Ważne odkrycia dotyczące regulacji cyklu komórkowego, aktywności telomerazy i autofagii u Saccharomyces cerevisiae dowiodły, że ten gatunek drożdży jest cennym organizmem modelowym do badań. Drożdże są łatwe w uprawie, a plazmidy i szczepy drożdży są dostępne w handlu. Pomimo stosunkowo niedrogich wymagań dotyczących hodowli drożdży, utrzymanie tego organizmu ma kluczowe znaczenie dla udanych eksperymentów. Ten film pozwoli Ci zajrzeć za kulisy hodowli komórek drożdży i utrzymywać szczepy S. cerevisiae w laboratoriach.
W biologii krzywe wzrostu reprezentują zmianę populacji komórek w pewnym okresie czasu. W drożdżach krzywa wzrostu jest generowana przez wykreślenie gęstości optycznej lub "OD" hodowli komórkowej przy 600 nm na osi y i czasie na osi x. Gęstość optyczna lub "absorbancja" to logarytmiczny stosunek intensywności światła wpadającego do zawiesiny komórek drożdży do intensywności przechodzącej przez nią. OD przy określonej długości fali światła mierzy się za pomocą spektrofotometru.
Podczas pracy z drożdżami krzywa wzrostu szczepu drożdży musi być generowana poprzez wykonywanie pomiarów OD w różnych odstępach czasu. Krzywa wzrostu drożdży jest podzielona na trzy główne fazy: fazę opóźnienia, logarytmiczną i stacjonarną. W fazie opóźnienia komórki aklimatyzują się do środowiska i rosną, ale się nie dzielą. W fazie logarytmicznej komórki aktywnie się dzielą, co prowadzi do podwojenia komórek. Po wyczerpaniu dostępnych składników odżywczych komórki drożdży wchodzą w fazę stacjonarną, w której podział komórek zwalnia, a populacja komórek pozostaje stała.
Korzystając z krzywej wzrostu, czas podwojenia odkształcenia można obliczyć za pomocą następującego równania: OD1 i OD2 reprezentują pomiary gęstości optycznej, a T1 i T2 to czas między pomiarami. Czas podwojenia jest definiowany jako czas wymagany do podwojenia liczby komórek w populacji. Oblicz między dwiema wartościami OD fazy logarytmicznej, na przykład między wartościami 0,2 i 0,5, jak pokazano tutaj. Drożdże typu dzikiego powinny dawać wartość czasu podwojenia około 90 minut.
Znajomość czasu podwajania jest korzystna, ponieważ pozwoli Ci odpowiednio zaplanować eksperymenty w ciągu dnia.
Teraz, gdy omówiliśmy już nakrętki i śruby krzywej wzrostu drożdży, przejdźmy do laboratorium i zajmijmy się przygotowaniami do hodowli komórek drożdży. Głównymi składnikami bogatych pożywek wzrostowych - AKA Yeast Food - są: ekstrakt drożdżowy, pepton i źródło cukru. Ekstrakt drożdżowy zawiera zawartość komórek drożdży, z wyłączeniem ściany komórkowej i dostarcza aminokwasów, witamin, węglowodanów i innych składników odżywczych niezbędnych do wzrostu. Pepton pochodzi z mięsa zwierzęcego lub mleka i jest głównym źródłem aminokwasów w pożywkach drożdżowych. Źródło cukru, zwykle glukoza, jest dodawane, ponieważ dostarcza energię rosnącym komórkom.
Po rozpuszczeniu ekstraktu drożdżowego i peptonu w wodzie wysterylizuj mieszaninę za pomocą autoklawu. Aby zrobić płytki z pożywką drożdżową, dodaj agar do płynnego podłoża i wlej mieszaninę do płytek, pozwalając jej zestalić się w temperaturze pokojowej. Płytki te mogą być używane do smugowania odmian w celu wyhodowania kolonii drożdży.
Teraz, gdy mamy już przygotowane wszystkie nasze media, jak możemy wyhodować kultury tych stworzeń od podstaw? Przede wszystkim upewnij się, że wszystkie instrumenty, roztwory i media są sterylne.
Następnie zdobądź płytkę, aby usunąć komórki drożdży. Nie, nie ten rodzaj smug! Smugowanie to proces rozprowadzania płynnych kultur drożdży na płytce agarowej za pomocą sterylnego narzędzia, jak widać tutaj. Wokół "smug" utworzą się poszczególne kolonie, które pochodzą z pojedynczej komórki drożdży, które można pobrać w celu uzyskania czystej genetycznej populacji komórek drożdży. Po nałożeniu prążków na płytki należy odwrócić płytkę i umieścić ją w inkubatorze w temperaturze 30 °C na 2 do 3 dni. Jest to optymalna temperatura dla wzrostu drożdży.
Po uformowaniu się kolonii zaszczepij komórki drożdży w niewielkiej objętości pożywki wzrostowej. Zaszczepianie oznacza tutaj wybranie pojedynczej kolonii i wprowadzenie jej do pożywki poprzez krótkie mieszanie. Inkubować kulturę w wytrząsarce lub rotatorze o temperaturze 30 °C przez 48 godzin.
Aby wyhodować większe kultury komórek, najpierw sprawdź OD600 w 2-dniowej kulturze drożdży za pomocą spektrofotometru. Dokonać odpowiednich rozcieńczeń, tak aby początkowa średnica zewnętrzna wynosiła około 0,1-0,2. Po rozcieńczeniu komórek umieścić kolbę w wytrząsarce o temperaturze 30 °C i wyhodować komórki do pożądanej średnicy zewnętrznej.
Następną ważną lekcją po nauczeniu się, jak uprawiać S. cerevisiae, jest to, jak przechowywać je do wykorzystania w przyszłości. Drożdże hodowane na talerzach można przechowywać w temperaturze 4 °C do 3 miesięcy. Jeśli jednak chcesz wyhodować świeżą kulturę, upewnij się, że najpierw ponownie rozsypiesz komórki na świeżej płytce przed zaszczepieniem.
Aby przechowywać zapasy szczepów drożdży przez długi czas, należy podwielokrotnić komórki w kriowialach zawierających glicerol. Komórki mogą być następnie przechowywane w temperaturze -80 °C, gdzie mogą pozostać do kilku lat.
Teraz, gdy jesteś profesjonalistą, jeśli chodzi o hodowlę komórek drożdży, przyjrzyjmy się, jak możemy zastosować te podstawowe techniki w badaniach naukowych. Komórki w fazie stacjonarnej mogą być wykorzystywane do badania genów regulujących niestabilność genomu DNA podczas starzenia. Ten klip wideo pokazuje kolekcję komórek z trzydniowej hodowli. Są one posiewane na selektywnych pożywkach, które zapobiegają wzrostowi normalnych komórek drożdży. Tylko komórki, które nabyły mutację, mogą tworzyć kolonie na tych płytkach. Liczba kolonii na płytkach jest proporcjonalna do poziomu niestabilności genomu w kulturze.
Innym przykładem badania starzenia się jest analiza chronologicznej długości życia komórek drożdży. Starzenie chronologiczne oznacza utratę żywotności komórek w pewnym okresie czasu i można je badać, hodując płynne kultury, jak pokazano tutaj. W tym filmie naukowiec ładuje różne kultury do spec w celu wygenerowania krzywych wzrostu, które pomogą określić żywotność komórek.
Komórki drożdży typu dzikiego w fazie logarytmicznej reprezentują zdrowe, normalne komórki i mogą być wykorzystywane do badania organelli eukariotycznych, takich jak rybosom. Na tym filmie można zobaczyć ładowanie lizatu komórkowego z komórek zebranych w fazie logarytmu do gradientu sacharozy. Następnie komórki są przędzone do rybosomów osadowych, a monitor absorbancji jest używany do generowania profilu rybosomu.
Właśnie obejrzałeś wprowadzenie JoVE do hodowli i utrzymania Saccharomyces cerevisiae. W tym filmie dokonaliśmy przeglądu krzywej wzrostu drożdży, pokazaliśmy, jak hodować kultury komórkowe i pokazaliśmy, jak utrzymać szczepy drożdży. Dziękujemy za oglądanie i nie zapomnij polecić tego filmu pączkowi.
Badania przeprowadzone na drożdżach Saccharomyces cerevisiae znacznie poszerzyły naszą wiedzę na temat ważnych zjawisk komórkowych, takich jak regulac…
Ważne odkrycia dotyczące regulacji cyklu komórkowego, aktywności telomerazy i autofagii u Saccharomyces cerevisiae dowiodły, że ten gatunek drożdży jest cennym organizmem modelowym do badań. Drożdże są łatwe w uprawie, a plazmidy i szczepy drożdży są dostępne w handlu. Pomimo stosunkowo niedrogich wymagań dotyczących hodowli drożdży, utrzymanie tego organizmu ma kluczowe znaczenie dla udanych eksperymentów. Ten film pozwoli Ci zajrzeć za kulisy hodowli komórek drożdży i utrzymywać szczepy S. cerevisiae w laboratoriach.
W biologii krzywe wzrostu reprezentują zmianę populacji komórek w pewnym okresie czasu. W drożdżach krzywa wzrostu jest generowana przez wykreślenie gęstości optycznej lub "OD" hodowli komórkowej przy 600 nm na osi y i czasie na osi x. Gęstość optyczna lub "absorbancja" to logarytmiczny stosunek intensywności światła wpadającego do zawiesiny komórek drożdży do intensywności przechodzącej przez nią. OD przy określonej długości fali światła mierzy się za pomocą spektrofotometru.
Podczas pracy z drożdżami krzywa wzrostu szczepu drożdży musi być generowana poprzez wykonywanie pomiarów OD w różnych odstępach czasu. Krzywa wzrostu drożdży jest podzielona na trzy główne fazy: fazę opóźnienia, logarytmiczną i stacjonarną. W fazie opóźnienia komórki aklimatyzują się do środowiska i rosną, ale się nie dzielą. W fazie logarytmicznej komórki aktywnie się dzielą, co prowadzi do podwojenia komórek. Po wyczerpaniu dostępnych składników odżywczych komórki drożdży wchodzą w fazę stacjonarną, w której podział komórek zwalnia, a populacja komórek pozostaje stała.
Korzystając z krzywej wzrostu, czas podwojenia odkształcenia można obliczyć za pomocą następującego równania: OD1 i OD2 reprezentują pomiary gęstości optycznej, a T1 i T2 to czas między pomiarami. Czas podwojenia jest definiowany jako czas wymagany do podwojenia liczby komórek w populacji. Oblicz między dwiema wartościami OD fazy logarytmicznej, na przykład między wartościami 0,2 i 0,5, jak pokazano tutaj. Drożdże typu dzikiego powinny dawać wartość czasu podwojenia około 90 minut.
Znajomość czasu podwajania jest korzystna, ponieważ pozwoli Ci odpowiednio zaplanować eksperymenty w ciągu dnia.
Teraz, gdy omówiliśmy już nakrętki i śruby krzywej wzrostu drożdży, przejdźmy do laboratorium i zajmijmy się przygotowaniami do hodowli komórek drożdży. Głównymi składnikami bogatych pożywek wzrostowych - AKA Yeast Food - są: ekstrakt drożdżowy, pepton i źródło cukru. Ekstrakt drożdżowy zawiera zawartość komórek drożdży, z wyłączeniem ściany komórkowej i dostarcza aminokwasów, witamin, węglowodanów i innych składników odżywczych niezbędnych do wzrostu. Pepton pochodzi z mięsa zwierzęcego lub mleka i jest głównym źródłem aminokwasów w pożywkach drożdżowych. Źródło cukru, zwykle glukoza, jest dodawane, ponieważ dostarcza energię rosnącym komórkom.
Po rozpuszczeniu ekstraktu drożdżowego i peptonu w wodzie wysterylizuj mieszaninę za pomocą autoklawu. Aby zrobić płytki z pożywką drożdżową, dodaj agar do płynnego podłoża i wlej mieszaninę do płytek, pozwalając jej zestalić się w temperaturze pokojowej. Płytki te mogą być używane do smugowania odmian w celu wyhodowania kolonii drożdży.
Teraz, gdy mamy już przygotowane wszystkie nasze media, jak możemy wyhodować kultury tych stworzeń od podstaw? Przede wszystkim upewnij się, że wszystkie instrumenty, roztwory i media są sterylne.
Następnie zdobądź płytkę, aby usunąć komórki drożdży. Nie, nie ten rodzaj smug! Smugowanie to proces rozprowadzania płynnych kultur drożdży na płytce agarowej za pomocą sterylnego narzędzia, jak widać tutaj. Wokół "smug" utworzą się poszczególne kolonie, które pochodzą z pojedynczej komórki drożdży, które można pobrać w celu uzyskania czystej genetycznej populacji komórek drożdży. Po nałożeniu prążków na płytki należy odwrócić płytkę i umieścić ją w inkubatorze w temperaturze 30 °C na 2 do 3 dni. Jest to optymalna temperatura dla wzrostu drożdży.
Po uformowaniu się kolonii zaszczepij komórki drożdży w niewielkiej objętości pożywki wzrostowej. Zaszczepianie oznacza tutaj wybranie pojedynczej kolonii i wprowadzenie jej do pożywki poprzez krótkie mieszanie. Inkubować kulturę w wytrząsarce lub rotatorze o temperaturze 30 °C przez 48 godzin.
Aby wyhodować większe kultury komórek, najpierw sprawdź OD600 w 2-dniowej kulturze drożdży za pomocą spektrofotometru. Dokonać odpowiednich rozcieńczeń, tak aby początkowa średnica zewnętrzna wynosiła około 0,1-0,2. Po rozcieńczeniu komórek umieścić kolbę w wytrząsarce o temperaturze 30 °C i wyhodować komórki do pożądanej średnicy zewnętrznej.
Następną ważną lekcją po nauczeniu się, jak uprawiać S. cerevisiae, jest to, jak przechowywać je do wykorzystania w przyszłości. Drożdże hodowane na talerzach można przechowywać w temperaturze 4 °C do 3 miesięcy. Jeśli jednak chcesz wyhodować świeżą kulturę, upewnij się, że najpierw ponownie rozsypiesz komórki na świeżej płytce przed zaszczepieniem.
Aby przechowywać zapasy szczepów drożdży przez długi czas, należy podwielokrotnić komórki w kriowialach zawierających glicerol. Komórki mogą być następnie przechowywane w temperaturze -80 °C, gdzie mogą pozostać do kilku lat.
Teraz, gdy jesteś profesjonalistą, jeśli chodzi o hodowlę komórek drożdży, przyjrzyjmy się, jak możemy zastosować te podstawowe techniki w badaniach naukowych. Komórki w fazie stacjonarnej mogą być wykorzystywane do badania genów regulujących niestabilność genomu DNA podczas starzenia. Ten klip wideo pokazuje kolekcję komórek z trzydniowej hodowli. Są one posiewane na selektywnych pożywkach, które zapobiegają wzrostowi normalnych komórek drożdży. Tylko komórki, które nabyły mutację, mogą tworzyć kolonie na tych płytkach. Liczba kolonii na płytkach jest proporcjonalna do poziomu niestabilności genomu w kulturze.
Innym przykładem badania starzenia się jest analiza chronologicznej długości życia komórek drożdży. Starzenie chronologiczne oznacza utratę żywotności komórek w pewnym okresie czasu i można je badać, hodując płynne kultury, jak pokazano tutaj. W tym filmie naukowiec ładuje różne kultury do spec w celu wygenerowania krzywych wzrostu, które pomogą określić żywotność komórek.
Komórki drożdży typu dzikiego w fazie logarytmicznej reprezentują zdrowe, normalne komórki i mogą być wykorzystywane do badania organelli eukariotycznych, takich jak rybosom. Na tym filmie można zobaczyć ładowanie lizatu komórkowego z komórek zebranych w fazie logarytmu do gradientu sacharozy. Następnie komórki są przędzone do rybosomów osadowych, a monitor absorbancji jest używany do generowania profilu rybosomu.
Właśnie obejrzałeś wprowadzenie JoVE do hodowli i utrzymania Saccharomyces cerevisiae. W tym filmie dokonaliśmy przeglądu krzywej wzrostu drożdży, pokazaliśmy, jak hodować kultury komórkowe i pokazaliśmy, jak utrzymać szczepy drożdży. Dziękujemy za oglądanie i nie zapomnij polecić tego filmu pączkowi.
Ważne odkrycia dotyczące regulacji cyklu komórkowego, aktywności telomerazy i autofagii u Saccharomyces cerevisiae dowiodły, że ten gatunek drożdży jest cennym organizmem modelowym do badań. Drożdże są łatwe w uprawie, a plazmidy i szczepy drożdży są dostępne w handlu. Pomimo stosunkowo niedrogich wymagań dotyczących hodowli drożdży, utrzymanie tego organizmu ma kluczowe znaczenie dla udanych eksperymentów. Ten film pozwoli Ci zajrzeć za kulisy hodowli komórek drożdży i utrzymywać szczepy S. cerevisiae w laboratoriach.
W biologii krzywe wzrostu reprezentują zmianę populacji komórek w pewnym okresie czasu. W drożdżach krzywa wzrostu jest generowana przez wykreślenie gęstości optycznej lub "OD" hodowli komórkowej przy 600 nm na osi y i czasie na osi x. Gęstość optyczna lub "absorbancja" to logarytmiczny stosunek intensywności światła wpadającego do zawiesiny komórek drożdży do intensywności przechodzącej przez nią. OD przy określonej długości fali światła mierzy się za pomocą spektrofotometru.
Podczas pracy z drożdżami krzywa wzrostu szczepu drożdży musi być generowana poprzez wykonywanie pomiarów OD w różnych odstępach czasu. Krzywa wzrostu drożdży jest podzielona na trzy główne fazy: fazę opóźnienia, logarytmiczną i stacjonarną. W fazie opóźnienia komórki aklimatyzują się do środowiska i rosną, ale się nie dzielą. W fazie logarytmicznej komórki aktywnie się dzielą, co prowadzi do podwojenia komórek. Po wyczerpaniu dostępnych składników odżywczych komórki drożdży wchodzą w fazę stacjonarną, w której podział komórek zwalnia, a populacja komórek pozostaje stała.
Korzystając z krzywej wzrostu, czas podwojenia odkształcenia można obliczyć za pomocą następującego równania: OD1 i OD2 reprezentują pomiary gęstości optycznej, a T1 i T2 to czas między pomiarami. Czas podwojenia jest definiowany jako czas wymagany do podwojenia liczby komórek w populacji. Oblicz między dwiema wartościami OD fazy logarytmicznej, na przykład między wartościami 0,2 i 0,5, jak pokazano tutaj. Drożdże typu dzikiego powinny dawać wartość czasu podwojenia około 90 minut.
Znajomość czasu podwajania jest korzystna, ponieważ pozwoli Ci odpowiednio zaplanować eksperymenty w ciągu dnia.
Teraz, gdy omówiliśmy już nakrętki i śruby krzywej wzrostu drożdży, przejdźmy do laboratorium i zajmijmy się przygotowaniami do hodowli komórek drożdży. Głównymi składnikami bogatych pożywek wzrostowych - AKA Yeast Food - są: ekstrakt drożdżowy, pepton i źródło cukru. Ekstrakt drożdżowy zawiera zawartość komórek drożdży, z wyłączeniem ściany komórkowej i dostarcza aminokwasów, witamin, węglowodanów i innych składników odżywczych niezbędnych do wzrostu. Pepton pochodzi z mięsa zwierzęcego lub mleka i jest głównym źródłem aminokwasów w pożywkach drożdżowych. Źródło cukru, zwykle glukoza, jest dodawane, ponieważ dostarcza energię rosnącym komórkom.
Po rozpuszczeniu ekstraktu drożdżowego i peptonu w wodzie wysterylizuj mieszaninę za pomocą autoklawu. Aby zrobić płytki z pożywką drożdżową, dodaj agar do płynnego podłoża i wlej mieszaninę do płytek, pozwalając jej zestalić się w temperaturze pokojowej. Płytki te mogą być używane do smugowania odmian w celu wyhodowania kolonii drożdży.
Teraz, gdy mamy już przygotowane wszystkie nasze media, jak możemy wyhodować kultury tych stworzeń od podstaw? Przede wszystkim upewnij się, że wszystkie instrumenty, roztwory i media są sterylne.
Następnie zdobądź płytkę, aby usunąć komórki drożdży. Nie, nie ten rodzaj smug! Smugowanie to proces rozprowadzania płynnych kultur drożdży na płytce agarowej za pomocą sterylnego narzędzia, jak widać tutaj. Wokół "smug" utworzą się poszczególne kolonie, które pochodzą z pojedynczej komórki drożdży, które można pobrać w celu uzyskania czystej genetycznej populacji komórek drożdży. Po nałożeniu prążków na płytki należy odwrócić płytkę i umieścić ją w inkubatorze w temperaturze 30 °C na 2 do 3 dni. Jest to optymalna temperatura dla wzrostu drożdży.
Po uformowaniu się kolonii zaszczepij komórki drożdży w niewielkiej objętości pożywki wzrostowej. Zaszczepianie oznacza tutaj wybranie pojedynczej kolonii i wprowadzenie jej do pożywki poprzez krótkie mieszanie. Inkubować kulturę w wytrząsarce lub rotatorze o temperaturze 30 °C przez 48 godzin.
Aby wyhodować większe kultury komórek, najpierw sprawdź OD600 w 2-dniowej kulturze drożdży za pomocą spektrofotometru. Dokonać odpowiednich rozcieńczeń, tak aby początkowa średnica zewnętrzna wynosiła około 0,1-0,2. Po rozcieńczeniu komórek umieścić kolbę w wytrząsarce o temperaturze 30 °C i wyhodować komórki do pożądanej średnicy zewnętrznej.
Następną ważną lekcją po nauczeniu się, jak uprawiać S. cerevisiae, jest to, jak przechowywać je do wykorzystania w przyszłości. Drożdże hodowane na talerzach można przechowywać w temperaturze 4 °C do 3 miesięcy. Jeśli jednak chcesz wyhodować świeżą kulturę, upewnij się, że najpierw ponownie rozsypiesz komórki na świeżej płytce przed zaszczepieniem.
Aby przechowywać zapasy szczepów drożdży przez długi czas, należy podwielokrotnić komórki w kriowialach zawierających glicerol. Komórki mogą być następnie przechowywane w temperaturze -80 °C, gdzie mogą pozostać do kilku lat.
Teraz, gdy jesteś profesjonalistą, jeśli chodzi o hodowlę komórek drożdży, przyjrzyjmy się, jak możemy zastosować te podstawowe techniki w badaniach naukowych. Komórki w fazie stacjonarnej mogą być wykorzystywane do badania genów regulujących niestabilność genomu DNA podczas starzenia. Ten klip wideo pokazuje kolekcję komórek z trzydniowej hodowli. Są one posiewane na selektywnych pożywkach, które zapobiegają wzrostowi normalnych komórek drożdży. Tylko komórki, które nabyły mutację, mogą tworzyć kolonie na tych płytkach. Liczba kolonii na płytkach jest proporcjonalna do poziomu niestabilności genomu w kulturze.
Innym przykładem badania starzenia się jest analiza chronologicznej długości życia komórek drożdży. Starzenie chronologiczne oznacza utratę żywotności komórek w pewnym okresie czasu i można je badać, hodując płynne kultury, jak pokazano tutaj. W tym filmie naukowiec ładuje różne kultury do spec w celu wygenerowania krzywych wzrostu, które pomogą określić żywotność komórek.
Komórki drożdży typu dzikiego w fazie logarytmicznej reprezentują zdrowe, normalne komórki i mogą być wykorzystywane do badania organelli eukariotycznych, takich jak rybosom. Na tym filmie można zobaczyć ładowanie lizatu komórkowego z komórek zebranych w fazie logarytmu do gradientu sacharozy. Następnie komórki są przędzone do rybosomów osadowych, a monitor absorbancji jest używany do generowania profilu rybosomu.
Właśnie obejrzałeś wprowadzenie JoVE do hodowli i utrzymania Saccharomyces cerevisiae. W tym filmie dokonaliśmy przeglądu krzywej wzrostu drożdży, pokazaliśmy, jak hodować kultury komórkowe i pokazaliśmy, jak utrzymać szczepy drożdży. Dziękujemy za oglądanie i nie zapomnij polecić tego filmu pączkowi.
View the full transcript and gain access to JoVE Science Education videos
Q1: What are the three phases of a yeast growth curve?
The yeast growth curve has three major phases. During lag phase, cells acclimate to the environment and grow in size but do not divide. In log phase, cells actively divide, leading to cell doubling. Once nutrients deplete, cells enter stationary phase, where division slows and the population remains constant.
Q2: How is optical density used to measure yeast cell growth?
Optical density, or OD, measures the logarithmic ratio of light intensity entering a yeast suspension to light passing through it. A spectrophotometer measures OD at 600 nm wavelength. Plotting OD values over time generates a growth curve that tracks population changes and helps determine cell viability and doubling time.
Q3: What are the main components of yeast growth media?
Rich yeast growth media contains three major components: yeast extract, which provides amino acids, vitamins, and carbohydrates; peptone, the primary amino acid source derived from animal meat or milk; and glucose, a sugar source providing energy. After dissolving these in water, the mixture is sterilized using an autoclave before use.
Q4: How do you start a pure yeast culture from a plate?
Streak yeast cells onto an agar plate using a sterile instrument to spread the culture. Individual colonies form around the streaks, each derived from a single cell. Pick one colony and inoculate it into growth media by mixing briefly. Incubate at 30°C in a shaker for 48 hours to establish a pure culture.
Q5: What is doubling time and why does it matter for yeast experiments?
Doubling time is the period required for a yeast cell population to double in number, calculated using OD measurements from log phase. Wild-type yeast typically has a doubling time of approximately 90 minutes. Knowing doubling time allows researchers to plan experiments throughout the day and predict when cultures reach desired cell densities.
Q6: How should yeast strains be stored for long-term use?
Yeast grown on plates can be stored at 4°C for up to three months, though re-streaking on fresh plates is recommended before inoculating new cultures. For long-term storage, aliquot cells in cryovials containing glycerol and store at -80°C, where they remain viable for several years.
Q7: What research applications use yeast maintenance techniques?
Stationary phase yeast cells study genes regulating genomic DNA instability during aging by plating on selective media where only mutated cells form colonies. Chronological aging studies analyze cell viability loss over time using liquid cultures and growth curves. Log phase cells, representing healthy normal cells, are used to study eukaryotic organelles like ribosomes through reproduction of saccharomyces cerevisiae sexual and asexual processes.
Chapters in this video
0:00
Overview
0:51
Calculating the Doubling Time with the Yeast Growth Curve
2:56
Media Preparation
4:09
Growing Yeast
5:46
Storage
6:30
Applications
8:03
Summary
Videos from this collection: