Pobieranie śliny i pomiar kortyzolu i alfa-amylazy w ślinie u osób starszych mieszkających w słabych społecznościach za pośrednictwem opiekunów rodzinnych

Ogólnym celem tej procedury jest zademonstrowanie zbierania i analizy pomiarów biologicznych śliny w populacji zamieszkującej społeczność, która jest słaba medycznie. Osiąga się to poprzez uprzednie zgromadzenie niezbędnych zapasów do zbierania śliny. Drugim krokiem jest umówienie się na wizytę domową, dostarczenie materiałów i zademonstrowanie opiekunowi procedur pobierania śliny.

Następnie przekaż pisemne instrukcje i odpowiedz na wszelkie pytania. Ostatnim krokiem jest zwrócenie próbek śliny do laboratorium i przeprowadzenie procedur testowych. Ostatecznie protokół ma na celu pomiar dobowego profilu stężenia alfa-amylazy w ślinie i kortyzolu w ślinie u pacjentów słabych medycznie mieszkających w społeczności.

Metoda ta odpowie na kluczowe pytania w dziedzinie badań biobehawioralnych, aby poszerzyć naszą wiedzę na temat wrażliwości biologicznej i podatności na procesy związane ze stresem. Przed umówieniem się na wizytę domową, uczestnicy gromadzą i kompletują niezbędne materiały, w tym cztery psychometryczne wymazówki dla dzieci, cztery probówki do przechowywania wacików, cztery kolorowe nakrętki do probówek, pięć białych etykiet, jedną plastikową torbę Ziploc, instrukcję pobierania śliny, pięć rękawiczek nitro i pudełko do przechowywania. Używając dłoni w rękawiczce nitro, umieść cztery waciki dla dzieci Salome w czterech probówkach do przechowywania wacików i przykryj je odpowiednio żółtymi, pomarańczowymi, niebieskimi i fioletowymi nasadkami.

Następnie umieść etykietę na każdej tubie do przechowywania, aby wskazać czas pobrania. Umieść cztery zakręcone probówki do przechowywania, instrukcję pobierania śliny i cztery rękawice nitro w torbie Ziploc i oznacz ją identyfikatorem podmiotu i datą pobrania. Zgodnie z tym harmonogramem krótka wizyta domowa u osób, które wcześniej wyraziły na to zgodę i w dniu poprzedzającym pobranie próbki śliny.

Po przybyciu do domu osoby badanej, przekaż plastikową torbę z materiałami i instrukcję do osoby zbierającej ślinę. Przejrzyj instrukcję i podkreśl potrzebę zapisywania czasu rozpoczęcia i zakończenia pobierania śliny, podkreślając pisemne instrukcje. Zapisz nazwę, dawkowanie i harmonogram wszystkich leków na receptę i bez recepty przyjmowanych przez uczestnika w ciągu ostatnich 48 godzin.

Poinstruuj osobę zbierającą ślinę lub SC, aby nałożyła rękawicę nitro na dominującą rękę. Powiedz uczestnikowi, aby przechylił głowę do przodu, aby ślina mogła zebrać się na dnie jego ust. Następnie poinstruuj SC, aby odkręcił probówkę do przechowywania wacika i wyjął wymazówkę z jamy ustnej.

Poinstruuj SC, aby umieścił wymazówkę z jamy ustnej pod przednią częścią języka starszej osoby dorosłej w celu wchłonięcia około trzech kropli zebranej śliny i przytrzymał wymazówkę z jamy ustnej na miejscu przez dwie minuty, aby upewnić się, że jest nasycona, poproś SC o powrót nasyconego wacika z powrotem do kosza probówki do przechowywania wacika, i załóż nasadkę. Następnie poproś SC o natychmiastowe umieszczenie probówki w pudełku do przechowywania i umieszczenie jej w zamrażarce. Po wyrzuceniu rękawicy do kosza na śmieci poinformuj SC, aby zapisał czas rozpoczęcia i zakończenia na karcie instrukcji dotyczącej śliny.

Następnie poinformuj SC, że będą pobierać próbki śliny czterokrotnie następnego dnia, szczególnie po przebudzeniu 30 minut po przebudzeniu rano i wieczorem, niech SC powie pacjentowi, aby przepłukał usta wodą 10 minut przed pobraniem śliny. Po pobraniu śliny należy wyrzucić próbki widocznie zanieczyszczone krwią. Poinstruować SC, że próbki śliny powinny pozostać w zamrażarce do czasu ich odzyskania przez zespół badawczy.

Zadzwoń do zespołu badawczego, aby potwierdzić, że zaplanują godzinę i dzień na pobranie zamrożonych próbek i przyniesienie nowych materiałów do pobierania śliny na dowolny przyszły termin pobrania. Po wyjęciu próbek z zamrażarki osoby badanej należy je zamrozić podczas transportu do laboratorium, umieszczając je w izolowanej torbie do zamrażania. Po przybyciu do laboratorium zastąp białą etykietę na każdej probówce sekwencyjnym kodem kreskowym.

Sprawdź, czy sekwencyjny kod kreskowy jest zgodny z identyfikatorem podmiotu, datą odbioru i godziną odbioru. Następnie umieść próbki śliny w zamrażarce o temperaturze minus 20 stopni Celsjusza, aby wytrącić mucynę. Po rozmrożeniu próbek śliny należy je odwirować pod ciśnieniem 1500-krotności grawitacji przez 15 minut.

Gdy odczynniki z zestawu do oznaczania śliny osiągną temperaturę pokojową przez około 90 minut, przygotuj bufor do płukania zgodnie z instrukcjami zestawu, odpipetuj 25 mikrolitrów wzorców, kontrolek i próbek do odpowiednich dołków na płytce 96-dołkowej. Po tej pipecie wlej 200 mikrolitrów wcześniej przygotowanego roztworu enzymu sprzężonego do studzienek. Wymieszać próbki, umieszczając płytkę na rotatorze na pięć minut przy prędkości 500 obr./min.

Po inkubacji próbek w temperaturze pokojowej przez 55 minut, przemyć i osuszyć płytkę czterokrotnym buforem do przemywania wodą. Następnie dodaj 200 mikrolitrów roztworu tetraetylobenzyny lub TMB. Po mieszaniu próbek przez pięć minut.

Przy 500 obr./min przykryj płytkę folią aluminiową i inkubuj je w ciemności przez dodatkowe 25 minut. Po zakończeniu dodać 50 mikrolitrów roztworu zatrzymującego i mieszać próbki przez trzy minuty przy 500 obr./min. W ciągu 10 minut od dodania roztworu zatrzymującego wytrzeć spód płytki i odczytać płytkę za pomocą czytnika płytek o długości nanometra 450.

Następnie oblicz stężenie kortyzolu, korzystając ze średniej gęstości optycznej. Odejmij średnią gęstość optyczną w niespecyficznych studzienkach wiążących od średniej gęstości optycznej w zerowych standardowych studzienkach kontrolnych i dołkach do pobierania próbek. Na koniec oszacuj stężenia kontroli i niewiadomych za pomocą oprogramowania zdolnego do logistyki.

Opisane procedury mają na celu pomiar dobowego profilu stężenia śliny, alfa-amylazy i kortyzolu w ślinie. Ponieważ wykazano, że wyniki kortyzolu są dodatnio zniekształcone, sugeruje się użycie transformacji logarytmicznej do danych w celu uzyskania rozkładu normalnego. Dostępnych jest kilka strategii modelowania różnic w dobowych rytmach kortyzolu i alfa amylazy.

Pierwszą strategią jest wykreślenie dziennej zmiany alfa-amylazy lub kortyzolu między przebudzeniem a 30 minutami po przebudzeniu. Drugą strategią jest wykreślenie całkowitego stężenia kortyzolu lub alfa amylazy w ciągu jednego dnia. Uzyskane parametry podsumowania można podzielić na dwie ogólne kategorie: miarę wielkości odpowiedzi lub miary wzorca odpowiedzi w czasie.

Modelowanie krzywej wzrostu może być przydatne w badaniach, w których wiele próbek pobiera się od osób w ciągu dnia. Krzywą wzrostu można dopasować tak, aby uwzględnić indywidualne różnice w cyklu dobowym, dodając predyktory na poziomie indywidualnym lub pomiaru. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak zbierać ślinę i jak uczyć opiekunów, jak pobierać ślinę z medycznego punktu widzenia dla naszych starszych osób w warunkach domowych, a także powinieneś dobrze rozumieć, jak przeprowadzać analizę laboratoryjną analitów śliny, które są wykonalne, mają wysoką zgodność i dają próbki o wysokiej jakości.