Przygotowanie rAAV9 do nadekspresji lub knockdown genów w sercach myszy

Ogólnym celem tej procedury jest przygotowanie rekombinowanego wirusa związanego z adenowirusem 9 lub rAAV9 do manipulowania ekspresją genów w sercach myszy. Metoda ta może odpowiedzieć na kluczowe pytania z zakresu kardiologii i genetyki molekularnej, np. jak badać funkcję genów w sercu myszy in vivo. Główną zaletą tej techniki jest to, że pozwoli nam łatwo manipulować ekspresją i funkcją genów in vivo w sercu myszy, umożliwiając funkcjonalny dostęp do funkcji genów bez konieczności polegania na genetycznie zmodyfikowanych modelach zwierzęcych.

Po wygenerowaniu konstruktów rAAV9 i hodowli komórek HEK293 zgodnie z protokołem tekstowym, w celu transfekcji komórek pierwszego dnia, połącz 70 mikrogramów plazmidu AAV Rep-Cap, 70 mikrogramów plazmidu rAAV9 i 200 mikrogramów plazmidu pomocniczego Ad w 50-mililitrowej probówce wirówkowej. Dodaj 49 mililitrów DMEM o temperaturze pokojowej bez FBS do probówki i dobrze wymieszaj. Następnie, aby przygotować roztwór PEI do DNA w proporcji cztery do jednego, dodaj 1 360 mikrolitrów PEI do probówki i dobrze wymieszaj.