Elastyczna kolonoskopia u myszy w celu oceny ciężkości zapalenia jelita grubego i guzów jelita grubego przy użyciu zwalidowanego systemu punktacji endoskopowej
16 października 2013
W ciągu ostatnich kilku lat, endoskopy nowej generacji stały się ważnymi diagnostycznymi pomocami badawczymi do oceny mysiego zapalenia jelita grubego i guzów jelita grubego. Przedstawiamy tutaj szczegółowy protokół endoskopowej oceny stanu zapalnego i guzów jelita grubego u myszy, a także nowatorski system punktacji, który wykorzystuje identyfikatory dziesiętne do dokumentowania endoskopowego nasilenia zapalenia jelita grubego i guzów jelita grubego.
Cześć, nazywam się Tomohiro Kani, jestem wizytującym pH z Uniwersytetu Nintendo w Tokio, a ja jestem Fabio Elli, dyrektorem Centrum Badań nad Zdrowiem Układu Pokarmowego, w przypadku Western Reserve University School of Medicine. W tym filmie opiszemy naszą metodologię wykonywania kolonoskopii u myszy. Podkreśl znaczenie zapoznania się z normalną anatomią endoskopową.
Opisz, jak skutecznie rozwiązywać problemy podczas endoskopii, aby zminimalizować uraz i artefakty obrazu. I na koniec opisz nasz system punktacji do oceny stanu zapalnego jelit w modelu mu eye zapalenia jelita grubego i raka związanego z zapaleniem jelita grubego. Dziękuję państwu za uwagę.
Najpierw skonfiguruj system endoskopowy w momencie przymocowania lunety do centrum systemu wideo i źródła światła. Wysterylizuj lunetę i załóż strzykawkę do wdmuchiwania powietrza. Następnie włącz system i wyreguluj balans bieli Ze zwierzęciem.
Odpowiednio znieczulone i skrępowane przystępują do badania endoskopowego. W razie potrzeby można pobrać próbki z biopsji. Po ustaleniu zakresu ogrzej mysz światłem, aby na końcu odzyskać siły.
Wyjaśniono system punktacji do oceny zapalenia okrężnicy i związanego z nim raka okrężnicy. Konfiguracja systemu endoskopowego. System endoskopowy składa się z centrum systemu wideo, ksenonowego źródła światła i magnetowidu.
Używamy ludzkiego ureteroskopu do kolonoskopii u myszy. Nasza luneta URFV to elastyczna luneta wideo, która wykorzystuje czujnik CCD. Średnica zewnętrzna rurki wprowadzającej wynosi 3,3 milimetra, a dystalny koniec ma średnicę 2,8 milimetra.
Aby rozpocząć, przymocuj lunetę do centrum systemu wideo i źródła światła. Następnie wysterylizuj lunetę i powierzchnię obiektywu 70% etanolem. Następnie podłącz trzymilimetrową strzykawkę do kanału roboczego.
Służy do regulacji ilości powietrza śródświetlnego za pomocą wdmuchiwania lub aspiracji. Włącz wyłącznik główny i ustaw balans bieli. Nie zapomnij również ustawić w trybie NBI Dwa, znieczulając mysz.
Najpierw zademonstruję znieczulenie wziewne Używając izofluoru, używamy od czterech do 5% izofluoru do indukcji. Po tym, jak mysz przestanie się poruszać, zmniejsz stężenie do dawki podtrzymującej od jednego do 2%Unieruchamiaj mysz na stole, przyklejając taśmą ogon i kończyny dolne. Oklejanie ogona jest szczególnie ważne, aby mysz była nieruchoma podczas określania zakresu.
Również wstrzyknięcie dootrzewnowe tri bromo. Do znieczulenia można użyć etanolu. Trzy. Endoskopia Zmiany okołoodbytnicze nie są częścią oceny endoskopowej, ale są ważnym odkryciem i powinny być obserwowane przed założeniem i nie należy ich mylić z krwawieniem pourazowym.
Przed włożeniem pokryj lunetę smarem chirurgicznym, pamiętaj, aby nie pokryć czujnika CCD. Włóż lunetę przez odbyt. To początkowe wprowadzenie powinno być tak delikatne, jak to możliwe, ponieważ ślepe wprowadzenie może uszkodzić błonę śluzową okrężnicy.
Włącz światło i rozpocznij nagrywanie. Powoli i ostrożnie wciskać strzykawkę powietrzną, aby uzyskać pole widzenia. Zbyt duża inflacja powietrza może zabić jamę ustną.
Obecność spontanicznego krwawienia należy ocenić po wprowadzeniu endoskopu do kąta odbytnicy lub okrężnicy. Obsługa dostosowuje widok w pionie, a kontrola momentu obrotowego służy do regulacji w poziomie. Koordynacja między tymi dwoma kontrolami jest bardzo ważna.
Zwróć uwagę na przezroczystość. W normalnej okrężnicy ściana jest przezroczysta z normalnym unaczynieniem i bez żadnej grubości. Przezroczystość definiuje się jako przezścienną widoczność naczyń lub narządów zaocznych.
Powtarzający się ruch wkładania i wyciągania pomaga w ocenie w normalnej okrężnicy. Podczas badania widoczne są zarówno małe, jak i duże naczynia. W razie potrzeby można zrobić zdjęcia lub pobrać próbki z biopsji.
Sprawdź, czy nie ma krwawienia kontaktowego. Podczas wyjmowania endoskopu nie jest konieczne celowe skrobanie błony śluzowej. Tryb obrazowania wąskopasmowego podkreśla drobne struktury naczyń w błonach śluzowych.
Odbytnica jest otoczona mięśniami, podczas gdy okrężnica nie jest unieruchomiona przez otaczające tkanki. Z powodu tej różnicy anatomicznej wnętrzności zaoczne nie są widoczne w odbytnicy. Granulki kału są czasami obecne w pobliżu odbytu.
Można je usunąć za pomocą wdmuchiwania powietrza, jednak czasami mogą się utrzymywać i zasłaniać widok endoskopowy. W takich przypadkach użyjemy do jednego miliona lewatywy PBS do wypłukania stolca. Kał jest zwykle wydalany po kilku minutach.
Częstym problemem jest również nieostry widok spowodowany obecnością smug na soczewce, zwłaszcza w przypadku zapalenia jelita grubego lub krwawienia. W tej sytuacji staraliśmy się wyczyścić soczewkę za pomocą wdmuchu powietrza. Ta procedura może być skuteczna w czyszczeniu soczewki bez wycofywania lunety.
Ruch perystaltyczny jest jedną z normalnych czynności fizjologicznych jelit. Ponieważ wdmuchiwanie powietrza nie jest skuteczne w rozszerzaniu światła podczas perystaltyki, należy poczekać, aż fala perystaltyczna przejdzie. Po czwarte, próbki z biopsji biopsji uzyskuje się za pomocą elastycznych kleszczyków do biopsji.
Kubki są otwierane i zamykane za pomocą uchwytu. Włóż kleszcze do kanału roboczego. Uważaj, aby nie przebić jelita.
Otwórz miseczki do odpowiedniego rozmiaru i umieść końcówkę w obszarze zainteresowania. Delikatnie zamknij miseczki i mocno pociągnij. Usunąć próbkę, przepłukując ją odpowiednim roztworem.
Po piąte, powrót do zdrowia. Po badaniu ogrzej mysz, aż dojdzie do siebie. Używamy światła elektrycznego do ogrzewania sześciu punktów na zapalenie okrężnicy.
Nasz system punktacji składa się z czterech parametrów, jednej zmiany okołoodbytniczej, dwóch, przezroczystości ściany okrężnicy, trzech krwawień jelitowych i czterech zmian ogniskowych. Każdy parametr może być oceniany od zera do trzech. Maksymalny łączny wynik to 12.
Dodatkowo dołączyliśmy skalę jednostek dziesiętnych, które można wykorzystać do podkreślenia konkretnych wyników endoskopowych. Szczegółowy opis każdego parametru jest dostępny w dołączonym manuskrypcie. Oto podsumowanie numer jeden, zmiana okołoodbytnicza.
To stwierdzenie należy obserwować przed wprowadzeniem lunety do odbytnicy. Pozwala to uniknąć pomylenia z krwawieniem pourazowym. Wynik zero jest normalny.
Drugi punkt oznacza krwawe wyładowanie. Wynik trzeci dotyczy ziarniny tkanki lub wypadania odbytnicy. Dwa. Przezroczystość. Reprezentuje to zdolność do wizualizacji naczyń krwionośnych w ścianie okrężnicy i otaczających wnętrznościach.
Wynik równy zero oznacza, że naczynia krwionośne są wyraźnie widoczne. Zdobądź jeden. Małe naczynia są częściowo niewidoczne, ale duże naczynia są widoczne.
Zdobądź dwa punkty. Małe naczynia są na ogół niewidoczne, a nawet duże naczynia nie są przezroczyste. Wynik trzy taki sam jak w wyniku drugim i pogrubiony wygląd jelita grubego. Trzy.
Krwawienie, krwawienie samoistne należy odróżnić od krwawienia kontaktowego. Oceń to odpowiednio. Wynik pierwszy wskazuje, że krwawienie kontaktowe jest wywoływane przez delikatną standardową procedurę określania zakresu, wynik trzeci.
Zawiadomienie o spontanicznym krwawieniu po wejściu do jelita grubego. Numer cztery, zmiana ogniskowa. Wyniki te odzwierciedlają warunki miejscowe, które często towarzyszą zapaleniu.
Zdobądź jeden. Płytka nazębna to płaska elewacja pokryta pozornie normalną błoną śluzową. Zdobądź dwa punkty.
Erozje czerwonego obszaru końcowego zdobywają trzy. Nadżerki owrzodzenia pokryte materiałem podobnym do fibryny. NBI jest pomocne w rozpoznaniu tego.
Deskryptory dziesiętne. Dodaliśmy trzy dodatkowe parametry i nadaliśmy im wyniki dziesiętne.0.1. Dla zwężenia 0,2 dla rozdarcia jelita lub perforacji wynik 0,5 dla przypadku zmiany nowotworowej prezentacja przypadku pierwszego.
Mysz z infekcją Clostridium difficile. Ma normalną przezroczystość, ale wczesną erozję. Widoczna jest niewielka erozja, ale błona śluzowa tła jest normalna.
Przy bliższej obserwacji ujawnia się niewielki obrzęk otaczający tę zmianę. Też. W innych częściach nie ma wyników wskazujących na obecność stanu zapalnego. Przypadek drugi.
Mysz z zapaleniem jelita grubego wywołanym przez DSS na diecie wysokotłuszczowej. W tym przypadku obserwuje się brak przezroczystości, spontaniczne krwawienie i zwężenie. Na początku widoczne jest krwawienie.
Jest spontaniczny. Oto ograniczenie. Nie jest rozszerzany przez wdmuchiwanie powietrza i endoskop nie może przez niego przejść.
Błona śluzowa tła jest zaczerwieniona i pogrubiona. Tu i ówdzie dochodzi również do bicia kontaktowego. Wskazuje to na kruchość przypadku jelita grubego. Trzy.
Widoczna jest mysz z przewlekłym zapaleniem jelita grubego DSS, brakiem przezroczystości, grubością ścianki i wypukłościami przypominającymi guz. Generalnie widoczna jest grubość ścianki z białym kołnierzem, a ściana nie jest przezroczysta. To jest owrzodzenie wokół zginaczy śledziony, występy są niezwykłe.
Przypadek czwarty. Mysz z rakiem związanym z zapaleniem jelita grubego wywołanym azoksymetanem i DSS. Ma wiele guzów i owrzodzeń.
Duża wystająca zmiana typu płaskiego znajduje się na prawej ścianie, a w nieco bardziej proksymalnym obszarze widoczna jest kolejna dolna zmiana typu płaskiego. Struktura powierzchni jest najwyraźniej inna niż normalna błona śluzowa. NBI jest przydatny do wykrywania i diagnozowania takiej zmiany.
W odbytnicy znajduje się geograficzne duże owrzodzenie pokryte materiałem włóknistym. Dziękuję za oglądanie.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Przegląd
Niniejszy artykuł przedstawia szczegółowy protokół wykonywania kolonoskopii u myszy, ze szczególnym uwzględnieniem oceny stanu zapalnego jelit oraz guzów jelita grubego. Autorzy wprowadzają nowy system punktacji do dokumentowania stopnia zaawansowania zapalenia jelit oraz guzów z wykorzystaniem identyfikatorów dziesiętnych.
Kluczowe elementy badania
Dziedzina nauki
- Neuronauka
- Gastroenterologia
- Techniki endoskopowe
Wstęp
- Endoskopy nowej generacji są niezbędne w badaniach nad zapaleniem jelit oraz guzami jelita grubego i odbytnicy u myszy.
- Zrozumienie prawidłowej anatomii endoskopowej jest kluczowe dla skutecznej oceny.
- Niezbędne jest zminimalizowanie urazów oraz artefaktów obrazowania podczas endoskopii.
- Wprowadzono system punktacji do oceny stanu zapalnego jelit.
Cel badania
- Przedstawienie metodologii wykonywania kolonoskopii u myszy.
- Podkreślenie znaczenia zapoznania się z anatomią endoskopową.
- Prezentacja systemu punktacji do oceny stanu zapalnego jelit.
Zastosowane Metody
- Endoskopowa ocena stanów zapalnych i nowotworów w modelach mysich.
- Wdrożenie nowego systemu punktacji do dokumentowania stopnia nasilenia zmian.
- Techniki rozwiązywania problemów w celu zminimalizowania urazów endoskopowych.
- Szczegółowy protokół przeprowadzania kolonoskopii u myszy.
Główne wyniki
- Skuteczne wdrożenie technik endoskopowych w modelach mysich.
- Ustanowienie wiarygodnego systemu punktacji dla zapalenia jelit i guzów.
- Lepsze zrozumienie prawidłowej anatomii endoskopowej.
- Skuteczne metody rozwiązywania problemów w celu poprawy jakości obrazu.
Wnioski
- Przedstawiony protokół usprawnia ocenę zapalenia jelita grubego oraz nowotworów u myszy.
- System punktowy zapewnia ustandaryzowane podejście do dokumentowania stopnia nasilenia zmian.
- Znajomość technik endoskopowych jest kluczowa dla dokładnej oceny.
Najczęściej zadawane pytania
Znaczenie dla przemysłu
Zwalidowana endoskopowa ocena punktowa w modelach mysich umożliwia powtarzalną, ilościową ocenę stopnia zaawansowania zapalenia jelit oraz guzów jelita grubego, co bezpośrednio wspiera walidację celów terapeutycznych i minimalizację ryzyka mechanistycznego w badaniach nad chorobami przewodu pokarmowego. Integracja oceny stanu zapalnego i nowotworów w ramach jednego schematu postępowania zwiększa pewność prognostyczną oraz ciągłość translacyjną od wczesnych etapów odkrywania leków po badania przedkliniczne. Standaryzowane systemy oceny ułatwiają porównywalność wyników między różnymi badaniami oraz podejmowanie decyzji na poziomie całego portfolio w badaniach i rozwoju (R&D) w sektorze biofarmaceutycznym.
Strategiczne zastosowania w badaniach i rozwoju biofarmaceutycznym
Wczesne odkrywanie i walidacja celu
- Umożliwia rygorystyczną analizę mechanizmów chorobowych w modelach przewlekłego zapalenia jelita grubego oraz raka jelita grubego.
- Wspiera funkcjonalną walidację celów terapeutycznych poprzez ilościowe określanie stanu zapalnego i obciążenia nowotworowego in vivo.
- Ułatwia ograniczanie ryzyka mechanistycznego dzięki powtarzalnej, ślepej ocenie cech patologicznych.
- Zwiększa pewność prognostyczną dla późniejszych badań translacyjnych.
Przesiewy i opracowywanie testów
- Zapewnia zestandaryzowany, ilościowy odczyt do oceny potencjalnych interwencji w modelach mysich.
- Umożliwia powtarzalną ocenę punktów końcowych zarówno w stanach zapalnych, jak i nowotworowych w ramach jednego testu.
- Wspiera skalowalność testu i harmonizację między badaniami dzięki zwalidowanym kryteriom oceny.
- Przygotowuje systemy istotne dla danej choroby do wiarygodnego screeningu związków i oceny ich skuteczności.
Badania translacyjne i przedkliniczne
- Ujednolica przedkliniczne punkty końcowe z cechami klinicznymi zapalenia jelit grubych i raka jelita grubego w celu zapewnienia istotności translacyjnej.
- Zapewnia ciągłość od fazy odkrywania po walidację przedkliniczną poprzez integrację oceny stanu zapalnego i guza.
- Wspiera decyzje o dalszym rozwoju projektu w oparciu o analizę ryzyka, bazując na ilościowej i powtarzalnej ocenie patomorfologicznej.
- Ułatwia dostosowanie biomarkerów i optymalizację modeli chorób w badaniach translacyjnych.
Integracja potoku i przepływu pracy
Ten zwalidowany system oceny endoskopowej znajduje zastosowanie w kontinuum od fazy odkryć do badań przedklinicznych, umożliwiając testowanie hipotez, ocenę wiodących kandydatów oraz optymalizację modeli translacyjnych w badaniach nad chorobami przewodu pokarmowego.
- Biologia odkrywcza: Wspiera badanie mechanizmów zapalnych i nowotworowych in vivo w oparciu o postawione hipotezy.
- Przesiewanie: Dostarcza zestandaryzowanych, ilościowych wyników do oceny skuteczności i bezpieczeństwa związków.
- Analityka: Zapewnia powtarzalne, zaślepione dane punktowe dla rzetelnego porównania statystycznego między ramionami eksperymentalnymi.
- Badania translacyjne: Łączy wyniki przedkliniczne z punktami końcowymi klinicznymi poprzez integrację wskaźników stanu zapalnego i guza.
- Ponowne wykorzystanie w przedsiębiorstwie: Tworzy wielokrotnego użytku, zwalidowaną platformę do ciągłych badań nad modelami chorób przewodu pokarmowego i porównywalności międzyprogramowej.
Wpływ operacyjny i przedsiębiorstwowy
- Wartość naukowa: Zwiększa pewność prognostyczną i redukuje niejednoznaczność mechanistyczną w modelach chorób przewodu pokarmowego.
- Wartość operacyjna: Standaryzuje ocenę patologiczną, poprawiając odtwarzalność i skalowalność w obrębie badań.
- Wartość strategiczna: Umożliwia podejmowanie świadomych decyzji typu go/no-go oraz efektywne pod kątem kapitałowym zarządzanie portfolio.
- Wpływ na portfolio: Wspiera priorytetyzację skorygowaną o ryzyko oraz rozwój programów badawczych nad chorobami przewodu pokarmowego.
Kwestie dotyczące implementacji
- Wymagana jest wiedza z zakresu endoskopii myszy oraz oceny patomorfologicznej.
- Niezbędny jest dostęp do elastycznych systemów endoskopowych i zwalidowanych protokołów oceny.
- Wymagana jest standaryzacja międzyzespołowa w celu generowania powtarzalnych danych.
- Możlizna jest konieczność adaptacji metody dla różnych szczepów myszy lub modeli chorób przewodu pokarmowego.
- Potencjalne ograniczenia obejmują zmienność operatora oraz krzywą uczenia się aspektów technicznych.
