadzić igłę na głębokość 2 milimetrów, prostopadle do powierzchni czaszki w zaznaczonym miejscu wstrzyknięcia. Następnie powoli wstrzyknij 5 mikrolitrów mysiego wirusa cytomegalii do komory bocznej bez otwierania skóry głowy.

W innej grupie myszy tą samą metodą wstrzyknij 5-mikrolitrowy roztwór zawierający fluorescencyjne mikrogranulki. Po wstrzyknięciu należy pozostawić igłę na miejscu przez 10 do 20 sekund, aby zapobiec cofaniu się. Następnie powoli wyjmij igłę. Pozostawić zwierzętom, którym wstrzyknięto zastrzyk, na regenerację przez 5 do 10 minut w ciepłym pojemniku, aż do przywrócenia ruchu i ogólnej reakcji.