Stereotaktyczne wstrzykiwanie wektorów wirusowych do przeprogramowania komórek glejowych w modelu mysim
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:58 min. • June 17th, 2025
Zabezpiecz znieczuloną mysz transgeniczną w stereotaktycznej ramie z odsłoniętą czaszką.
Ta mysz wykazuje ekspresję rekombinazy Cre w komórkach glejowych.
Umieść ramię stereotaktyczne trzymające rurkę kapilarną nad czaszką i ustaw je nad bregmą.
Dostosuj osie stereotaktyczne, aby uzyskać precyzyjne celowanie.
Wywierć otwór w miejscu docelowym, upewniając się, że opona twarda pozostaje nienaruszona. Usuń fragmenty kości.
Przepłukać rurkę kapilarną buforem. Przygotuj pęcherzyk powietrza, a następnie załaduj wirusa związanego z adenowirusem przenoszącym nieaktywne przeprogramowanie neuronów i geny białek fluorescencyjnych.
Opuść rurkę kapilarną na głębokość docelową i wstrzyknij roztwór wirusa do obszaru bogatego w komórki glejowe.
Ostrożnie schuj rurkę, aby zapobiec cofaniu się.
Zamknij nacięcie i pozwól na powrót do zdrowia.
Zinternalizowane wirusy dostarczają inaktywowane geny po bokach loxP do jądra glejowego. Rekombinaza Cre odwraca je, aktywując geny przeprogramowania neuronów i napędzając konwersję neuronalną. Przeprogramowane interneurony wyrażają białko fluorescencyjne pod promotorem specyficznym dla neuronu.
W celu wstrzyknięcia czynników przeprogramowujących należy umieścić znieczul
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych