JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:52 min. • May 29th, 2025
Zacznij od ustawienia światła wzbudzającego dla mikroskopu dwufotonowego.
Weźmy znieczulone transgeniczne szczenię myszy z okrągłym szklanym okienkiem do obrazowania i płytką głowy wszczepioną w czaszkę.
Neurony wyrażają białka czerwonej fluorescencji, aby ułatwić obrazowanie.
Wyczyść szklane okienko do obrazowania i przymocuj szczenię do stolika obrazowania dwufotonowego.
Dopasuj okienko obrazowania do obiektywu mikroskopu, regulując głowę szczeniaka.
Użyj poduszki grzewczej, aby utrzymać temperaturę ciała szczeniaka.
Dostosuj natężenie przepływu środka znieczulającego.
Nałóż kroplę wody na szkiełko nakrywkowe, a następnie opuść soczewkę obiektywu mikroskopu.
Mikroskopia dwufotonowa wykorzystuje dwa fotony światła do aktywacji białek fluorescencyjnych, umożliwiając szczegółowe obrazowanie neuronów przy minimalnym szumie tła i fotowybielaniu.
Uchwyć obrazy neuronów na różnych głębokościach, aby zobrazować ich strukturę
Na koniec ułóż obrazy, aby wygenerować trójwymiarową reprezentację neuronu, w tym ich projekcje neuronalne, aby zbadać zmiany morfologiczne związane ze wzrostem.
Aby rozpocząć obrazowanie, najpierw ustaw dwufotonową długość fali lasera. Do wzbudzenia RFP użyj długości fali 1,0
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych