Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Weźmy na przykład nowo powstałe, genetycznie zmodyfikowane dorosłe muchówki Drosophila.
Ciała grzybów w mózgu muchy zawierają neurony, które wyrażają zielone białka fluorescencyjne.
Ciała grzybów to struktury zawierające złożone sieci neuronowe niezbędne do uczenia się i zapamiętywania.
Znieczul muchy na podkładce z dwutlenkiem węgla.
Pod mikroskopem stereoskopowym wyposażonym w wymagane filtry wizualizuj ciała grzybów wyrażające zieloną fluorescencję.
Weź odkażoną szpilkę Minutien i wepchnij ją przez kapsułkę na głowę do korpusu grzyba.
Powoduje to uszkodzenie neuronów ciała grzyba i zakłóca sieci neuronowe, powodując penetrujące urazowe uszkodzenie mózgu.
Następnie delikatnie wyjmij szpilkę z rozporka.
Umieść zranione muchy w fiolce z jedzeniem i pozwól im dojść do siebie w celu dalszych badań.
Po znieczuleniu much na podkładce z dwutlenkiem węgla, w ciągu sześciu godzin od eklacji należy posortować nowo zamknięte młode samce much F1 i umieścić je w czystych fiolkach zawierających pokarm z 40 lub mniej muchami na fiolkę. Następnie zdezynfekuj szpilki minutien, umieszczając około 100 szpilek w 1,5-mililitrowej probówce mikrowirówkowej wypełnionej 70% etanolem na pięć minut. Następnie zdezynfekuj podkładkę z dwutlenkiem węgla w pędzlu, rozpylając 70% etanolu i wycierając do sucha czystą, niestrzępiącą się chusteczką.
Gdy narzędzia są czyste i suche, przenieś 40 lub mniej posortowanych samców F1 na czystą podkładkę i podziel je na dwie grupy. Jedna grupa posłuży jako nieuszkodzone muchy kontrolne, a druga grupa eksperymentalna zostanie poddana penetrującemu urazowemu uszkodzeniu mózgu. Następnie, za pomocą kleszczy, wyciągnij od czterech do pięciu nowych szpilek z probówki mikrowirówki i umieść je w pobliżu krawędzi podkładki z dwutlenkiem węgla. Następnie pod lunetą sekcyjną wybierz prostą szpilkę z ostrym końcem. Ponownie użyj ostrych szpilek i umieść uszkodzone lub szpilki w osobnej tubie zawierającej 70% etanolu w celu bezpiecznej utylizacji.
Następnie, dla muszek o standardowym genotypie krzyżowym, należy włączyć lampę LED stereomikroskopu wyposażoną w odpowiednie filtry wzbudzenia i emisji dla białka zielonej fluorescencji, co pozwala na wzbudzenie w odległości od 440 do 460 nanometrów i umożliwia wizualizację w odległości od 500 do 560 nanometrów. Następnie wybierz muchę z grupy eksperymentalnej i ustaw muchę tak, aby eksperymentator miał widok grzbietowy na kapsułę głowy z głową muchy po prawej stronie. Za pomocą kleszczy podnieś i przytrzymaj wybraną szpilkę do malowania w jednej ręce, a pędzel w drugiej. Następnie umieść szczoteczkę po wewnętrznej stronie grzbietowej klatki piersiowej i delikatnie dociśnij, aby ustabilizować muchę.
Wyceluj końcówką szpilki w korpusy grzybów, ciała komórek po prawej stronie głowy i przebij torebkę głowy. Jeśli używasz punktów orientacyjnych, celuj w naskórek głowy grzbietowej między oczkami a grzbietową krawędzią oka. Po zakończeniu urazu za pomocą pędzla delikatnie odepchnij główkę od kołka drobnicowego. Jeśli używasz mózgu do sekwencjonowania RNA lub qRT-PCR, wykonaj drugi uraz po lewej stronie głowy. Gdy wszystkie eksperymentalne muchy zostaną zranione, umieść kontrolne i zranione muchy w oddzielnych oznakowanych fiolkach zawierających pokarm.
