Name: Pomiar poziomu syntezy hemu w komórkach ssaków (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: Naucz się mierzyć syntezę hemu w komórkach ssaków z użyciem radioaktywnego prekursora C-14. Ta metoda pozwala porównywać poziomy hemu w różnych liniach komórkowych, co jest kluczowe w badaniach nad rakiem.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Linie komórkowe HCC4017 i HBEC30KT zostały dzięki uprzejmości laboratorium dr Johna Minny. Praca ta była wspierana przez fundusze Cecila H. i Idy Green dla dr Li Zhanga.

UWAGA: Podczas pracy z radioaktywnością, podejmuj odpowiednie środki ostrożności, aby uniknąć skażenia eksperymentatora i otoczenia. Wszystkie odpady należy utylizować zgodnie z lokalnymi wytycznymi dotyczącymi bezpieczeństwa radiacyjnego.
1. Przygotowanie komórek
<ol>
	<li>Komórki nasienne w płytkach o średnicy 3,5 cm tak, aby zbieg osiągnął 80%-90% w dniu testu.
	<ol>
		<li>Należy pamiętać, że konfluencja zasiewu dla komórek zależy od typu komórki i jej tempa wzrostu. Podczas traktowania komórek odczynnikiem przez określoną liczbę dni, komórki nasienne tak, aby zbieg wynosił 80%-90% w dniu pomiaru hemu. Jeśli liczba komórek uzyskanych z płytek 3,5 cm jest niewystarczająca, należy użyć płytek 6 cm z taką samą ilością radioaktywnego ALA jak w następnym kroku. 
		Uwaga: Zaleca się stosowanie pojedynczych płytek, ponieważ łatwiej jest obsługiwać pojedyncze płytki.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Dzień przed pomiarem hemu dodać 0,1-0,3 μCi [14C] 5-ALA i zimny ALA, aby osiągnąć końcowe stężenie 20 μM całkowitego ALA do każdej szalki hodowlanej w obszarze roboczym nadającym się do pracy z materiałami promieniotwórczymi i włożyć płytki z powrotem do inkubatora. Najlepiej inkubować z radioaktywnym ALA przez 16 godzin 
	Uwaga: Wymagane znakowanie radioaktywne 5-ALA może się różnić w zależności od linii komórkowych. Wymagana jest liczba radioaktywnych substancji na minutę (cpm) wynosząca co najmniej 100, aby zminimalizować błąd związany z liczeniem. Wskazane jest określenie minimalnej ilości [14C] 5-ALA wymaganej dla badanych linii komórkowych. W przypadku większości eksperymentów 0,1-0,3 μCi jest wystarczające, aby uzyskać dobry pomiar. Dodanie zimnego ALA jest opcjonalne.</li>
</ol>
2. Ekstrakcja hemu
<ol>
	<li>Umieść szalki do hodowli komórkowych na lodzie i przenieś je do miejsca nadającego się do pracy radioaktywnej.
	<ol>
		<li>Cały proces ekstrakcji i odparowywania należy przeprowadzić w okapie przeciwwybuchowym. Ponieważ przechowywany eter może eksplodować, używaj eteru w małych butelkach i odparuj wszelkie pozostałe płyny, nie przechowuj eteru w otwartej butelce dłużej niż jeden miesiąc. Nie używaj acetonu w pobliżu otwartego ognia i grzejników, ponieważ jest wysoce łatwopalny. Przechowuj odczynniki zawierające aceton w szklanych butelkach, ponieważ rozpuszcza on tworzywa sztuczne z kultur tkankowych.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Odessać pożywkę za pomocą pipety. Umyj komórki jeden raz 1 ml 1x zimnego PBS. Odessać PBS.</li>
	<li>Dodaj 1 ml 1x zimnego PBS do płytek i zbierz komórki na dnie płytki za pomocą gumowego policjanta. Przenieść zebrane komórki z każdej płytki do oznakowanej, wstępnie schłodzonej probówki o pojemności 2 ml. Zebrać wszystkie komórki w probówkach o pojemności 2 ml. 
	Uwaga: Użyj świeżego gumowego policjanta do każdej płytki do zeskrobywania komórek z każdej płytki. Na każdą płytkę potrzebne są cztery probówki o pojemności 2 ml, probówka o pojemności 1,5 ml i fiolka scyntylacyjna.</li>
	<li>Wirować z prędkością 15 000 x g przez 1 minutę w temperaturze 4 °C.</li>
	<li>Wyjąć PBS za pomocą pipety, krótko zawirować i usunąć resztki PBS. Zawieś komórki w 100 μl 1x PBS. Wirować, aby ponownie zawiesić komórki i utrzymać na lodzie.</li>
	<li>Pobrać 10 μl z kroku 5 i przenieść do probówki do mikrowirówki o pojemności 1,5 ml i przechowywać na lodzie w celu zmierzenia stężenia białka. 
	Uwaga: Bufor do lizy komórek należy dodać do komórek i przechowywać na lodzie w celu późniejszego zmierzenia stężenia białka.</li>
	<li>Pozostałe 90 μl z kroku 5 wirować przy 5 000 x g przez 30 sekund w temperaturze 4 °C; całkowicie usunąć PBS za pomocą końcówki do pipety o pojemności 200 μl.</li>
	<li>Dodać 300 μl buforu do ekstrakcji hemu (patrz Lista materiałów) do każdej probówki. Następnie wiruj przez 15 sekund, aby wymieszać i połóż na lodzie na 1 minutę, powtórz to 3 razy.
	<ol>
		<li>Dodaj bufor do ekstrakcji hemu (HEB) i szybko wymieszaj probówkę, aby ponownie zawiesić osad, wykonuj tylko jedną lub dwie probówki na raz, ponieważ osad powinien być szybko ponownie zawieszony, bez pozostawiania go w HEB na zbyt długo. Po dodaniu HEB do wszystkich probówek, a osad zostanie ponownie zawieszony, postępuj zgodnie z 15-sekundowym wirem i 1 minutą cyklu lodu, jak w kroku 8. Należy pamiętać, że osad może nie dostać się całkowicie do HEB, jeśli zostanie pozostawiony w buforze HEB przez dłuższy czas i nie zostanie szybko ponownie zawieszony.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Dodać 1,2 ml eteru dietylowego do każdej probówki i wirować przez 30 sekund. Wirować przy 15 000 x g przez 5 minut w temperaturze 4 °C. 
	Uwaga: Eter dietylowy szybko kończy się z końcówek pipet. Aby to kontrolować, pipetuj eter dietylowy w górę i w dół raz lub dwa razy, co pomaga utrzymać eter dietylowy w pipecie. Powtórz tę czynność za każdym razem, gdy używana jest świeża końcówka do pipety.</li>
	<li>Przenieść fazę górną (eterową) za pomocą pipety o pojemności 1 ml do nowej probówki do mikrowirówki. Dodać 0,5 ml 2 N HCl, zmieszać i odwirować jak w kroku 9. 
	Uwaga: Trudno jest dostrzec separację między fazami eteru i HCl. Dlatego należy dodać niewielkie ilości błękitu trypanowego w 2 N roztworze HCl do użycia podczas eksperymentu, wystarczające do nadania mu bladoniebieskiego koloru. Pomoże to rozróżnić te dwie fazy. Dolna faza będzie niebieska, a górna faza eteru będzie bezbarwna. Przenieś górną bezbarwną fazę eteru do nowej probówki i odrzuć dolną fazę HCl (niebieską).</li>
	<li>Powtórz krok 10 jeszcze dwa razy, aby przemyć fazę eterową 2 N HCl. Podczas każdego powtórzenia przenieś tylko górną fazę eteru do nowej probówki i odrzuć dolną fazę HCl.</li>
	<li>Po trzecim przemyciu HCl przenieść górną fazę z pipetą o pojemności 1 ml do fiolki scyntylacyjnej. Wysuszyć próbki, odparowując eter dietylowy, utrzymując próbki w okapie chemicznym O/N.</li>
</ol>
3. Pomiar radioaktywności
<ol>
	<li>Następnego dnia dodać 5 ml płynu scyntylacyjnego do wysuszonych próbek z kroku 2.12.</li>
	<li>Dobrze wstrząśnij, aby wymieszać. Zmierz radioaktywność za pomocą licznika scyntylacyjnego.</li>
</ol>
4. Obliczenia
<ol>
	<li>Poddać komórki z etapu 2.6 za pomocą równych ilości buforu CelLytic M (patrz Lista Materiałów) i wirować w temperaturze 14 000 x g przez 5 minut w temperaturze 4 °C.</li>
	<li>Pobrać podwielokrotność supernatantu i zmierzyć stężenie białka za pomocą zestawu do oznaczania białek BCA. 
	Całkowita zawartość białka w mg (TP) = (90 μl * zawartość białka w μg/μl) / 1 000 
	Poziom syntezy hemu (radioaktywność/TP) = pmol/mg białka.</li>
</ol>

Nie mamy nic do ujawnienia.

Hem odgrywa kluczową rolę w wytwarzaniu energii komórkowej poprzez oddychanie26. Wiadomo, że zmieniony metabolizm hemu jest związany z różnymi chorobami, w tym rakiem28,41. Wiadomo, że hamowanie syntezy hemu powoduje zatrzymanie cyklu komórkowego i apoptozę w komórkach Hela26,41. Wykazano, że wysoki poziom syntezy hemu jest związany z progresją komórek raka płuc28. Dlatego bardzo ważne byłoby zmierzenie poziomów biosyntezy hemu w komórkach w różnych warunkach. Omawiana tutaj me...

Heme, kompleks żelaza żelaza i protoporfiryny IX jest centralną cząsteczką do transportu i wykorzystania tlenu w praktycznie wszystkich organizmach żywych1-3. Unikalna struktura hemu umożliwia mu funkcjonowanie jako nośnik dwuatomowych gazów i elektronów, a także pełnienie różnych innych funkcji1-5. Na przykład hem wiąże się z tlenem w hemoglobinie i mioglobinie w celu przenoszenia i magazynowania tlenu6,7. Działa również jako nośnik elektronów w cytochromach podczas oddychania i działa jako donor elektronów w reakcjach redoks katalizowanych przez enzymy cytochromu P4508,9. Jedną z najważniejszych cech hemu jest to, że może on odgrywać rolę regulacyjną w procesach komórkowych i molekularnych, takich jak transkrypcja genów, synteza białek i biogeneza mikro-RNA4. Na przykład wpływa na transkrypcję wielu genów poprzez kontrolowanie aktywności ssaczego represora transkrypcyjnego Bach1 i receptora jądrowego ssaków Rev-erbα10-15. Hom reguluje aktywację białka aktywatora hemu (Hap) 1, które odgrywa ważną rolę w aktywacji genów zaangażowanych w oddychanie i kontrolowanie uszkodzeń oksydacyjnych w odpowiedzi na hem lub tlen16. Hom reguluje również transkrypcję genów w komórkach neuronalnych poprzez sygnalizację czynnika wzrostu nerwów (NGF)3,17-20. Reguluje również syntezę białek w komórkach erytroidalnych ssaków poprzez modulację aktywności kinazy eIF2α regulowanej hemem (HRI)21-24. Ponadto hem wpływa na aktywność kluczowych białek sygnałowych, takich jak kinaza tyrozynowa Jak2 i Src, które są niezbędne do prawidłowego funkcjonowania komórek i wzrostu komórek4,20,25. Stwierdzono, że w komórkach HeLa hamowanie hemu powoduje zatrzymanie cyklu komórkowego i aktywację markerów związanych ze starzeniem się i apoptozą26. Zarówno niedobór hemu, jak i zwiększony poziom hemu są związane z poważnymi skutkami zdrowotnymi u ludzi27. Ostatnie badania molekularne i epidemiologiczne wykazały pozytywny związek między wysokim spożyciem hemu a zwiększonym ryzykiem chorób, takich jak cukrzyca typu 2, choroba niedokrwienna serca i kilka nowotworów, w tym rak płuc, rak jelita grubego i rak trzustki27,28. Korzystając z dopasowanej pary normalnych i rakowych komórek płuc, laboratorium autorów odkryło, że komórki rakowe mają zwiększony poziom zużycia tlenu, syntezy hemu i białek zaangażowanych w wychwyt hemu i wykorzystanietlenu. Co ciekawe, hamowanie syntezy hemu zmniejszało zużycie tlenu, proliferację, migrację i tworzenie kolonii komórek nowotworowych28. Tak więc wahania poziomów endogennego hemu odgrywają ważną rolę w regulacji procesów molekularnych i komórkowych3,4,28,29.
U ssaków biosynteza hemu przebiega w ośmiu etapach, z udziałem enzymów znajdujących się w mitochondriach i cytozolu4 (Rysunek 1). Biosynteza hemu rozpoczyna się w macierzy mitochondriów od kondensacji glicyny i sukcynylo-coA w celu wytworzenia kwasu 5-aminolewulinowego (5-ALA), katalizowanego przez syntazę ALA (ALAS)4,31. Jest to etap ograniczający szybkość biosyntezy hemu w komórkach nieerytroidalnych. 5-ALA jest następnie eksportowany do cytozolu, gdzie zachodzą kolejne cztery etapy, aby wytworzyć koproporfirynogen III (CPgenIII), który jest następnie importowany z powrotem do mitochondriów, gdzie jest przekształcany w protoporfirynę IX (PPIX). Na koniec jedna cząsteczka żelaza jest włączana do protoporfiryny IX (PPIX) w celu wytworzenia hemu, reakcji katalizowanej przez ferrochelatazę (FECH)2,4.
Poziom biosyntezy hemu zależy przede wszystkim od poziomu enzymu ALAS, który jest ściśle kontrolowany przez wewnątrzkomórkowe żelazo i hem4. Na biosyntezę hemu mogą mieć wpływ wady genetyczne, dostępność niektórych minerałów i witamin (np. ryboflawiny,), narażenie na toksyny (np. aluminium, ołów), niedotlenienie, gorączka i poziom niektórych steroidów (np. estrogenu)32-35. Poziom syntezy hemu jest zmieniony w różnych stanach chorobowych. Zmniejszona biosynteza hemu może powodować niedokrwistość, a także choroby neurologiczne3,36. Alternatywnie, zwiększona biosynteza hemu odgrywa ważną rolę w progresji niektórych nowotworów28,37. Wykazano, że hem ma kluczowe znaczenie dla wzrostu, różnicowania i przetrwania komórek tłuszczowych, erytroidalnych i nerwowych ssaków4,38-41. Na przykład niedobór hemu prowadzi do uszkodzenia neurytów w pierwotnych neuronach korowych myszy poprzez hamowanie receptora glutaminianu NMDA (N-metylo-D-asparaginianu) 17. Dodatkowo zahamowanie syntezy hemu powoduje zaprogramowaną śmierć komórek w komórkach ludzkiego nabłonkowego raka szyjki macicyHeLa 26,41. Dlatego pomiar poziomu biosyntezy hemu w różnych komórkach w różnych warunkach jest ważny dla badania etiologii i progresji wielu chorób.
Tutaj opisujemy szybką i czułą metodę pomiaru poziomu wewnątrzkomórkowej syntezy hemu za pomocą [4-14C] kwasu 5-aminolewulowego. Jest to metoda alternatywna dla innych metod wykorzystujących 55Fe lub 59Fe. Preferujemy stosowanie 14C, ponieważ jego promieniowanie jest bardzo słabe. Natomiast do pracy z izotopami Fe wymagana jest silna ochrona. Ponadto metoda ta ma na celu szybki pomiar i porównanie syntezy hemu w różnych komórkach równolegle. Do pomiaru bezwzględnych poziomów hemu można zastosować wcześniej ustaloną metodę z użyciem HPLC42,43.

<table><tbody><tr><td>Aceton</td><td>Sigma</td><td>650501</td><td></td></tr><tr><td>Eter dietylowy</td><td>Sigma</td><td>296082</td><td></td></tr><tr><td>HCl (kwas solny)</td><td>Fisher</td><td>A481-212</td><td></td></tr><tr><td>Płynny koktajl scyntylacyjny&nbsp;</td><td>MP Biomedicals</td><td>882470</td><td></td></tr><tr><td>Błękit trypanowy</td><td>Gibco</td><td>15250</td><td></td></tr><tr><td>Znakowany radioizotopowo 4-14C Kwas aminolewulinowy</td><td>Perkin-Elmer nauki przyrodnicze</td><td></td><td>Przechowywać w temperaturze -80 &deg; C</td></tr><tr><td>CelLytic M</td><td>Sigma</td><td>C2978</td><td>Odczynnik do lizy komórek ssaków</td></tr><tr><td>Pierce BCA Zestaw do oznaczania białek&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>23227</td><td></td></tr><tr><td><silny>Specyficzny odczynnik</mocny></td><td><silny>Składnik</mocny></td><td><silny>Dozowanie</mocny></td><td></td></tr><tr><td>Bufor do ekstrakcji hemu: Aceton:HCl:Woda (25:1,3:5)</td><td>Aceton Skoncentrowany HCl Woda</td><td>25 ml 1,3 ml 5 ml</td><td></td></tr></tbody></table>

pomiar poziomu syntezy hemu w komórkach ssaków

Measurement of Heme Synthesis Levels in Mammalian Cells

Heme służy jako grupa protetyczna dla szerokiej gamy białek znanych jako hemoproteiny, takich jak hemoglobina, mioglobina i cytochromy. Bierze udział w różnych procesach molekularnych i komórkowych, takich jak transkrypcja genów, translacja, różnicowanie komórek i proliferacja komórek. Poziomy biosyntezy hemu różnią się w różnych tkankach i typach komórek i są zmieniane w stanach chorobowych, takich jak niedokrwistość, neuropatia i rak. Technika ta wykorzystuje [4-14C] kwas 5-aminolewulinowy ([14C] 5-ALA), jeden z wczesnych prekursorów w szlaku biosyntezy hemu do pomiaru poziomów syntezy hemu w komórkach ssaków. Test ten obejmuje inkubację komórek z [14C] 5-ALA, a następnie ekstrakcję hemu i pomiar radioaktywności wbudowanej w hem. Ta procedura jest dokładna i szybka. Metoda ta mierzy względne poziomy biosyntezy hemu, a nie całkowitą zawartość hemu. Aby zademonstrować zastosowanie tej techniki, zmierzono poziomy biosyntezy hemu w kilku liniach komórkowych ssaków.

Metodę tę zastosowano do porównania poziomu syntezy hemu w normalnych komórkach płuca (HBEC30KT) i komórkach raka płuca (HCC4017). Rysunek 2 przedstawia wyższy poziom syntezy hemu w komórkach raka (HCC4017) niż w normalnych komórkach płuca (HBEC30KT). Poziom syntezy hemu zmierzono również w normalnych komórkach i komórkach raka w obecności odsprzęgacza mitochondrialnego, karbonylowego cyjanorku 3-chlorofenylhydrazonu (CCCP). Komórki inkubowano z 10 μM CCCP przez 24 hr przed pomiarem poziomu syntezy hemu....

Zmienione wewnątrzkomórkowe poziomy hemu są związane z powszechnymi chorobami, takimi jak rak. W związku z tym istnieje potrzeba pomiaru poziomu biosyntezy hemu w różnych komórkach. Celem tego protokołu jest zapewnienie szybkiej i czułej metody pomiaru i porównywania poziomów syntezy hemu w różnych komórkach.

Pomiar poziomu syntezy hemu w komórkach ssaków

Heme serves as the prosthetic group for a wide variety of proteins known as hemoproteins, such as hemoglobin, myoglobin and cytochromes. It is involved in ...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest pomiar poziomu syntezy hemu w komórkach ssaków przy użyciu specyficznego radioaktywnego prekursora syntezy hemu. Osiąga się to poprzez wstępną inkubację komórek z kwasem 5-aminolewulowym znakowanym C 14, który zostanie włączony do hemu. Drugim krokiem jest zebranie komórek poprzez zeskrobanie, a następnie ich lizę z wykorzystaniem buforu do ekstrakcji hemu.Następnie dodaje się eter datylowy w celu ekstrakcji hemu, a następnie zbiera się fazę eterową. Ostatnim krokiem jest przemycie fazy eterowej kwasem solnym, aby oddzielić porfiryny od hemu. W końcowej fazie można zmierzyć poziom syntezy hemu w liniach komórkowych, a wyniki wykazują zróżnicowane poziomy syntezy hemu w różnych komórkach nowotworowych oraz komórkach HK 2 93 T.Główną zaletą tej techniki w porównaniu z istniejącymi metodami, takimi jak zastosowanie glicyny C 14 lub żelaza 59, jest fakt, że C 14 ELA wykazuje wysoką swoistość i mierzy przepływ całego szlaku. Dodatkowo promieniowanie C 14 jest bardzo słabe w porównaniu z żelazem 59. Zastosowanie tej techniki rozciąga się na diagnostykę i terapię nowotworów oraz chorób neurologicznych, ponieważ zaburzony metabolz HE wiąże się z różn

measurement-of-heme-synthesis-levels-in-mammalian-cells

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Pomiar poziomów syntezy hemu w komórkach ssaków

Opisano metodę pomiaru markerów biochemicznych hipoksji i niedokrwienia u noworodków. Podejście to wykorzystuje wysokosprawną chromatografię cieczową (HPLC) oraz chromatografię gazową sprzężoną ze spektrometrią mas (GC/MS).

Biochemiczny pomiar hipoksji noworodkowej

Ten artykuł skupi się na generowaniu ludzkiej endodermy wątrobowej z populacji ludzkich embrionalnych komórek macierzystych.

Solidna generacja komórek podobnych do hepatocytów z ludzkich embrionalnych populacji komórek macierzystych

W tym filmie opisujemy opartą na kolorymetrii metodę określania zawartości żelaza niehemowego w tkance wątroby myszy. Sulfonian batofenantroliny jest stosowany jako substrat chromogenny w obecności środka redukującego, który przekształca żelazo żelazowe w chelatowalne żelazo żelaza.

Test kolorymetryczny na bazie sulfonianu batofenantroliny: prosta i szybka metoda oznaczania ilościowego żelaza niehemowego w tkance wątroby myszy

Tutaj pokazujemy enzymatyczne podejście do izolacji pierwotnych hepatocytów od dorosłych myszy i opisujemy kwantyfikację odpowiedzi zapalnej za pomocą ELISA i PCR w czasie rzeczywistym.

Indukcja odpowiedzi zapalnej w pierwotnych kulturach hepatocytów od myszy

Ta metoda opisuje przygotowanie próbki z hodowanych komórek i tkanek zwierzęcych, ekstrakcję i derywatyzację koenzymu A w próbkach, a następnie wysokociśnieniową chromatografię cieczową w celu oczyszczenia i kwantyfikacji derywatyzowanego koenzymu A poprzez absorbancję lub detekcję fluorescencji.

Kwantyfikacja koenzymu A w komórkach i tkankach

Tutaj opisujemy wiarygodną metodę pomiaru masy mitochondriów i potencjału błonowego w hodowanych ex vivo hematopoetycznych komórkach macierzystych i limfocytach T.

Pomiar masy mitochondrialnej i potencjału błonowego w hematopoetycznych komórkach macierzystych i limfocytach T metodą cytometrii przepływowej

Ta praca opisuje przygotowanie ekstraktu komórkowego z Escherichia coli (E. coli), po którym następują reakcje syntezy białek bez komórek (CFPS) w czasie krótszym niż 24 godziny. Wyjaśnienie protokołu autoindukcji bezkomórkowej (CFAI) zawiera szczegółowe informacje o ulepszeniach wprowadzonych w celu zmniejszenia nadzoru badaczy i zwiększenia ilości uzyskiwanego ekstraktu komórkowego.

Od komórek do bezkomórkowej syntezy białek w ciągu 24 godzin dzięki bezkomórkowemu przepływowi pracy

Tutaj dostępny jest protokół pomiaru zawartości żelaza niehemowego w tkankach zwierzęcych, przy użyciu prostego, dobrze znanego testu kolorymetrycznego, który można łatwo wdrożyć w większości laboratoriów.

Pomiar zawartości żelaza niehemowego w tkankach za pomocą testu kolorymetrycznego na bazie batofenantroliny

Ten protokół opisuje, jak trójwymiarowy system hodowli komórkowej może być używany do modelowania, leczenia i analizowania modyfikacji chromatyny w stanie zbliżonym do fizjologicznego.

Kwantyfikacja na poziomie globalnym modyfikacji potranslacyjnych histonów w modelu 3D hodowli komórkowej tkanki wątrobowej

Ta praca opisuje protokół do kwantyfikacji globalnych modyfikacji histonów za pomocą wewnątrzjądrowej cytometrii przepływowej w izolowanym mikrogleju mózgu. Praca zawiera również protokół izolacji mikrogleju, który został wykorzystany do zebrania danych.

Kwantyfikacja globalnych modyfikacji potranslacyjnych histonów za pomocą wewnątrzjądrowej cytometrii przepływowej w izolowanym mikrogleju mózgu myszy

Naucz się mierzyć syntezę hemu w komórkach ssaków z użyciem radioaktywnego prekursora C-14. Ta metoda pozwala porównywać poziomy hemu w różnych liniach komórkowych, co jest kluczowe w badaniach nad rakiem.

Pomiar poziomu syntezy hemu w komórkach ssaków

Przeglądaj więcej filmów