Name: Elastyczna kolonoskopia u myszy w celu oceny ciężkości zapalenia jelita grubego i guzów jelita grubego przy użyciu zwalidowanego systemu punktacji endoskopowej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-10-16T20:30:00.000+00:00
Duration: 15 min 49 s
Description: Naucz się elastycznej kolonoskopii u myszy w celu oceny zapalenia jelita grubego i guzów przy użyciu zwalidowanego systemu punktacji endoskopowej. Ta metoda umożliwia dokładną wizualizację i standaryzowaną dokumentację zmian patologicznych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Specjalne podziękowania dla Sarah Kossak, Mitchella Guanzona, Sung Yeun Yanga i Li Guo Jia, za ich współpracę podczas oceny endoskopowej ich zwierząt doświadczalnych.

1. Konfiguracja systemu endoskopowego
<ol>
	<li>Skonfiguruj system endoskopowy przed znieczuleniem myszy, postępując zgodnie z instrukcjami producenta. Do tego protokołu należy użyć wideoureteroskopu przeznaczonego dla ludzi (ryc. 1). Średnica zewnętrzna rurki wprowadzającej wynosi 9,9 Fr (3,3 mm), jej dystalny koniec wynosi 8,5 Fr (2,8 mm), a wewnętrzna średnica kanału oprzyrządowania wynosi 6 Fr (1,2 mm).</li>
	<li>Chociaż stosowanie endoskopów nie zostało powiązane z przenoszeniem chorób [9], sterylizuj endoskop i soczewkę 70% etanolem10 lub odpowiednimi technikami podczas pracy z mikroorganizmami tworzącymi przetrwalniki. Przygotuj bakteriostatyczny sterylny lubrykant i nierysujące chusteczki do wycierania, aby nasycić końcówkę endoskopu.</li>
	<li>Podłączyć strzykawkę o pojemności 3 ml pełną powietrza (lub odpowiednią mieszaninę gazów CO2 ) do górnej części kanału oprzyrządowania.</li>
	<li>Włącz zasilanie i ustaw balans bieli w normalnym świetle białym, a także w trybie obrazowania wąskopasmowego (NBI), jeśli ma to zastosowanie. Od 2001 roku NBI zapewnia korzyści z obrazowania diagnostycznego, ponieważ podkreśla drobne struktury naczyń krwionośnych na błonach śluzowych, w tym zmiany wrzodziejące i nowotworowe, które mają charakterystyczne nieprawidłowe unaczynienie11. Tryb filtra NBI ogranicza długość fali przechwytywanego światła do 390-445 nm i 530-550 nm, co uwydatnia struktury z hemoglobiną.</li>
	<li>Wydrukuj formularz oceny (Rysunek 2), aby zapisać swoje wyniki. Przed egzaminem należy zapoznać się z oczekiwanymi obrazami normalnymi i NBI (Rysunek 3A) oraz definicją i ocenami każdego kryterium (patrz sekcja 6.1).</li>
	<li>W razie potrzeby przygotować roztwór na bazie barwnika na buforowanym fosforanem roztworze soli fizjologicznej (PBS) do chromoendoskopii. W chromoendoskopii badanie wykonuje się przy użyciu barwnika jako środka kontrastowego w celu uwydatnienia zmian błony śluzowej. Użyj roztworów błękitu metylenowego (0,1-1%) i indygotyny (0,1%) (ryc. 3B). Należy pamiętać, że błękit metylenowy jest środkiem utleniająco-redukującym, który może wytwarzać rodniki utleniające, pośrednie sieciowanie reszt aminokwasowych i degradację DNA12, co może zakłócać analizę próbki.</li>
</ol>
2. Znieczulenie ogólne myszy
<ol>
	<li>Wybierz środek znieczulający i drogę podania. Skonsultuj się z weterynarzem z placówki zajmującej się zasobami zwierzęcymi lub Instytucjonalnym Komitetem ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (IACUC) w sprawie potencjalnej ingerencji leków w układ odpornościowy i celów badawczych. Niektóre leki mogą wpływać na ekspresję profilu cytokin u zwierząt, w tym u gryzoni13. Stosować tribromoetanol do wstrzykiwań w przypadku zabiegów terminalnych lub izofluran do endoskopii przeżycia, wraz z odpowiednimi kontrolami.</li>
	<li>W celu indukcji podawać 4-5% izofluranu w 100% tlenu z szybkością 0,2-0,5 l/min; stosować 0,5-2% do konserwacji. Protokół ten nie jest odpowiedni dla wszystkich zwierząt. Skonsultuj się z lekarzem weterynarii w celu uzyskania odpowiednich instrukcji i szkolenia. Przestrzegaj odpowiednich zaleceń IACUC, aby osiągnąć najwyższe standardy dobrostanu zwierząt. Upewnij się, że mysz jest w pełni znieczulona.</li>
	<li>"Przypnij" znieczuloną mysz do stołu nośnego w pozycji grzbietowej lub brzusznej za pomocą laboratoryjnej taśmy klejącej. Uważaj na orientację anatomiczną na ekranie endoskopu. Zabezpiecz jego kończyny dolne i ogon. Opaskę z taśmą można również umieścić na klatce piersiowej, aby zapobiec przemieszczaniu się z dala od respiratora, ale nie ograniczać ruchów wentylacji klatki piersiowej.</li>
</ol>
3. Szczegółowe badanie endoskopowe
<ol>
	<li>Poszukaj zmian okołoodbytniczych przed włożeniem endoskopu do odbytnicy, a następnie przesuń lunetę przez odbyt.</li>
	<li>Pokryj endoskop sterylnym smarem chirurgicznym. Należy pamiętać, aby nie pokryć powierzchni czujnika CCD (urządzenie sprzężone z ładunkiem).</li>
	<li>Włóż endoskop i rozpocznij nagrywanie. Nagrane filmy są przydatne do skrupulatnej oceny endoskopii, jeśli zajdzie taka potrzeba po badaniu. Staraj się wykonać endoskopię w jak najkrótszym czasie, aby zminimalizować podrażnienie jelit/błony śluzowej.</li>
	<li>Nanieś powietrze za pomocą strzykawki, aby powoli rozdzielić ściany jelita. W zależności od wielkości myszy użyj 1-2 ml powietrza. Unikaj nadmiernego wdmuchiwania powietrza; Może to spowodować niewydolność oddechową i śmierć znieczulonej myszy.</li>
	<li>Przesuń endoskop do przodu, oczyszczając drogę za pomocą powietrza lub delikatnego obracania lunety. Nie przesuwaj endoskopu, jeśli nie widzisz światła jelita. Na tym etapie mogą wystąpić perforacje lub rozdarcia odbytu/okrężnicy, szczególnie u młodych myszy (<8-10 tygodni). W razie potrzeby rób zdjęcia.</li>
	<li>W miarę postępów w zakresie oceń, czy występuje samoistne krwawienie (zdefiniowane jako naturalnie występujący krwotok błony śluzowej niezwiązany z endoskopią urazową). Spontaniczne krwawienie można zaobserwować, gdy endoskop wchodzi do odbytnicy i okrężnicy.</li>
	<li>Oceń przezroczystość ściany okrężnicy. Przezroczystość definiuje się jako zdolność do wizualizacji śródściennych naczyń krwionośnych w okrężnicy i innych otaczających wnętrzności (ryc. 4). Delikatny ruch lunety (do tyłu, zgodnie z ruchem wskazówek zegara, przeciwnie do ruchu wskazówek zegara) pomoże określić, czy naczynia krwionośne można zobaczyć w kontekście innych wnętrzności. Widoczna jest również krezkowa tkanka tłuszczowa. Zwróć uwagę, czy odbytnica wewnątrz jamy miednicy wydaje się mniej przezroczysta niż ściana okrężnicy w jamie brzusznej.</li>
	<li>Zbadaj w celu określenia rodzaju i liczby zmian ogniskowych (obszary obrzękowe, nadżerki, owrzodzenia, masy nowotworowe). Zostanie to zarejestrowane w formularzu punktacji przy użyciu oceny stanu zapalnego okrężnicy i opracowanych identyfikatorów dziesiętnych.</li>
	<li>Po osiągnięciu obszaru, w którym okrężnica zgina się doogonowo do okrężnicy proksymalnej, powoli wycofaj endoskop i poszukaj krwawienia kontaktowego (które występuje z powodu kruchości błony śluzowej po wysunięciu lub usunięciu endoskopu). Nie jest konieczne celowe skrobanie powierzchni jelita grubego. Zdrowa błona śluzowa jelita grubego nie krwawi po prawidłowym badaniu endoskopowym.</li>
</ol>
4. Biopsja
<ol>
	<li>Gdy potrzebne są biopsje, należy wprowadzić kleszczyki biopsyjne przez kanał endoskopowy przeznaczony do instrumentacji. Monitoruj postęp kleszczy na ekranie endoskopu, aby zapobiec perforacji jelita.</li>
	<li>Otwórz miseczki biopsyjne kleszczyków pod kątem około 60-80° między miseczkami i skieruj je w obszar zainteresowania. Zbyt otwarte kleszcze lub ucisk mogą spowodować uchwycenie dodatkowych warstw tkanki jelitowej, co powoduje wywołaną biopsją perforację zdrowych przezroczystych ścian jelita. Jeśli dojdzie do perforacji, należy poddać zwierzę eutanazji podczas znieczulenia zgodnie z zaleceniami IACUC. Perforacje skutkują endotoksemią i zapaleniem otrzewnej.</li>
	<li>Zamknij kubki do biopsji i wyciągnij je, trzymając kleszcze zamknięte.</li>
	<li>Usuń próbkę z kleszczy, przepłukując tkankę roztworem, który jest delikatny dla tkanki i kleszczy. RNA później i PBS są powszechnymi rozwiązaniami roboczymi; W razie potrzeby użyć igły, aby usunąć próbkę. Unikaj erozji miseczek kleszowych lub krawędzi tnących.</li>
</ol>
5. Rekonwalescencja po znieczuleniu
<ol>
	<li>Po zakończeniu badania zapewnij myszy ciepłe środowisko, aż wyzdrowieje. Użyj światła elektrycznego lub ciepłej podkładki ustawionej na 37 °C. Unikaj przegrzania; Rozszerzenie naczyń obwodowych utrudnia regenerację zwierząt. Uważnie monitoruj mysz aż do pełnego odzyskania sprawności.</li>
</ol>
6. Zintegrowany endoskopowy system oceny zdrowia jelita grubego z identyfikatorami dziesiętnymi
<ol>
	<li>Skorzystaj z formularza punktacji (ryc. 2) i poniższych definicji parametrów (Endoskopowa ocena mysiego jelita grubego
Zapalenie i nowotwory przy użyciu systemu punktacji ważonej dziesiętnie: definicje parametrów i protokół) oraz opcjonalny "System punktacji dystalno-proksymalnego endoskopowego zapalenia jelita grubego" (D-PECS) jako wytyczne dla bezstronnej oceny i szczegółowego prowadzenia dokumentacji.</li>
	<li>Oceń cztery parametry zapalenia jelita grubego opisane w formularzu systemu punktacji (ryc. 2). Skrupulatnie oceń okolicę odbytu, przezroczystość jelita, rodzaj krwawienia z jelit (jeśli występuje) oraz obecność i ilość zmian ogniskowych (nadżerkowe, wrzodziejące i/lub nowotworowe). </li>
	<li>Oceniając guzy do celów badawczych, zbadaj ilość, lokalizację i rozmiar oraz opisz je za pomocą mapy okrężnicy i wykresu słupkowego na formularzu punktacji. Liczbowa suma uzyskanych punktów i liczba zmian chorobowych (w stosownych przypadkach) określi tło zapalenia jelita grubego, najbardziej dominujący rodzaj zmiany oraz liczbę zmian.</li>
</ol>

<ol><li>Huang, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colonoscopy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Surg.+Endosc%22%5BJournal%5D)">Colonoscopy in mice.</a> Surg. Endosc. 16, 22-24 (2002).</li>
<li>Wirtz, S., Becker, C., Blumberg, R., Galle, P. R., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+T+cell-dependent+experimental+colitis+in+SCID+mice+by+local+administration+of+an+adenovirus+expressing+IL-18+antisense+mRNA%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Treatment of T cell-dependent experimental colitis in SCID mice by local administration of an adenovirus expressing IL-18 antisense mRNA.</a> J. Immunol. 168, 411-420 (2002).</li>
<li>Funovics, M. A., Alencar, H., Su, H. S., Khazaie, K., Weissleder, R., Mahmood, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Miniaturized+multichannel+near+infrared+endoscope+for+mouse+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Miniaturized multichannel near infrared endoscope for mouse imaging.</a> Mol Imaging. 2, 350-357 (2003).</li>
<li>Becker, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+colitis+and+colon+cancer+development+in+mice+using+high+resolution+chromoendoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of colitis and colon cancer development in mice using high resolution chromoendoscopy.</a> Gut. 54, 950-954 (2005).</li>
<li>Ravnic, D. J., Konerding, M. A., Huss, H. T., Wolloscheck, T., Pratt, J. P., Mentzer, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+microvideo+endoscopy+of+the+colonic+microcirculation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Murine microvideo endoscopy of the colonic microcirculation.</a> J. Surg. Res. 142, 97-103 (2007).</li>
<li>Hamilton, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+role+for+mast+cell+tryptase+in+acute+experimental+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Essential role for mast cell tryptase in acute experimental colitis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 290-295 (2011).</li>
<li>Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+colonoscopy+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">High resolution colonoscopy in live mice.</a> Nat. Protoc. 1, 2900-2904 (2006).</li>
<li>Hensley, H. H., Merkel, C. E., Chang, W. C., Devarajan, K., Cooper, H. S., Clapper, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+imaging+and+size+estimation+of+colorectal+adenomas+in+the+multiple+intestinal+neoplasia+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointest.+Endosc%22%5BJournal%5D)">Endoscopic imaging and size estimation of colorectal adenomas in the multiple intestinal neoplasia mouse.</a> Gastrointest. Endosc. 69, 742-749 (2009).</li>
<li>Banerjee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infection+control+during+GI+endoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointest.+Endosc%22%5BJournal%5D)">Infection control during GI endoscopy.</a> Gastrointest. Endosc. 67, 781-790 (2008).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleaning+and+disinfection+of+equipment+for+gastrointestinal+endoscopy.+Report+of+a+Working%5BTitle%5D)+AND+%22Party+of+the+British+Society+of+Gastroenterology+Endoscopy+Committee.+Gut%22%5BJournal%5D)">Cleaning and disinfection of equipment for gastrointestinal endoscopy. Report of a Working.</a> Party of the British Society of Gastroenterology Endoscopy Committee. Gut. 42, 585-593 (1998).</li>
<li>Sano, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+diagnostic+method+based+on+color+imaging+using+narrow+band+imaging+%28NBI%29+system+for+gastrointestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointest.+Endosc%22%5BJournal%5D)">New diagnostic method based on color imaging using narrow band imaging (NBI) system for gastrointestinal tract.</a> Gastrointest. Endosc. 53, 125-12 (2001).</li>
<li>Davies, J., Burke, D., Olliver, J. R., Hardie, L. J., Wild, C. P., Routledge, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methylene+blue+but+not+indigo+carmine+causes+DNA+damage+to+colonocytes+in+vitro+and+in+vivo+at+concentrations+used+in+clinical+chromoendoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Methylene blue but not indigo carmine causes DNA damage to colonocytes in vitro and in vivo at concentrations used in clinical chromoendoscopy.</a> Gut. 56, 155-156 (2007).</li>
<li>Chiang, N., Schwab, J. M., Fredman, G., Kasuga, K., Gelman, S., Serhan, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthetics+impact+the+resolution+of+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Anesthetics impact the resolution of inflammation.</a> PLoS One. 3, e1879(2008).</li>
<li>Zilberman, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+digital+flexible+ureteroscope%3A+in+vitro+assessment+of+optical+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Endourol%22%5BJournal%5D)">The digital flexible ureteroscope: in vitro assessment of optical characteristics.</a> J. Endourol. 25, 519-522 (2011).</li>
<li>Machida, H., Sano, Y., Hamamoto, Y., Muto, M., Kozu, T., Tajiri, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Narrow-band+imaging+in+the+diagnosis+of+colorectal+mucosal+lesions%3A+a+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Narrow-band imaging in the diagnosis of colorectal mucosal lesions: a pilot study.</a> Endoscopy. 36, 1094-1098 (2004).</li>
<li>Dohoo, I., Martin, W., Stryhn, H. Cohort studies. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDohoo%2C+I+%22Veterinary+Epidemiologic+Research%22">Veterinary Epidemiologic Research</a>. McPike, S. M. , AVC, Inc. Charlottetown, Prince Edward Island, Canada. 151-162 (2003).</li>
<li>Yiou, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathophysiology+of+pelvic+floor+disorders%3A+evidence+from+a+histomorphologic+study+of+the+perineum+and+a+mouse+model+of+rectal+prolapse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anat%22%5BJournal%5D)">The pathophysiology of pelvic floor disorders: evidence from a histomorphologic study of the perineum and a mouse model of rectal prolapse.</a> J. Anat. 199, 599-607 (2001).</li>
</ol>

Nie ujawniono żadnych kwestii finansowych ani konfliktu interesów.

Istnieje kilka kwestii dotyczących modyfikacji i rozwiązywania problemów z techniką endoskopową u myszy. Krytyczne aspekty procedury, które należy opanować podczas stosowania endoskopii elastycznej, obejmują regulację objętości powietrza potrzebną do zapobiegania wzdęciom brzucha i upośledzeniom oddechowym myszy, a także drobne aspekty techniczne kontroli widoku z koordynacją kontroli kątowania i momentu obrotowego. Kontrola momentu obrotowego jest ważna, aby zminimalizować ryzyko perforacji jelita. Przy prawidłowym prow...

Mysia endoskopia jest wykonywana jako użyteczne narzędzie badawcze od ponad dekady1-3. Do tej pory w większości badań wykorzystujących endoskopię mysią stosowano endoskopy sztywne, chociaż w niektórych przypadkach stosowano również elastyczną sigmoidoskopię. Endoskopia myszy zapewnia natychmiastowe wyniki i bardziej obiektywne oszacowanie zakresu normalności jelit, nasilenia stanu zapalnego i progresji guza w porównaniu z pomiarami pośrednimi, takimi jak utrata masy ciała, biegunka i histologia (co jest nieoptymalne, gdy zmiany są niejednolite), oferując jednocześnie wgląd w ogólny stan zdrowia okrężnicy. Przede wszystkim endoskopia pozwala na wielokrotną ocenę laboratoryjnych modeli zwierzęcych w czasie, w przeciwieństwie do tradycyjnego badania histologicznego, które wymaga eutanazji zwierzęcia i pobrania okrężnicy do analizy1. Pomimo tych zalet, zastosowanie mysiej technologii endoskopowej nie jest powszechne i jest ograniczone przez brak ustandaryzowanych protokołów wdrażania i oceny zmian patologicznych. Prawidłowo wdrożona endoskopia mysia jest bardzo obiecująca, aby jeszcze bardziej ułatwić nam zrozumienie i scharakteryzowanie modeli zwierzęcych wielu przewlekłych stanów choroby przewodu pokarmowego, w tym chorób zapalnych jelit, zapalenia jelita grubego i guzów jelita grubego.
Użyteczność mysiej technologii endoskopowej zależy od jej powtarzalności i obiektywności, co wymaga istnienia standardowych procedur badawczych oraz spójnego, niezbędnego i niezawodnego systemu punktacji patologii jelitowych. Opublikowano co najmniej trzy opisowe systemy punktacji do endoskopowej oceny zapalenia jelita grubego4-6, a także dla guzów okrężnicy4,7,8 u myszy. Jednak te zgłoszone podejścia i systemy punktacji nie są łatwo porównywalne między badaniami. W wielu przypadkach nie ma jasnej definicji kryteriów stosowanych do klasyfikacji zmian, a jeśli już są podawane, to znacznie się od siebie różnią. Co więcej, nie ma zgłoszonych systemów punktacji, które integrowałyby ocenę zarówno zapalenia jelita grubego, jak i nowotworów, dwóch najczęstszych patologii okrężnicy, które mogą występować jednocześnie i mieć interaktywny wpływ na wynik, w jednym narzędziu pomiarowym. Wreszcie, endoskopowe systemy punktacji, które istnieją w przypadku zapalenia jelita grubego, często mają kategorie zapalne z ograniczoną dyskryminacją (tj. wąskie opcje punktacji w krótkich skalach całkowitych, często 1-4), aby prawidłowo przedstawić scenariusze progresji choroby i umożliwić zastosowanie parametrycznej analizy statystycznej.
W tym artykule opisujemy użycie elastycznego endoskopu do oceny ciężkości mysiego zapalenia jelita grubego i guzów okrężnicy oraz opisujemy ustandaryzowany protokół zastosowania tej technologii w anatomicznej ocenie okolicy okołoodbytniczej, odbytnicy i dystalnej części okrężnicy. Ilustrujemy skuteczne rozwiązywanie problemów podczas endoskopii w celu zminimalizowania urazów i artefaktów obrazu, a także opisujemy powtarzalny system punktacji oparty na zwalidowanych opublikowanych parametrach klinicznych. System punktacji integruje ocenę zarówno stanu zapalnego jelit, jak i guzów przy użyciu wysokiego poziomu dyskryminacji z 12 możliwymi stopniami zapalenia, mapowaniem guza i opcjami kreślenia oraz nowatorskim systemem jednostek dziesiętnych (tj. identyfikatorami dziesiętnymi) w celu podkreślenia wyników o określonej wartości diagnostycznej (np. rozwój guza, powikłania podczas endoskopii itp.). Wykorzystanie identyfikatorów dziesiętnych pozwala na szybkie śledzenie odpowiednich zestawów danych w celu dalszej analizy. Na koniec przeprowadzamy testy wiarygodności i trafności systemu punktacji w wielu mysich modelach zapalenia jelita grubego i raka związanego z zapaleniem jelita grubego (zapalenie jelita grubego wywołane siarczanem dekstranu (DSS), zakażenie Clostridium difficile i rak jelita grubego wywołany azoksymetanem/DSS).

<table><tbody><tr><td>Izofluran, USP</td><td>Webster Weterynaryjny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>lubrykant chirurgiczny</td><td>Savage laboratories</td><td>surgilube, 0281-0205-45</td><td></td></tr><tr><td>Sól fizjologiczna buforowana fosforanem</td><td>Thermo Scientific</td><td>SH30256</td><td></td></tr><tr><td>RNAlater</td><td>Ambion</td><td>AM7021</td><td></td></tr><tr><td>Błękit metylenowy 1% roztwór wodny</td><td>Fisher Science Education</td><td>S96393</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elastyczny ureteroskop cyfrowy</td><td>Olympus America</td><td>URF-V</td><td></td></tr><tr><td>Centrum systemu wizyjnego</td><td>Olympus America</td><td>VISERA Pro OTV-S7 Pro</td><td></td></tr><tr><td>Ksenonowe źródło światła</td><td>Olympus America</td><td>VISERA Pro CLV-S40 Pro</td><td></td></tr><tr><td>Magnetowid</td><td>MediCapture, Inc.</td><td>MediCap USB200</td><td></td></tr><tr><td>Elastyczny kubek do biopsji Kleszcze</td><td>Olympus America</td><td>FBC-3115</td><td></td></tr><tr><td>Aparat anestezjologiczny</td><td>Euthanex Corporation</td><td>EZ-7000 Klasyczny system</td><td></td></tr></tbody></table>

elastyczna kolonoskopia u myszy w celu oceny ciężkości zapalenia jelita grubego i guzów jelita grubego przy użyciu zwalidowanego systemu punktacji endoskopowej

Flexible Colonoscopy in Mice to Evaluate the Severity of Colitis and Colorectal Tumors Using a Validated Endoscopic Scoring System

Wykorzystanie nowoczesnej endoskopii do celów badawczych znacznie ułatwiło nam zrozumienie patologii żołądkowo-jelitowych. W szczególności endoskopia eksperymentalna jest bardzo przydatna w badaniach, które wymagają wielokrotnych ocen na jednym zwierzęciu laboratoryjnym, takich jak te oceniające mechanizmy przewlekłej choroby zapalnej jelit i progresję raka jelita grubego. Jednak metody stosowane w różnych badaniach są bardzo zróżnicowane. Opublikowano co najmniej trzy endoskopowe systemy punktacji dla mysiego zapalenia jelita grubego, a opublikowane protokoły oceny guzów jelita grubego nie uwzględniają obecności współistniejącego zapalenia okrężnicy. Badanie to opracowuje i weryfikuje powtarzalny system punktacji endoskopowej, który integruje jednoczesną ocenę zarówno stanu zapalnego, jak i guzów. Ten nowatorski system punktacji składa się z trzech głównych elementów: 1) oceny zakresu i ciężkości zapalenia jelita grubego (na podstawie wyników okołoodbytniczych, przezroczystości ściany, krwawienia z błony śluzowej i zmian ogniskowych), 2) ilościowego rejestrowania zmian nowotworowych (mapa siatkowa i wykres słupkowy) oraz 3) numerycznego sortowania przypadków klinicznych według ich patologicznego i znaczenia badawczego w oparciu o jednostki dziesiętne z przypisanymi kategoriami obserwowanych zmian i powikłań endoskopowych (identyfikatory dziesiętne). Film i manuskrypt przedstawione w niniejszym dokumencie zostały przygotowane zgodnie z protokołami zatwierdzonymi przez IACUC, aby umożliwić badaczom ocenę własnych myszy eksperymentalnych przy użyciu dobrze zwalidowanej i wysoce powtarzalnej metodologii endoskopowej, z opcją systemu do różnicowania dystalnego od proksymalnego endoskopowego zapalenia jelita grubego (D-PECS).

Protokół i obrazy przedstawione w niniejszym badaniu zostały przygotowane przy użyciu elastycznego endoskopu Olympus URF-V14 oraz NBI11,15. Obrazy wideo zapisano w formacie MPEG-2, a zdjęcia w formatach JPG, TIF, PNG lub DICOM o maksymalnej rozdzielczości 1 280 x 1 024 pikseli, z możliwością przeniesienia na standardowe przenośne pamięci USB. NBI zwiększa kontrast wizualny tkanek zawierających hemoglobinę. Obrazowanie w świetle białym oraz NBI są kluczowymi elementami pozwalającymi zilustrować prawi...

W ciągu ostatnich kilku lat, endoskopy nowej generacji stały się ważnymi diagnostycznymi pomocami badawczymi do oceny mysiego zapalenia jelita grubego i guzów jelita grubego. Przedstawiamy tutaj szczegółowy protokół endoskopowej oceny stanu zapalnego i guzów jelita grubego u myszy, a także nowatorski system punktacji, który wykorzystuje identyfikatory dziesiętne do dokumentowania endoskopowego nasilenia zapalenia jelita grubego i guzów jelita grubego.

Elastyczna kolonoskopia u myszy w celu oceny ciężkości zapalenia jelita grubego i guzów jelita grubego przy użyciu zwalidowanego systemu punktacji endoskopowej

The use of modern endoscopy for research purposes has greatly facilitated our understanding of gastrointestinal pathologies. In particular, experimental ...

Cześć, nazywam się Tomohiro Kani, jestem wizytującym pH z Uniwersytetu Nintendo w Tokio, a ja jestem Fabio Elli, dyrektorem Centrum Badań nad Zdrowiem Układu Pokarmowego, w przypadku Western Reserve University School of Medicine. W tym filmie opiszemy naszą metodologię wykonywania kolonoskopii u myszy. Podkreśl znaczenie zapoznania się z normalną anatomią endoskopową.Opisz, jak skutecznie rozwiązywać problemy podczas endoskopii, aby zminimalizować uraz i artefakty obrazu. I na koniec opisz nasz system punktacji do oceny stanu zapalnego jelit w modelu mu eye zapalenia jelita grubego i raka związanego z zapaleniem jelita grubego. Dziękuję państwu za uwagę.Najpierw skonfiguruj system endoskopowy w momencie przymocowania lunety do centrum systemu wideo i źródła światła. Wysterylizuj lunetę i załóż strzykawkę do wdmuchiwania powietrza. Następnie włącz system i wyreguluj balans bieli Ze zwierzęciem.Odpowiednio znieczulone i skrępowane przystępują do badania endoskopowego. W razie potrzeby można pobrać próbki z biopsji. Po ustaleniu zakresu ogrzej mysz światłem, aby na końcu odzyskać siły.Wyjaśniono system punktacji do oceny zapalenia okrężnicy i związanego z nim raka okrężnicy. Konfiguracja systemu endoskopowego. System endoskopowy składa się z centrum systemu wideo, ksenonowego źródła światła i magnetowidu.Używamy ludzkiego ureteroskopu do kolonoskopii u myszy. Nasza luneta URFV to elastyczna luneta wideo, która wykorzystuje czujnik CCD. Średnica zewnętrzna rurki wprowadzającej wynosi 3,3 milimetra, a dystalny koniec ma średnicę 2,8 milimetra.Aby rozpocząć, przymocuj lunetę do centrum systemu wideo i źródła światła. Następnie wysterylizuj lunetę i powierzchnię obiektywu 70% etanolem. Następnie podłącz trzymilimetrową strzykawkę do kanału roboczego.Służy do regulacji ilości powietrza śródświetlnego za pomocą wdmuchiwania lub aspiracji. Włącz wyłącznik główny i ustaw balans bieli. Nie zapomnij również ustawić w trybie NBI Dwa, znieczulając mysz.Najpierw zademonstruję znieczulenie wziewne Używając izofluoru, używamy od czterech do 5% izofluoru do indukcji. Po tym, jak mysz przestanie się poruszać, zmniejsz stężenie do dawki podtrzymującej od jednego do 2%Unieruchamiaj mysz na stole, przyklejając taśmą ogon i kończyny dolne. Oklejanie ogona jest szczególnie ważne, aby mysz była nieruchoma podczas określania zakresu.Również wstrzyknięcie dootrzewnowe tri bromo. Do znieczulenia można użyć etanolu. Trzy. Endoskopia Zmiany okołoodbytnicze nie są częścią oceny endoskopowej, ale są ważnym odkryciem i powinny być obserwowane przed założeniem i nie należy ich mylić z krwawieniem pourazowym.Przed włożeniem pokryj lunetę smarem chirurgicznym, pamiętaj, aby nie pokryć czujnika CCD. Włóż lunetę przez odbyt. To początkowe wprowadzenie powinno być tak delikatne, jak to możliwe, ponieważ ślepe wprowadzenie może uszkodzić błonę śluzową okrężnicy.Włącz światło i rozpocznij nagrywanie. Powoli i ostrożnie wciskać strzykawkę powietrzną, aby uzyskać pole widzenia. Zbyt duża inflacja powietrza może zabić jamę ustną.Obecność spontanicznego krwawienia należy ocenić po wprowadzeniu endoskopu do kąta odbytnicy lub okrężnicy. Obsługa dostosowuje widok w pionie, a kontrola momentu obrotowego służy do regulacji w poziomie. Koordynacja między tymi dwoma kontrolami jest bardzo ważna.Zwróć uwagę na przezroczystość. W normalnej okrężnicy ściana jest przezroczysta z normalnym unaczynieniem i bez żadnej grubości. Przezroczystość definiuje się jako przezścienną widoczność naczyń lub narządów zaocznych.Powtarzający się ruch wkładania i wyciągania pomaga w ocenie w normalnej okrężnicy. Podczas badania widoczne są zarówno małe, jak i duże naczynia. W razie potrzeby można zrobić zdjęcia lub pobrać próbki z biopsji.Sprawdź, czy nie ma krwawienia kontaktowego. Podczas wyjmowania endoskopu nie jest konieczne celowe skrobanie błony śluzowej. Tryb obrazowania wąskopasmowego podkreśla drobne struktury naczyń w błonach śluzowych.Odbytnica jest otoczona mięśniami, podczas gdy okrężnica nie jest unieruchomiona przez otaczające tkanki. Z powodu tej różnicy anatomicznej wnętrzności zaoczne nie są widoczne w odbytnicy. Granulki kału są czasami obecne w pobliżu odbytu.Można je usunąć za pomocą wdmuchiwania powietrza, jednak czasami mogą się utrzymywać i zasłaniać widok endoskopowy. W takich przypadkach użyjemy do jednego miliona lewatywy PBS do wypłukania stolca. Kał jest zwykle wydalany po kilku minutach.Częstym problemem jest również nieostry widok spowodowany obecnością smug na soczewce, zwłaszcza w przypadku zapalenia jelita grubego lub krwawienia. W tej sytuacji staraliśmy się wyczyścić soczewkę za pomocą wdmuchu powietrza. Ta procedura może być skuteczna w czyszczeniu soczewki bez wycofywania lunety.Ruch perystaltyczny jest jedną z normalnych czynności fizjologicznych jelit. Ponieważ wdmuchiwanie powietrza nie jest skuteczne w rozszerzaniu światła podczas perystaltyki, należy poczekać, aż fala perystaltyczna przejdzie. Po czwarte, próbki z biopsji biopsji uzyskuje się za pomocą elastycznych kleszczyków do biopsji.Kubki są otwierane i zamykane za pomocą uchwytu. Włóż kleszcze do kanału roboczego. Uważaj, aby nie przebić jelita.Otwórz miseczki do odpowiedniego rozmiaru i umieść końcówkę w obszarze zainteresowania. Delikatnie zamknij miseczki i mocno pociągnij. Usunąć próbkę, przepłukując ją odpowiednim roztworem.Po piąte, powrót do zdrowia. Po badaniu ogrzej mysz, aż dojdzie do siebie. Używamy światła elektrycznego do ogrzewania sześciu punktów na zapalenie okrężnicy.Nasz system punktacji składa się z czterech parametrów, jednej zmiany okołoodbytniczej, dwóch, przezroczystości ściany okrężnicy, trzech krwawień jelitowych i czterech zmian ogniskowych. Każdy parametr może być oceniany od zera do trzech. Maksymalny łączny wynik to 12.Dodatkowo dołączyliśmy skalę jednostek dziesiętnych, które można wykorzystać do podkreślenia konkretnych wyników endoskopowych. Szczegółowy opis każdego parametru jest dostępny w dołączonym manuskrypcie. Oto podsumowanie numer jeden, zmiana okołoodbytnicza.To stwierdzenie należy obserwować przed wprowadzeniem lunety do odbytnicy. Pozwala to uniknąć pomylenia z krwawieniem pourazowym. Wynik zero jest normalny.Drugi punkt oznacza krwawe wyładowanie. Wynik trzeci dotyczy ziarniny tkanki lub wypadania odbytnicy. Dwa. Przezroczystość. Reprezentuje to zdolność do wizualizacji naczyń krwionośnych w ścianie okrężnicy i otaczających wnętrznościach.Wynik równy zero oznacza, że naczynia krwionośne są wyraźnie widoczne. Zdobądź jeden. Małe naczynia są częściowo niewidoczne, ale duże naczynia są widoczne.Zdobądź dwa punkty. Małe naczynia są na ogół niewidoczne, a nawet duże naczynia nie są przezroczyste. Wynik trzy taki sam jak w wyniku drugim i pogrubiony wygląd jelita grubego. Trzy.Krwawienie, krwawienie samoistne należy odróżnić od krwawienia kontaktowego. Oceń to odpowiednio. Wynik pierwszy wskazuje, że krwawienie kontaktowe jest wywoływane przez delikatną standardową procedurę określania zakresu, wynik trzeci.Zawiadomienie o spontanicznym krwawieniu po wejściu do jelita grubego. Numer cztery, zmiana ogniskowa. Wyniki te odzwierciedlają warunki miejscowe, które często towarzyszą zapaleniu.Zdobądź jeden. Płytka nazębna to płaska elewacja pokryta pozornie normalną błoną śluzową. Zdobądź dwa punkty.Erozje czerwonego obszaru końcowego zdobywają trzy. Nadżerki owrzodzenia pokryte materiałem podobnym do fibryny. NBI jest pomocne w rozpoznaniu tego.Deskryptory dziesiętne. Dodaliśmy trzy dodatkowe parametry i nadaliśmy im wyniki dziesiętne.0.1. Dla zwężenia 0,2 dla rozdarcia jelita lub perforacji wynik 0,5 dla przypadku zmiany nowotworowej prezentacja przypadku pierwszego.Mysz z infekcją Clostridium difficile. Ma normalną przezroczystość, ale wczesną erozję. Widoczna jest niewielka erozja, ale błona śluzowa tła jest normalna.Przy bliższej obserwacji ujawnia się niewielki obrzęk otaczający tę zmianę. Też. W innych częściach nie ma wyników wskazujących na obecność stanu zapalnego. Przypadek drugi.Mysz z zapaleniem jelita grubego wywołanym przez DSS na diecie wysokotłuszczowej. W tym przypadku obserwuje się brak przezroczystości, spontaniczne krwawienie i zwężenie. Na początku widoczne jest krwawienie.Jest spontaniczny. Oto ograniczenie. Nie jest rozszerzany przez wdmuchiwanie powietrza i endoskop nie może przez niego przejść.Błona śluzowa tła jest zaczerwieniona i pogrubiona. Tu i ówdzie dochodzi również do bicia kontaktowego. Wskazuje to na kruchość przypadku jelita grubego. Trzy.Widoczna jest mysz z przewlekłym zapaleniem jelita grubego DSS, brakiem przezroczystości, grubością ścianki i wypukłościami przypominającymi guz. Generalnie widoczna jest grubość ścianki z białym kołnierzem, a ściana nie jest przezroczysta. To jest owrzodzenie wokół zginaczy śledziony, występy są niezwykłe.Przypadek czwarty. Mysz z rakiem związanym z zapaleniem jelita grubego wywołanym azoksymetanem i DSS. Ma wiele guzów i owrzodzeń.Duża wystająca zmiana typu płaskiego znajduje się na prawej ścianie, a w nieco bardziej proksymalnym obszarze widoczna jest kolejna dolna zmiana typu płaskiego. Struktura powierzchni jest najwyraźniej inna niż normalna błona śluzowa. NBI jest przydatny do wykrywania i diagnozowania takiej zmiany.W odbytnicy znajduje się geograficzne duże owrzodzenie pokryte materiałem włóknistym. Dziękuję za oglądanie.

flexible-colonoscopy-mice-to-evaluate-severity-colitis-colorectal

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Przedstawiamy protokół, w którym podanie genotoksycznego czynnika azoksymetanu (AOM), a następnie trzy cykle podania prozapalnego dekstranu siarczanu sodu (DSS), pozwala na szybkie i powtarzalne wywołanie guzów okrężnicy u myszy, wykazujących podobieństwa morfologiczne i molekularne do nowotworów związanych z zapaleniem jelita grubego u ludzi.

Modelowanie raka związanego z zapaleniem jelita grubego z wykorzystaniem azoksymetanu (AOM) i dekstranu siarczanowego sodu (DSS)

Ten film opisuje generowanie modelu myszy jelita grubego przez segmentową infekcję adeno-cre. Zakażony odcinek jelita grubego prowadzi do nowotworzenia w obrębie tego odcinka błony śluzowej, w wyniku czego gruczolaki ostatecznie przechodzą w raka inwazyjnego i przerzutowego. Model ten stanowi atrakcyjną platformę do badań nad biologią nowotworów i przedklinicznych badań terapeutycznych.

Segmentalna infekcja Adeno-Cre: technika generowania izolowanego raka jelita grubego przy użyciu genetycznie modyfikowanych modeli myszy

Techniki obrazowania małych zwierząt pozwalają na seryjne badania diagnostyczne i interwencje terapeutyczne in vivo. W ostatnim czasie zakres zastosowań znacznie się poszerzył i obecnie obejmuje ocenę rozwoju guza jelita grubego, gojenie się ran oraz monitorowanie stanu zapalnego. Protokół ten ilustruje te różnorodne potencjalne zastosowania endoskopii mysiej skóry.

Endoskopia mysia do multimodalnego obrazowania in vivo kancerogenezy i oceny gojenia się ran jelitowych i stanów zapalnych

Opisujemy metody długotrwałego monitorowania skuteczności terapii w leczeniu patologii jelita grubego u myszy za pomocą sztywnego endoskopu. Protokół ten może być z łatwością wykorzystany do scharakteryzowania odpowiedzi terapeutycznej pojedynczego guza u żywych myszy, a także do monitorowania potencjalnego nawrotu choroby.

Nieinwazyjna ocena skuteczności nowych terapii patologii jelitowych za pomocą seryjnego obrazowania endoskopowego żywych myszy

Przedstawiono protokół tworzenia genetycznie modyfikowanego mysiego modelu raka jelita grubego poprzez segmentowe zakażenie adeno-cre i jego nadzorowanie za pomocą kolonoskopii o wysokiej rozdzielczości.

Genetycznie zmodyfikowany mysi model sporadycznego raka jelita grubego

Tutaj prezentujemy protokół, który opisuje allogeniczny przeszczep krwiotwórczych komórek macierzystych i umożliwia powtarzalne mini-endoskopowe oceny dystalnej części jelita grubego in situ pod kątem obecności, cech i ciężkości zapalenia jelita grubego u żywych myszy cierpiących na chorobę przeszczep przeciwko gospodarzowi jelit.

Indukcja choroby przeszczep jelitowy przeciwko gospodarzowi i jej miniendoskopowa ocena u żywych myszy

Prezentowany protokół opisuje łatwe chirurgiczne usunięcie wyrostka robaczkowego (łaty kątniczej) u myszy, a następnie indukcję raka jelita grubego związanego z chorobą jelit grubego. Ten mysi model wyrostka robaczkowego umożliwia badanie biologicznej roli wyrostka robaczkowego w patogenezie chorób przewodu pokarmowego u ludzi.

Mysi model wycięcia wyrostka robaczkowego przewlekłego raka jelita grubego związanego z zapaleniem jelita grubego poprzez precyzyjną lokalizację łaty kątniczej

Tutaj podajemy szczegółowy opis procedury wywoływania biopsji szczypanych pod kontrolą kolonoskopii u myszy i śledzenia zamykania ran w czasie rzeczywistym. Dodatkowo przedstawiono metody przygotowania tkanek do analiz histologicznych, immunohistochemicznych i molekularnych łożyska rany.

Wykonywanie biopsji szczyptowych pod kontrolą kolonoskopową u myszy i ocena późniejszych zmian w tkankach

Systematyczne ocenianie stanu zapalnego jelit za pomocą darmowego systemu wspomaganego komputerowo jest potężnym narzędziem do ilościowego porównywania zmian histopatologicznych w modelach zapalenia jelita grubego charakteryzujących się obecnością wrzodów i zmian zapalnych. Ocena wyniku histologicznego zapalenia jelita grubego wzmacnia obserwacje kliniczne i ułatwia interpretację danych.

Systematyczna analiza punktacji zapalenia jelit w modelu zapalenia jelita grubego wywołanego mysim dekstranem sodu

Opisano metodę propagacji ludzkich guzów siatkówczaka u myszy. Komórki nowotworowe są wstrzykiwane bezpośrednio do oczu myszy z niedoborem odporności. Guzy wtórne zostały pomyślnie wywołane z wykorzystaniem zarówno komórek pobranych bezpośrednio z ludzkich guzów, jak i hodowanych tumorsfer.

Ustanowienie i propagacja guzów retinoblastomy ludzkiej u myszy z niedoborem odporności

Naucz się elastycznej kolonoskopii u myszy w celu oceny zapalenia jelita grubego i guzów przy użyciu zwalidowanego systemu punktacji endoskopowej. Ta metoda umożliwia dokładną wizualizację i standaryzowaną dokumentację zmian patologicznych.

Elastyczna kolonoskopia u myszy w celu oceny ciężkości zapalenia jelita grubego i guzów jelita grubego przy użyciu zwalidowanego systemu punktacji endoskopowej (Wideo) | JoVE Journal

Elastyczna kolonoskopia u myszy w celu oceny ciężkości zapalenia jelita grubego i guzów jelita grubego przy użyciu zwalidowanego systemu punktacji endoskopowej

Przeglądaj więcej filmów