Mysi model do nieinwazyjnego obrazowania w celu wykrywania i monitorowania nawrotu raka jajnika

Ogólnym celem tej procedury jest stworzenie modelu ksenoprzeszczepu wewnątrzotrzewnowego raka jajnika, który naśladuje profil kliniczny obserwowany u pacjentek z rakiem jajnika. Osiąga się to poprzez domaciczne wstrzyknięcie komórek macierzystych raka jajnika znakowanych fluorescencją mCherry u nagich myszy. Następnie ustalenie progresji guza i odpowiedź na terapię określa się poprzez pomiar fluorescencji jako substytutu obciążenia guza.

Pozwala to na monitorowanie w czasie rzeczywistym progresji guza lub odpowiedzi na leczenie bez konieczności poświęcania myszy. Model, który tutaj pokazujemy. B podsumowuje profil kliniczny obserwowany u pacjentek z rakiem jajnika, a zatem pozwala nam nie tylko badać biologię choroby, ale także identyfikować nowe terapie, zwłaszcza w przypadku nawrotu raka jajnika.

Model pozwala nam monitorować postęp nowotworu, aby określić w czasie rzeczywistym, czy reagują one na chemioterapię, a także określić, czy choroba nawróci, jeśli chemioterapia zostanie przerwana. Aby rozpocząć tę procedurę, znieczul siedmio- do ośmiotygodniowej nagiej myszy grasicy 2% izofu fluoru. Następnie sprawdź, czy jest całkowicie znieczulony, ściskając jego opuszkę stopy.

Następnie połóż zwierzę na prawym boku na sterylnym gaziku z głową odwróconą od eksperymentatora. Nałóż maść na oba oczy, aby zapobiec wysuszeniu podczas znieczulenia później. Szybko włóż głowę zwierzęcia do systemu stożków nosowych podłączonego do waporyzatora izofluranowego.

Zdezynfekuj prawą stronę brzucha za pomocą wacików nasączonych alkoholem, a następnie jodem. Następnie umieść na nim sterylną serwetę chirurgiczną za pomocą sterylnych nożyczek chirurgicznych i kleszczy. Wykonaj jedno- lub dwucentymetrowe nacięcie skóry w lewym dolnym kwadrancie myszy.

Następnie unieś mięsień i wykonaj nacięcie, aby dotrzeć do otrzewnej. Następnie wypreparuj mięsień skośny, aby odsłonić jamę brzuszną. Następnie zlokalizuj lewy róg macicy za pomocą sterylnego zacisku hemostatowego, zarówno przednią, jak i tylną stronę rogu.

Umieść zacisk przedni tuż pod jajowodem, a zacisk tylny tuż nad szyjką macicy. W tym momencie miej drugiego eksperymentatora. Wstrzyknąć zawiesinę komórkową, umieszczając komórki zawierające igłę pod kątem 45 stopni prostopadłym do rogu.

Następnie powoli wstrzyknij 50 mikrolitrów zawiesiny komórkowej do światła rogu macicy. Następnie zwolnij przedni zacisk, a następnie tylny zacisk. Następnie umieść róg macicy z powrotem w jamie brzusznej.

Zamknij otrzewną za pomocą syntetycznego wchłanialnego szwu. Następnie zamknij skórę za pomocą kleju tkankowego. Po zakończeniu wyjmij mysz ze stożka nosowego i umieść ją z powrotem w klatce.

Upewnij się, że zwierzę jest przytomne i aktywne, zanim zostawisz je bez opieki. Podawaj ibuprofen w wodzie do picia przez pierwsze 48 godzin po zabiegu. Teraz otwórz oprogramowanie do obrazowania molekularnego, a następnie otwórz oprogramowanie Mars Capture.

Moduł ten zapewnia skoordynowaną kontrolę ustawień przechwytywania Marsa przy jednoczesnym wykorzystaniu możliwości systemów obrazowania w zakresie przechwytywania i analizy. Następnie wprowadź wstępnie określone wartości przechwytywania. Następnie zapisz parametry jako pojedyncze pliki sesji.

Następnie utwórz protokół sekwencji rotacji, wybierając przycisk utwórz edytuj protokoły Z okna pobierania interfejsu systemu wybierz wcześniej zapisany plik sesji fluorescencyjnej i zapisz jako krok pierwszy. Następnie wybierz odpowiedni plik sesji rentgenowskiej i zapisz go w kroku drugim. Po wybraniu kroku pierwszego.

Użyj opcji ustaw serię obrotów z menu podręcznego przed przechwytywaniem obrazu, aby ustawić żądany zakres kąta początkowego i przyrost. Aby zapewnić płynną wizualizację obiektów, konkretne wartości obejmują kąt początkowy minus 180 stopni, zakres 375 stopni i przyrost 15 stopni. Zapisz protokół i kliknij przycisk gotowe, aby zainicjować Marsa.

Następnie rozpocznij wyrównanie, wybierając przycisk podglądu w menu pozyskiwania, aby wyświetlić zakładkę rotatora, użyj ustawienia przechwytywania fluorescencji, jak określono dla obrazowania wiśniowego M. Drzwi powinny być otwarte podczas podglądu, aby przyspieszyć pozycjonowanie, co pozwala również na wizualną kontrolę położenia myszy podczas procedury wyrównywania. Następnie wybierz opcję załadowania myszy i przejdź przez serię menu pozycjonowania.

Upewnij się, że rurkowaty koniec składanego stożka nosowego znajduje się we wgłębieniu stożka nosowego. Następnie umieść znieczuloną mysz w pozycji leżącej z głową w stożku nosowym. Rozpocznij kalibrację w pozycji zerowej stopni, z brzuszną stroną zwierzęcia skierowaną w dół.

Użyj dwóch pokręteł na systemie obracania, aby ustawić zwierzę tak, aby wyglądało na wyśrodkowane w oknie podglądu. Powtórz proces zgodnie z monitem dla pozycji minus 180, minus 90 plus 90 i plus 180 stopni i kliknij gotowe. Oto przykład filmu wygenerowanego na podstawie pozyskanych obrazów.

Rysunek ten przedstawia korelację między obciążeniem guzem wewnątrzotrzewnowym a fluorescencyjnym obrazem rentgenowskim. Około 32 dni po wstrzyknięciu komórek raka jajnika wiśni F 2 M wykonano obrazowanie 2D, a myszy poświęcono w celu skorelowania uzyskanego obrazu z rzeczywistym obciążeniem guza. Pokazano tutaj zestawy danych dotyczących rotacji, które umożliwiają obrazowanie pod wieloma kątami i wykrywanie guzów pod kontrolą, leczonych paklitakselem i nawracających myszy.

Obraz pojedynczej myszy na panel jest pokazany podczas obracania za pomocą systemu Mars. Należy pamiętać, że nawet u myszy kontrolnych ze znacznym obciążeniem guzem, rozmiar guza może być niedoszacowany w zależności od kąta, z którego wykonano zdjęcie. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś być w stanie ustalić dootrzewnowy model ksenoprzeszczepu raka jajnika przy użyciu drogi wewnątrzmacicznej, a także być w stanie wykonać obrazowanie żywych zwierząt przy użyciu multimodalnego systemu rotacji.