Wewnątrzportalowy przeszczep wysp trzustkowych w modelu mysim

Nazywam się Thomas Linn i jestem głównym badaczem Grupy Badawczej ds. Cukrzycy na Uniwersytecie Justusa Liebiga w Giessen w Niemczech. Przeszczep wysp trzustkowych jest leczeniem cukrzycy typu 1. Eksperymentalny przeszczep wysp trzustkowych przeprowadza się do torebki nerkowej, podczas gdy programy kliniczne preferują drogę wewnątrzwrotną.

Dlatego uważamy, że potrzebne są dalsze badania nad przeszczepem wysp trzustkowych wewnątrz wrotnych w modelach przedklinicznych. Na przykład wyspy trzustkowe są narażone na działanie krwi, ponieważ miejsce przeszczepu jest wewnątrznaczyniowe. Co więcej, technika mikrochirurgii wymaga pewnego doświadczenia.

Na przykład po wstrzyknięciu żyły wrotnej może wystąpić krwawienie lub mogą wystąpić problemy ze znieczuleniem lub utrzymaniem masy ciała myszy biorcy. Dlatego uważamy, że wizualne wyjaśnienie procedury jest kluczowe. Ten film koncentruje się na wewnątrzwrotnej drodze przeszczepu wysp trzustkowych.

Aby osiągnąć normalną glikemię u myszy z cukrzycą, można go stosować do przeszczepu syngenicznego i allogenicznego u czarnych myszy, ale także w modelach syngenicznych u nagich biorców myszy. Usuń izolowane wysepki z inkubatora i umieść je pod stołem przepływowym. Wysepki wyśrodkuj okrężnym ruchem wahadłowym szalki Petriego.

Napełnij 100-mikrolitrową pożywkę w strzykawce o pojemności jednego ml za pomocą niebieskiej igły. Następnie dodaj 350 wysepek do 300 mikrolitrów roztworu Hanka. Trzymać strzykawkę w pozycji pionowej, aby wyspy trzasnkowe mogły się ustabilizować.

Zmniejsz objętość do 50 mikrolitrów. Zamień niebieską igłę na brązową. Do tej samej strzykawki dodaj 150 mikrolitrów pożywki o gradiencie gęstości do góry, aby osiągnąć końcową objętość 200 mikrolitrów w strzykawce.

Unikaj pęcherzyków powietrza. Utrzymać strzykawkę w pozycji pionowej. Obróć go lekko, aby uniknąć zbrylania się wysepek.

Wysepki osiądą na stożku strzykawki w ciągu dwóch do trzech minut. Po trzech dniach od wstrzyknięcia streptozotocyny sprawdź poziom glukozy we krwi, nakłuwając żyłę ogonową za pomocą ręcznego glukometru. Znieczulić myszy dalzylozyną i ketaminą przez wstrzyknięcie dootrzewnowe.

Umieść myszy w pozycji leżącej na ciepłej płycie termicznej. Sprawdź znieczulenie głębokościowe, ściskając palec u nogi. Oczyść skórę bezskórnym środkiem infekcyjnym.

Aby zapobiec wysuszeniu oczu, utrzymuj je wilgotne maścią do oczu. Rozpocznij od elektrotomii, przytrzymując skórę kleszczem i wykonując nożyczkami środkowe nacięcie o długości od dwóch do trzech centymetrów. Umieść sterylną mokrą gazę wokół krawędzi rany, aby była wilgotna.

Utrzymuj jelito po lewej stronie i na zewnątrz jamy brzusznej. Przesuń dwunastnicę i zlokalizuj trzustkę. Użyj palca i kciuka, aby odsłonić żyłę wrotną.

Powoli wstrzyknąć wysepki w 200 mikrolitrach do żyły wrotnej. Uciskaj palcem wskazującym miejsce nakłucia przez sześć minut, aby zatrzymać krwawienie. Ostrożnie umieść warstwę jelita, otrzewnej i mięśni brzucha z powrotem w pozycji.

Za pomocą kleszczy unieś skórę, zamknij nacięcie mięśni i górną warstwę skóry wchłanialnym jedwabnym szwem. Zastosuj środek gojący rany. Utrzymuj temperaturę ciała na poziomie 37 stopni Celsjusza na ciepłej płycie termicznej.

Obserwuj mysz, aż odzyska wystarczającą przytomność. Dostarczaj tramadol wraz z płynem, aby poradzić sobie z bólem. Po przeszczepieniu wysp trzustkowych zaobserwowano nagły spadek poziomu glukozy we krwi w pierwszym dniu, z 23 milimolów na litr do 4,6 milimola na litr u myszy z cukrzycą wywołaną strepto.

Prawidłowa glikemia utrzymywała się do 121 dni. Masa ciała i poziom glukozy we krwi były mniej więcej zgodne z tym samym wzorcem. Po wstrzyknięciu streptozotocyny i operacji masa ciała zmniejszyła się; Od drugiego dnia ma tendencję do wzrostu w kierunku normy, z 25,3 grama do 29,7 grama.

U myszy z dużym niedopasowaniem zgodności tkankowej po przeszczepie wysp trzustkowych poziom glukozy we krwi spadł do 4,4 milimola na litr, a normalną glikemię obserwowano do 10 dni. Potem zaczyna się odrzucać. Masa ciała myszy z cukrzycą również przebiega według podobnego wzorca.

W udanym wszczepieniu przeszczepionych wysp trzustkowych do wątroby. W tym badaniu badana jest wewnątrzwrotna droga przeszczepu wysp trzustkowych. Protokół ten jest bardzo skuteczny w łagodzeniu stresu cukrzycowego i zapewnia dogłębną możliwość zbadania przeszczepu wysp trzustkowych.

Protokół ten potwierdza, że około 350 wysp trzustkowych jest zdolnych do odwrócenia stanu hiperglikemii. Co więcej, żadna z myszy nie zmarła podczas zabiegu, a kontrola glikemii została utrzymana.