Name: Niedrożność tętnicy środkowej mózgu umożliwiająca reperfuzję poprzez wspólną naprawę tętnicy szyjnej u myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 59 s
Description: Poznaj technikę naprawy tętnicy szyjnej wspólnej u myszy, która umożliwia reperfuzję tętnicy środkowej mózgu. Metoda zwiększa przepływ krwi i redukuje zmienność wyników w modelach udaru.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca została sfinansowana przez Narodowe Centrum Wymiany, Udoskonalania i Redukcji Zwierząt w Badaniach (NC3Rs; NC/M000117/1 do CG). Autorzy dziękują personelowi Wydziału Usług Biomedycznych Uniwersytetu w Leicester za opiekę nad zwierzętami doświadczalnymi oraz Marii Viskaduraki za jej porady statystyczne. Reprezentatywne wyniki zostały dostosowane za zgodą Disease Models & Mechanisms11.

<ol><li>O'Collins, V. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((1%2C026+Experimental+treatments+in+acute+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">1,026 Experimental treatments in acute stroke.</a> Annals of Neurology. 59 (3), 467-477 (2006).</li>
<li>Sutherland, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotection+for+Ischaemic+Stroke%3A+Translation+from+the+Bench+to+the+Bedside%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Stroke%22%5BJournal%5D)">Neuroprotection for Ischaemic Stroke: Translation from the Bench to the Bedside.</a> International Journal of Stroke. 7 (5), 407-418 (2012).</li>
<li>Reeves, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+Stroke+Care+in+the+US%3A+Results+from+4+Pilot+Prototypes+of+the+Paul+Coverdell+National+Acute+Stroke+Registry%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Acute Stroke Care in the US: Results from 4 Pilot Prototypes of the Paul Coverdell National Acute Stroke Registry.</a> Stroke. 36 (6), 1232-1240 (2005).</li>
<li>Wardlaw, J. M., Murray, V., Berge, E., del Zoppo, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombolysis+for+acute+ischaemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Cochrane+Database+of+Systematic+Reviews%22%5BJournal%5D)">Thrombolysis for acute ischaemic stroke.</a> Cochrane Database of Systematic Reviews. (7), CD000213(2014).</li>
<li>Pangalos, M. N., Schechter, L. E., Hurko, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+development+for+CNS+disorders%3A+strategies+for+balancing+risk+and+reducing+attrition%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Drug development for CNS disorders: strategies for balancing risk and reducing attrition.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 6 (7), 521-532 (2007).</li>
<li>Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiological+basis+of+translational+stroke+research%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Pathophysiological basis of translational stroke research.</a> Folia Neuropathologica. 47 (3), 213-227 (2009).</li>
<li>Ringelstein, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+and+extent+of+hemispheric+brain+infarctions+and+clinical+outcome+in+early+and+delayed+middle+cerebral+artery+recanalization%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Type and extent of hemispheric brain infarctions and clinical outcome in early and delayed middle cerebral artery recanalization.</a> Neurology. 42 (2), 289-289 (1992).</li>
<li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+focal+stroke%3A+Size%2C+mechanism%2C+and+purpose%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroRX%22%5BJournal%5D)">Rodent models of focal stroke: Size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRX. 2 (3), 396-409 (2005).</li>
<li>Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bench+to+Bedside%3A+The+Quest+for+Quality+in+Experimental+Stroke+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Bench to Bedside: The Quest for Quality in Experimental Stroke Research.</a> Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 26 (12), 1465-1478 (2006).</li>
<li>Ingberg, E., Dock, H., Theodorsson, E., Theodorsson, A., Ström, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+parameters%27+impact+on+mortality+and+variability+in+mouse+stroke+experiments%3A+a+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Method parameters' impact on mortality and variability in mouse stroke experiments: a meta-analysis.</a> Scientific Reports. 6, 21086(2016).</li>
<li>Trotman-Lucas, M., Kelly, M. E., Janus, J., Fern, R., Gibson, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+alternative+surgical+approach+reduces+variability+following+filament+induction+of+experimental+stroke+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">An alternative surgical approach reduces variability following filament induction of experimental stroke in mice.</a> Disease Models & Mechanisms. 10 (7), 931-938 (2017).</li>
<li>Macrae, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+stroke+research+-+advantages+and+disadvantages+of+the+most+common+rodent+models+of+focal+ischaemia%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Preclinical stroke research - advantages and disadvantages of the most common rodent models of focal ischaemia.</a> British Journal of Pharmacology. 164 (4), 1062-1078 (2011).</li>
<li>McColl, B. W., Carswell, H. V., McCulloch, J., Horsburgh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extension+of+cerebral+hypoperfusion+and+ischaemic+pathology+beyond+MCA+territory+after+intraluminal+filament+occlusion+in+C57Bl%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Extension of cerebral hypoperfusion and ischaemic pathology beyond MCA territory after intraluminal filament occlusion in C57Bl/6J mice.</a> Brain Research. 997 (1), 15-23 (2004).</li>
<li>Trueman, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Critical+Re-Examination+of+the+Intraluminal+Filament+MCAO+Model%3A+Impact+of+External+Carotid+Artery+Transection%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Stroke+Research%22%5BJournal%5D)">A Critical Re-Examination of the Intraluminal Filament MCAO Model: Impact of External Carotid Artery Transection.</a> Translational Stroke Research. 2 (4), 651-661 (2011).</li>
<li>Dittmar, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+ECA+transection+in+the+development+of+masticatory+lesions+in+the+MCAO+filament+model%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">The role of ECA transection in the development of masticatory lesions in the MCAO filament model.</a> Experimental Neurology. 195 (2), 372-378 (2005).</li>
<li>Kilkenny, C., Browne, W. J., Cuthill, I. C., Emerson, M., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+Bioscience+Research+Reporting%3A+The+ARRIVE+Guidelines+for+Reporting+Animal+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+Biology%22%5BJournal%5D)">Improving Bioscience Research Reporting: The ARRIVE Guidelines for Reporting Animal Research.</a> Plos Biology. 8 (6), e1000412(2010).</li>
<li>Langford, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coding+of+facial+expressions+of+pain+in+the+laboratory+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Coding of facial expressions of pain in the laboratory mouse.</a> Nature Methods. 7 (6), 447-479 (2010).</li>
<li>Orsini, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+Mannose-Binding+Lectin+Confers+Long-Lasting+Protection+With+a+Surprisingly+Wide+Therapeutic+Window+in+Cerebral+Ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Targeting Mannose-Binding Lectin Confers Long-Lasting Protection With a Surprisingly Wide Therapeutic Window in Cerebral Ischemia.</a> Circulation. 126 (12), 1484-1494 (2012).</li>
<li>Simoni, M. G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotection+by+Complement+%28C1%29+Inhibitor+in+Mouse+Transient+Brain+Ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Neuroprotection by Complement (C1) Inhibitor in Mouse Transient Brain Ischemia.</a> Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 23 (2), 232-239 (2003).</li>
<li>Clark, W., Gunion-Rinker, L., Lessov, N., Hazel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Citicoline+Treatment+for+Experimental+Intracerebral+Hemorrhage+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Citicoline Treatment for Experimental Intracerebral Hemorrhage in Mice.</a> Stroke. 29 (10), 2136-2140 (1998).</li>
<li>Lin, T. N., He, Y. Y., Wu, G., Khan, M., Hsu, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Brain+Edema+on+Infarct+Volume+in+a+Focal+Cerebral-Ischemia+Model+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Effect of Brain Edema on Infarct Volume in a Focal Cerebral-Ischemia Model in Rats.</a> Stroke. 24 (1), 117-121 (1993).</li>
<li>Loihl, A. K., Asensio, V., Campbell, I. L., Murphy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+nitric+oxide+synthase+%28NOS%29-2+following+permanent+focal+ischemia+and+the+role+of+nitric+oxide+in+infarct+generation+in+male%2C+female+and+NOS-2+gene-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Expression of nitric oxide synthase (NOS)-2 following permanent focal ischemia and the role of nitric oxide in infarct generation in male, female and NOS-2 gene-deficient mice.</a> Brain Research. 830 (1), 155-164 (1999).</li>
<li>Connolly, E. S., Winfree, C. J., Stern, D. M., Solomon, R. A., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procedural+and+strain-related+variables+significantly+affect+outcome+in+a+murine+model+of+focal+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Procedural and strain-related variables significantly affect outcome in a murine model of focal cerebral ischemia.</a> Neurosurgery. 38 (3), 523-531 (1996).</li>
<li>Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Strain+Differences+in+Susceptibility+to+Cerebral+Ischemia+are+Related+to+Cerebral+Vascular+Anatomy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Mouse Strain Differences in Susceptibility to Cerebral Ischemia are Related to Cerebral Vascular Anatomy.</a> Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 13 (4), 683-692 (1993).</li>
<li>Kitagawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+Ischemia+after+Bilateral+Carotid+Artery+Occlusion+and+Intraluminal+Suture+Occlusion+in+Mice%3A+Evaluation+of+the+Patency+of+the+Posterior+Communicating+Artery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Cerebral Ischemia after Bilateral Carotid Artery Occlusion and Intraluminal Suture Occlusion in Mice: Evaluation of the Patency of the Posterior Communicating Artery.</a> Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 18 (5), 570-579 (1998).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Indukcja włókien przejściowego MCAO u gryzoni jest najczęściej stosowanym eksperymentalnym modelem udaru, ponieważ umożliwia reperfuzję do dotkniętego obszaru, naśladując występowanie zdarzeń po klinicznym udarze niedokrwiennym7. Opisano tutaj alternatywne podejście chirurgiczne do tradycyjnej metody przejściowego MCAO indukowanego włóknem u myszy. Alternatywne podejście, obejmujące leczenie przeciwbólowe, unikanie podwiązania ECA i naprawę nacięć CCA, skutkuje zmniejszoną zmiennością lewej komory przy ocenie zarówno przy użyciu metod MRI, jak i barwienia histologicznego11.
Tradycyjne podejścia do indukcji MCAO w dużej mierze opierają się na przecięciu lub przynajmniej podwiązaniu ECA, które, jak wykazano, u szczurów wpływa na zachowania związane z piciem i wzrost utraty masy ciała po MCAO14. Protokół opisany tutaj u myszy, z unikaniem podwiązania ECA i dodawaniem środka przeciwbólowego, sugerował zmniejszenie utraty masy ciała po MCAO bez wpływu na objętość zmiany. W większości eksperymentalnych badań nad udarem mózgu unika się stosowania analgezji lub przynajmniej nie jest jej zgłaszano, ze względu na możliwy zakłócający wpływ na wynik eksperymentu. Jednak całkowite unikanie analgezji nie zawsze jest uzasadnione i istnieje potrzeba zrównoważenia potrzeb w zakresie dobrostanu zwierząt z osiągnięciem celów naukowych.
Sugeruje się, że różnice w wielkości zwierząt, szczepie i anatomii naczyń mózgowych, a także różnice w wielkości i rodzaju włókien, wpływają na wyniki udaru23,24. Opisane tutaj alternatywne podejście pozwala uniknąć polegania na krowie podczas reperfuzji, zmniejszając w ten sposób, przynajmniej częściowo, zmienność obserwowaną między zwierzętami w objętości zmian. Anatomia krów jest bardzo zmienna u myszy, w szczególności w szczepie C57BL/6, który jest często stosowany w eksperymentalnych badaniach nad udarem. 90% myszy C57BL / 6 ma niekompletną CoW z powodu zróżnicowanej drożności tylnej tętnicy łączącej (PcomA), co może mieć wpływ na objętość uszkodzenia niedokrwiennego z powodu niewystarczającej perfuzji struktur poza terytorium MCA13,25. Naprawa CCA u myszy, jak pokazano tutaj, powoduje przywrócenie przepływu krwi przez CCA do obszaru niedokrwiennego, jak opisano wcześniej u szczurów15. Reprezentatywne dane pokazują, że naprawa CCA zwiększa reperfuzję, chociaż przepływ krwi w CCA nie był bezpośrednio mierzony. Chirurg może jednak uwidocznić reperfuzję CCA z krwią po naprawie naczynia, ponieważ powraca ona do stanu pulsującego i pełnego wzdłuż tułowia, proksymalnie i dalej do miejsca naprawy. To wizualne potwierdzenie, wraz z odczytami laserowego przepływomierza dopplerowskiego obszaru niedokrwiennego, może być wykorzystane do potwierdzenia udanej naprawy naczynia. Czas między nałożeniem podkładki tkankowej a usunięciem klipsa naczynia z CCA może mieć wpływ na wynikową drożność CCA, ponieważ skrócenie czasu między nałożeniem podkładki tkankowej a usunięciem klipsa zapobiegnie przyleganiu podkładki tkankowej do przeciwnej strony CCA. Chociaż jest to wyzwanie techniczne, opisana tutaj alternatywna procedura MCAO nie wymaga żadnych dodatkowych umiejętności poza tymi, które są wymagane do przeprowadzenia chirurgicznej indukcji MCAO u myszy.
Eksperymentalne badania nad udarem mózgu, tradycyjnie kojarzone z dużą zmiennością miar wyników, mogą mieć tendencję do niewystarczającej mocy. Wymogi etyczne i dobrostanowe w połączeniu z kwestiami ekonomicznymi i praktycznymi mogą przyczyniać się do tego, że badania są niedostatecznie zasilane. Zmniejszając zmienność wyników, a tym samym uzyskując bardziej spójne wyniki zmian w całej grupie eksperymentalnej, można przeprowadzić bardziej efektywne obliczenia mocy, a ostatecznym celem badań jest odpowiednia moc.
Podsumowując, ta alternatywna procedura naprawy CCA u myszy powoduje mniejszą zmienność objętości zmiany po eksperymentalnym udarze i umożliwia wymaganie mniejszych grup eksperymentalnych do testowania efektu leczenia, gdy stosuje się odpowiednie obliczenia mocy.

Główną przyczyną udaru mózgu jest ogniskowe niedokrwienie na obszarze tętnicy środkowej mózgu. Tkankowy aktywator plazminogenu (tPA) jest jedynym dostępnym leczeniem farmakologicznym o udowodnionej skuteczności, pomimo licznych badań klinicznych leków ukierunkowanych na udar niedokrwienny1,2. Jednak ze względów bezpieczeństwa i wąskiego okna terapeutycznego (< 4,5 godziny), tylko ~15% wszystkich pacjentów z udarem kwalifikuje się do otrzymania tPA, a wskaźniki rekanalizacji mogą wynosić < 50%3,4.
Powtarzalne i klinicznie istotne modele zwierzęce udaru mózgu są uważane za niezbędne do informowania o rozwoju nowych i potencjalnych metod leczenia udaru mózgu. Jednak ze względu na obawy dotyczące spójności i zmienności wyników z modelami zwierzęcymi, ważne jest, aby udoskonalić istniejące modele in vivo, aby poprawić przełożenie badań przedklinicznych na kliniczne. Brak przełożenia z przedklinicznej skuteczności eksperymentalnej potencjalnych terapii na zastosowanie kliniczne jest ciągłym problemem dla badań nad udarem5. Przyczyny niepowodzenia translacji mogą być wielorakie i mogą być związane na przykład z projektem badania, opóźnieniami w leczeniu, niejednorodnością kliniczną udaru mózgu oraz ograniczeniami zastosowanych modeli zwierzęcych6. Kluczowym wyzwaniem dla badań nad udarem mózgu pozostaje opracowanie bezpiecznych i skutecznych metod leczenia.
Zamknięcie tętnicy środkowej mózgu (MCAO) przez wprowadzenie filamentu śródświetlnego jest najczęściej używanym modelem eksperymentalnego udaru u gryzoni in vivo. Model ten umożliwia przywrócenie przepływu krwi po indukcji niedokrwienia, naśladując zdarzenia zachodzące w ludzkim udarze mózgu7. Jednak, w szczególności u myszy, niejednorodne objętości zmian o różnych odchyleniach standardowych występują, mimo że stosowane są określone protokoły chirurgiczne8,9,10. Typowy jest bimodalny rozkład małych objętości zmian prążkowiowych i dużych objętości zmian prążkowiowo-korowych11. Aby wywołać niedokrwienie, włókno jest zwykle wprowadzane przez nacięcie CCA lub ECA, które następnie pozostają trwale podwiązane12. Trwałe podwiązanie CCA zapobiega przywróceniu przepływu krwi do tętnicy szyjnej wewnętrznej (ICA), a następnie do terytorium MCA. Powoduje to, że reperfuzja jest zależna od dostaw ubocznych w Kręgu Willisa (Krowa). Struktura krowy wykazuje zmienność anatomiczną między poszczególnymi zwierzętami, szczególnie u myszy C57BL/6 - szczepu zwykle używanego w badaniach nad udarem in vivo13. Alternatywna metoda, polegająca na wprowadzaniu włókien przez ECA, pozwala na ciągłą perfuzję przez CCA, ale ta metoda zagraża dopływowi tętnic na terytorium ECA, co wykazano u szczurów ma szkodliwy wpływ na dobrostan zwierzęcia14.
Poleganie na CoW w zakresie dostarczania zabezpieczeń i reperfuzji w ustalonym modelu MCAO może, częściowo, tłumaczyć zmienność objętości zmian po okluzji. Opisujemy alternatywną procedurę chirurgiczną na myszy, w której unika się podwiązania ECA, a nacięcie CCA jest naprawiane, umożliwiając w ten sposób reperfuzję przez CCA, niezależnie od CoW. Wcześniej wykazano, że naprawa nacięcia CCA u szczurów skutkuje udaną reperfuzją za pomocą CCA15. Z powodzeniem zastosowaliśmy to podejście u myszy11 i podajemy tutaj protokół, który skutkuje zmniejszoną zmiennością objętości zmiany, główną miarą wyników stosowaną w eksperymentalnych badaniach nad udarem.
W tym protokole pokazujemy, jak przeprowadzić MCAO poprzez wprowadzenie filamentu do naczynia CCA, a następnie naprawę naczynia CCA, co obejmuje nałożenie podkładki tkankowej i uszczelniacza, aby umożliwić reperfuzję.

<table><tbody><tr><td>Elastyczna pojedyncza sonda światłowodowa 0,7 mm</td><td>Moor Instruments, Wielka Brytania</td><td>P10d</td><td>Używaj z kodem sondy głównej: VP10M200ST</td></tr><tr><td>7-0 monofilament powlekany silikonem</td><td>Doccol, USA</td><td>701956PKRe</td><td>Pozycja zależna od wielkości i wagi zwierzęcia - skorzystaj z wytycznych producenta. Kod produktu w tym miejscu został użyty dla reprezentatywnych wyników pokazanych w artykule.</td></tr><tr><td>Przedkliniczny system MRI 9.4T</td><td>Agilent Technologies, Santa Clara, Kalifornia, USA</td><td>MY11520101</td><td>Wyposażony w cewki gradientowe i RF odpowiednie do obrazowania mózgu myszy</td></tr><tr><td>Sprzęt do monitorowania i bramkowania zwierząt</td><td>SA Instruments, Stony Brook, Nowy Jork, USA</td><td>22124005</td><td>Monitorowanie temperatury i oddychania zgodne z MRI</td></tr><tr>Krajowe Służby Weterynaryjne<td>Bupiwakainy</td><td>, Stoke-on-trent, Wielka Brytania</td><td>512345</td><td>Myszy Marcaine</td></tr><tr><td>C57BL/6 Charles</td><td>River, Oksford, Wielka Brytania</td><td>B6JSIMA49D</td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Norbrook Laboratories</td><td>143658</td><td>Carprieve 5% w/v Roztwór do wstrzykiwań dla małych zwierząt</td></tr><tr><td>4% roztwór do mycia rąk</td><td>VWR International Ltd, Lutterworth, Wielka Brytania MOLN10008780</td><td></td><td>HibiScrub Antybakteryjny środek do mycia rąk, Molnlycke Health Care</td></tr><tr><td>Patyczki kosmetyczne</td><td>Krajowe Służby Weterynaryjne, Stoke-on-trent, Wielka Brytania</td><td>213512</td><td>Każdy plastikowy korpus, końcówka wacika nadaje się do sterylizacji w autoklawie.</td></tr><tr><td>Stereoskop preparacyjny</td><td>Carl Zeiss</td><td>OPMI99</td><td>Resident element wyposażenia. Odpowiedni będzie każdy stereoskop dwuokularowy o powiększeniu x1-x5.</td></tr><tr><td>rozpuszczalne szwy 6-0</td><td>National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK</td><td>9544</td><td>Szwy wchłanialne Ethicon Coated Vicryl 6/0 (kod Ethicon: W9981)</td></tr> <tr><td>Uchwyt sondy Donut</td><td>Moor Instruments, Wielka Brytania</td><td>PHDO</td><td>Uchwyt sondy do myszy, wymagany do użycia z pojedynczą sondą światłowodową, gdy jest używany z laserową maszyną przepływową dopplera.</td></tr><tr><td>kleszcze dumont #5</td><td>World Precision Instruments, Hertfordshire, Wielka Brytania</td><td>500342</td><td></td></tr><tr><td>Uszczelniacz fibrynogenu i trombiny</td><td>Baxter, Berkshire, Wielka Brytania</td><td>1502243</td><td>TISSEEL Gotowe do użycia roztwory do uszczelniacza 2 ml</td></tr><tr><td>żelu</td><td>spożywczego Datesand group, Manchester, Wielka Brytania</td><td>72065022</td><td>Diet Gel Recovery</td></tr><tr><td>Pakiet oprogramowania do wyświetlania i pomiaru obrazu</td><td>3D Slicer</td><td>https://www.slicer.org/</td><td>Wersja 4.0</td></tr><tr><td>Pakiet oprogramowania do wyświetlania obrazu i pomiaru</td><td>NIH, Maryland, USA</td><td>https://imagej.nih.gov/ij/index.html</td><td>NIH/ImageJ</td></tr><tr><td>Monitor LDF</td><td>Moor Instruments, Wielka Brytania</td><td>moorNożyczki VMS-LDF</td><td></td></tr><tr><td>micro vannas</td><td>InterFocus Ltd, Linton, Wielka Brytania</td><td>15000-08</td><td>Jako alternatywę można użyć innych nożyczek sprężynowych microvannas, chociaż wymagane są cienkie końcówki.</td></tr><tr><td>Klips mikronaczyniowy</td><td>World Precision Instruments, Hertfordshire, Wielka Brytania</td><td>15911</td><td>10 G Vessel</td></tr><tr><td>Clip uchwyty na klipsy mikronaczyniowe</td><td>World Precision Instruments, Hertfordshire, Wielka Brytania</td><td>14189</td><td></td></tr><tr><td>Oprogramowanie do akwizycji i analizy MRI</td><td>Agilent Technologies, Santa Clara, Kalifornia, USA</td><td>VnmrJ Wersja 4.2</td><td>Wersja A</td></tr><tr><td>nr 15 skalpel</td><td>Materiały do laboratoriów naukowych, Nottingham, Wielka Brytania</td><td>INS4678</td><td>Sterylny skalpel No15 - numer producenta P305. Inni dostawcy są dostępni.</td></tr><tr><td>Nierozpuszczalny szew 6-0</td><td>Krajowe służby weterynaryjne, Stoke-on-trent, Wielka Brytania</td><td>W529</td><td>Ethicon Mersilk Szwy</td></tr><tr><td>Smar do oczu</td><td>Krajowe służby weterynaryjne, Stoke-on-trent, Wielka Brytania</td><td>847288</td><td>Lacrilube (5100G13)</td></tr><tr><td>Żel do dopasowania optycznego</td><td>Moor Instruments, Wielka Brytania</td><td>PMG</td><td></td></tr><tr><td>Czytnik pulsoksymetrii</td><td>Starr Life Sciences Corp., Oakmont, PA, USA</td><td>MouseOx</td><td>MouseOx - szczur i pulsoksymetr myszy i pulsoksymetr monitor fizjologiczny Do użytku z czujnikiem uda myszy.</td></tr><tr><td>Żel nawadniający</td><td>Datesand group, Manchester, Wielka Brytania</td><td>70015022</td><td>HydroGel</td></tr><tr><td>Małe maszynki do strzyżenia włosów</td><td>vetproductsuk.com</td><td>HS61</td><td>Contura Bezprzewodowe trymery/maszynki do strzyżenia</td></tr><tr><td>Sterylne 0,9 % roztwór NaCl</td><td>VWR International Ltd, Lutterworth, Wielka Brytania</td><td>LOCA3528286</td><td>CHLOREK SODU 0,9% W/V INFUZJA DOŻYLNA BP 500 ML W ECOFLAC&frac12; PLUS</td></tr><tr><td>sterylna szalka Petriego</td><td>VWR International Ltd, Lutterworth, Wielka Brytania</td><td>5168021</td><td>sterylna szalka Petriego 50 mm. Każda marka jest odpowiednia. Wymagana jest minimalna średnica 50 mm.</td></tr><tr><td>Miejscowy klej tkankowy</td><td>World Precision Instruments, Hertfordshire, Wielka Brytania</td><td>503763</td><td>GLUture Miejscowy klej tkankowy</td></tr><tr><td>Wodoodporny superglue</td><td>Loctite</td><td>Loctite Superglue Precision Max</td><td>Dostępne w większości sklepów z narzędziami.</td></tr><tr><td>Chip z białego papieru</td><td>Datesand group, Manchester, Wielka Brytania</td><td>CS1BPB</td><td>Pure-O'Cel</td></tr></tbody></table>

niedrożność tętnicy środkowej mózgu umożliwiająca reperfuzję poprzez wspólną naprawę tętnicy szyjnej u myszy

Middle Cerebral Artery Occlusion Allowing Reperfusion via Common Carotid Artery Repair in Mice

Udar niedokrwienny jest główną przyczyną długotrwałej niepełnosprawności i zgonów dorosłych na całym świecie. Obecnie dostępne metody leczenia są ograniczone, a tylko tkankowy aktywator plazminogenu (tPA) jest zatwierdzonym lekiem ukierunkowanym na udary niedokrwienne. Obecne badania w dziedzinie udaru niedokrwiennego mózgu koncentrują się na lepszym zrozumieniu patofizjologii udaru mózgu w celu opracowania i zbadania nowych celów farmaceutycznych. Wiarygodne eksperymentalne modele udaru mózgu mają kluczowe znaczenie dla postępu potencjalnych metod leczenia. Model niedrożności tętnicy środkowej mózgu (MCAO) jest klinicznie istotny i jest najczęściej stosowanym chirurgicznym modelem udaru niedokrwiennego u gryzoni. Jednak wyniki tego modelu, takie jak objętość zmian, są związane z wysokim poziomem zmienności, szczególnie u myszy. Opisany tutaj alternatywny model MCAO umożliwia reperfuzję tętnicy szyjnej wspólnej (CCA) i zwiększoną perfuzję terytorium tętnicy środkowej mózgu (MCA) przy użyciu podkładki tkankowej z uszczelniaczem na bazie fibrynogenu w celu naprawy naczynia oraz poprawę dobrostanu myszy poprzez unikanie podwiązania tętnicy szyjnej zewnętrznej (ECA). Zmniejsza to zależność od koła Willisa, o którym wiadomo, że jest wysoce zmienny anatomicznie u myszy. Reprezentatywne dane pokazują, że zastosowanie tego alternatywnego podejścia chirurgicznego zmniejsza zmienność objętości zmian między tradycyjnym podejściem MCAO a alternatywnym podejściem opisanym tutaj.

W badaniu wykorzystano łącznie 24 dorosłe samce myszy szczepu C57BL/6 o masie ciała od 24 do 31 g w momencie operacji. Jedno zwierzę padło po zamknięciu tętnicy środkowej mózgu (MCAO), a jedno zostało wykluczone z powodu powikłań chirurgicznych. Przedstawione tutaj dane pochodzą z wcześniej opublikowanej pracy autorów. Zostały one wykorzystane do zilustrowania wpływu naprawy naczynia na wyniki po MCAO.11Wszystkie dane przedstawiono jako średnią ± odchylenie standardowe. Normalność rozkładu danych oceniono statystycznie za pomocą testu normalności D'Agostino-Pearsona. Dane parametryczne porównano za pomocą testu t Studenta t-test (dla dwóch średnich) oraz jednoczynnikową analizę wariancji (ANOVA) z testem Sidaka (dla wielu średnich). Dane nieparametryczne porównano za pomocą testu U Manna-Whitneya. Zmienność danych parametrycznych oceniono za pomocą F-test, a zmienność danych nieparametrycznych oceniono za pomocą testu Levene'a.
Typowo w procedurach MCAO filament zamykający jest wprowadzany do CCA, a ECA jest podwiązywana, aby zapobiec przesunięciu się filamentu do ECA zamiast do ICA. Rezygnacja z podwiązania ECA oraz zastosowanie leków przeciwbólowych wykazały tendencję do zmniejszenia utraty masy ciała 48 h po MCAO w porównaniu z danymi z poprzednich badań przeprowadzonych przez tego samego chirurga dla tego samego czasu MCAO z zastosowaniem podwiązania ECA i bez leków przeciwbólowych, podczas gdy LV wydawała się nie być dotknięta, patrz Rysunek 1.
Myszy poddano 60-minutowej ischemii indukowanej MCAO, po której nastąpiła reperfusja z naprawą naczynia CCA lub z zastosowaniem typowego podejścia z ligacją CCA. Schemat naprawionej CCA ligowanej i nieligowanej przedstawiono na Rysunku 2.
Do potwierdzenia perfuzji przepływu krwi w obszarze MCA podczas MCAO, przed i po naprawie naczynia CCA, wykorzystano laserową dopplerometrię przepływu. Rysunek 3 pokazuje, że 5 min po usunięciu filamentu regionalny mózgowy przepływ krwi (rCBF) uległ znacznemu zwiększeniu w obszarze mózgu zaopatrywanym przez MCA. Perfuzja była utrzymywana aż do momentu naprawy naczynia, a po naprawie naczynia CCA odnotowano wzrost perfuzji w obszarze MCA, co sugeruje, że naprawa CCA umożliwiła zwiększenie perfuzji krwi w obszarze niedokrwiennym w porównaniu do polegania wyłącznie na kręgu Willisa.
Do określenia całkowitej objętości zawału lewej komory (LV) wykorzystano MRI ważone T2, a do określenia rdzenia LV – skany DTI, 48 h po MCAO. Rycina 4A nie wykazuje istotnych różnic w całkowitej objętości ani w rdzeniu LV pomiędzy grupą z procedurą naprawczą a grupą z ligaturą. Jednakże zmienność danych dla całkowitej objętości i rdzenia LV, oceniana za pomocą testu Levene'a dla danych nieparametrycznych lub testu F dla danych parametrycznych, była istotnie mniejsza w grupie z naprawą CCA. Całkowitą objętość LV podzielono na LV korową i podkorową, co przedstawiono na Rycini 4B. Część korowa charakteryzowała się istotnie mniejszą zmiennością w grupie z naprawą CCA, podczas gdy część podkorowa zmiany nie wykazywała różnic pomiędzy dwiema grupami proceduralnymi.
Analiza mocy wykazała, że do wykazania 30% redukcji LV po MCAO przy zastosowaniu naprawy CCA w porównaniu z typową procedurą z podwiązaniem CCA byłoby wymagane mniej zwierząt w grupie zabiegowej, patrz Tabela 1. Do analizy mocy przyjęto założenie o mocy 1-β= 0,8 i poziomie istotności α = 0,05 oraz przewidywaną 30% redukcję LV pomiędzy hipotetyczną grupą kontrolną a grupą badawczą. Ponadto założono równość wariancji między grupami. Tabela 1 przedstawia liczbę zwierząt wymaganych dla grup badawczej i kontrolnej w przypadku zastosowania typowej metody z podwiązaniem CCA lub zaktualizowanej metody naprawy CCA, opisanej w niniejszej pracy. Należy zauważyć, że grupa badawcza odnosi się do hipotetycznej leczonej grupy zwierząt, a grupa kontrolna do hipotetycznej grupy kontrolnej; obie grupy zostaną poddane MCAO.
<img alt="Porównanie masy ciała i objętości zmiany po MCAO w grupie z podwiązaniem ECA oraz bez podwiązania, wykres eksperymentalny." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58191/58191fig1v2.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1: Wpływ łącznego leczenia przeciwbólowego i pominięcia podwiązania ECA na wyniki po MCAO. (A) Masa ciała, przedstawiona jako procent masy przed MCAO, spadła w ciągu pierwszych 2 d po MCAO w obu grupach. W grupie bez podwiązania ECA (leczonej przeciwbólowo, bez podwiązania ECA podczas MCAO) zaobserwowano tendencję do mniejszego spadku masy ciała w drugim dniu po MCAO. (B) Ten panel przedstawia objętość zmiany (mm3) zmierzoną za pomocą standardowego barwienia chlorkiem trifenylotetrazolium (TTC) 48 h po MCAO. Przedstawione dane to średnia ± odchylenie standardowe. ECA podwiązane: n = 17, ECA niepodwiązane: n = 10. Rycina została zmodyfikowana na podstawie pracy Trotman-Lucas et al.11. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58191/58191fig1v2large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Schemat standardowego protokołu i protokołu naprawczego arteriotomii; nacięcie naczynia i wkładka tkankowa z uszczelniaczem." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58191/58191fig2.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rycina 2"> 
Rycina 2: Schemat przedstawiający standardową metodę CCA oraz alternatywną metodę naprawczą CCA po MCAO. (A) Ten schemat przedstawia trwałe podwiązanie CCA przy użyciu nierozpuszczalnych szwów założonych po obu stronach nacięcia CCA, co skutkuje permanentnym podwiązaniem prawej tętnicy szyjnej wspólnej (CCA). (B) Ten schemat przedstawia alternatywną metodę naprawczą CCA. Mała wkładka tkankowa pokryta uszczelniaczem z fibrynogenu i trombiny jest używana do zakrycia nacięcia CCA, uszczelniając je, aby umożliwić pełną perfuzję prawej CCA. Rycina została zmodyfikowana na podstawie pracy Trotman-Lucas et al.11. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58191/58191fig2large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Wykres słupkowy przedstawiający % zmiany sygnału LDF podczas MCAO w porównaniu do stanu po MCAO; CCA podwiązana w porównaniu do naprawionej." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58191/58191fig3.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rycina 3"> 
Rycina 3: Parametry regionalnego przepływu krwi w mózgu (rCBF) po MCAO. rCBF uległ zmianie 5 min po usunięciu filamentu MCAO w obu grupach: z podwiązaną CCA i z naprawioną CCA (po MCAO), w odniesieniu do rCBF mierzonego podczas MCAO. Ten panel przedstawia dane rCBF bezpośrednio przed naprawą naczynia CCA (przed naprawą) i 5 min po naprawie CCA (po naprawie). Istotne wzrosty rCBF widoczne są 5 min po usunięciu filamentu (po MCAO) w obu grupach. Dodatkowy wzrost rCBF widoczny jest po naprawie CCA (po naprawie) w grupie z naprawioną CCA. Nie wykazano różnic w rCBF między 5 min po MCAO a stanem przed naprawą. Przedstawione dane stanowią skrót analizowanych danych z przebiegu czasowego dla kluczowych punktów czasowych, podanych tutaj jako średnia ± odchylenie standardowe. CCA podwiązana: n = 10, CCA naprawiona: n = 10; **P &lt; 0.01, ***P &lt; 0.001, ns: brak istotności statystycznej. Rycina została zmodyfikowana na podstawie pracy Trotman-Lucas et al.11. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58191/58191fig3large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Analiza objętości zmiany, rdzeń T2 i DTI; porównanie CCA naprawionej/podwiązanej; wykres słupkowy, obraz mózgu." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58191/58191fig4.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rycina 4"> 
Rycina 4: Analiza objętości zmiany uzyskana za pomocą technik MRI. (A) Na tym panelu przedstawiono objętość zmiany (LV; mm3) w 48. godzinie po MCAO, całkowita objętość zawału (Total LV) wyznaczona na podstawie obrazów MRI w sekwencji T2 oraz rdzeń zawału (Core LV) wyznaczony na podstawie skanów i analiz DTI. Reprezentatywne obrazy przedstawiają całkowitą objętość zawału z przekroju skanu T2 z nałożoną maską objętości rdzenia zawału z DTI. Zmienność wewnątrz grup została istotnie zredukowana zarówno dla całkowitej objętości zawału (P = 0,015, naprawa CCA: n = 10, podwiązana tętnica szyjna wspólna (CCA): n = 10, F-test) oraz rdzeń LV (P = 0,043, naprawa CCA: n = 9, podwiązana tętnica szyjna wspólna: n = 6, test Levene'a), oceniono za pomocą F-test dla danych parametrycznych lub test Levene'a dla danych nieparametrycznych. (B) Panel ten przedstawia lewą komorę (LV) 48 h po MCAO, na podstawie obrazów MRI ważonych w czasie T2, z podziałem na korowe i podkorowe obszary uszkodzeń. Naprawa CCA znacząco zmniejszyła zmienność danych (P = 0.03, F-test) w korowej części zmiany, jednak nie wykazano wpływu na zmienność danych w części podkorowej zmiany. Naprawa CCA: n = 10, podwiązana tętnica szyjna wspólna (CCA): n = 10. Przedstawione dane stanowią średnią ± odchylenie standardowe. #P &lt; 0.05 (F-test), Proszę podać tekst źródłowy do tłumaczenia.P &lt; 0,05 (test Levene'a). Rysunek został zmodyfikowany na podstawie pracy Trotman-Lucas i inni11. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58191/58191fig4large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody >
		<tr >
			<td >Metoda</td>
			<td >Objętość zmiany 
			(LV; mm3; średnia ± s.d.)</td>
			<td >Moc</td>
			<td >Poziom istotności</td>
			<td >Przewidywana różnica</td>
			<td >Wymagana liczebność grupy</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >CCA podwiązana (metoda tradycyjna)</td>
			<td >94,08 ± 53,79</td>
			<td >0,8</td>
			<td >0,05</td>
			<td >30%</td>
			<td >n = 58</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >CCA naprawiona (nowa metoda)</td>
			<td >51,73 ± 22,78</td>
			<td >0,8</td>
			<td >0,05</td>
			<td >30%</td>
			<td >n = 35</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabela 1: Reprezentatywna analiza mocy porównująca tradycyjne podwiązanie CCA z alternatywną metodą naprawy CCA opisaną w niniejszym materiale. Tabela ta przedstawia analizę mocy przeprowadzoną w celu obliczenia przewidywanej liczebności grup niezbędnej do wykrycia istotnej różnicy w LV pomiędzy grupą kontrolną, grupą z zastosowaniem podejścia tradycyjnego lub alternatywnego (nowego) a grupą badawczą (przewidywaną). Tabela wskazuje liczebność grup wymaganą przy założeniu mocy 0,8, poziomie istotności 0,05 oraz przy założeniu, że przewidywana grupa badawcza wykaże 30% różnicy w LV w porównaniu z grupą kontrolną. W tabeli przedstawiono wyniki dla obu podejść MCAO (podwiązania CCA oraz naprawy CCA), aby ustalić, czy istnieje różnica w liczbie zwierząt wymaganych do uzyskania 30% różnicy w LV. Dla obu metod przyjęto równość wariancji pomiędzy grupą badawczą a grupą kontrolną. Rysunek został zmodyfikowany na podstawie pracy Trotman-Lucas et al.11.

Wewnątrzświateł okluzja włókien środkowej tętnicy mózgowej jest najczęściej używanym modelem in vivo eksperymentalnego udaru mózgu u gryzoni. Wykonuje się tutaj alternatywne podejście chirurgiczne umożliwiające naprawę tętnicy szyjnej wspólnej, które umożliwia reperfuzję tętnicy szyjnej wspólnej i pełną reperfuzję do obszaru tętnicy środkowej mózgu.

Niedrożność tętnicy środkowej mózgu umożliwiająca reperfuzję poprzez wspólną naprawę tętnicy szyjnej u myszy

The ischemic stroke is a major cause of adult long-term disability and death worldwide. The current treatments available are limited, with only tissue ...

Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie udaru eksperymentalnego, takie jak sposób redukcji związanej z tymi modelami i jak poprawić odtwarzalność. Główną zaletą tej techniki jest to, że umożliwia ona reperfuzję przez wspólną tętnicę szyjną, a zatem nie jest zależna od koła Willisa, które może różnić się anatomicznie u zwierząt, a zatem może przyczyniać się do zmienności obserwowanej w pomiarach wyników eksperymentalnych. Wizualna demonstracja tej metody ma kluczowe znaczenie, ponieważ etapy naprawy zbiornika CCA są trudne do nauczenia ze względu na trudności techniczne związane z użyciem szczeliwa w celu zapewnienia, że CCA jest w pełni opatentowany po naprawie.Na początek przygotuj i znieczul mysz zgodnie z protokołem testu. Następnie użyj ostrza skalpela numer 15, aby wykonać 1,5 cm nacięcie w linii środkowej na odsłoniętej szyi brzusznej. Stosując techniki preparowania, delikatnie cofnij gruczoły ślinowe na bok, aby odsłonić tchawicę.Następnie wypreparuj tętnicę szyjną wspólną lub CCA, wolną od otaczającej tkanki i nerwu błędnego. Następnie przełóż dwa małe odcinki nierozpuszczalnego szwu 6-0 poniżej CCA, grzbietowo do CCA i brzusznie do nerwu błędnego. Przyciągnij jeden jedwabny krawat bliżej chirurga i zawiąż go luźno wokół CCA.Następnie luźno zawiąż drugą jedwabną opaskę w kierunku rozwidlenia tętnic szyjnych wewnętrznych i zewnętrznych. Następnie przyłóż klips mikronaczyniowy tuż nad dystalnym opaskiem, upewniając się, że rozwidlenie nie jest zablokowane. Użyj nożyczek do mikrożył, aby zrobić mały otwór w CCA.Włóż mikrofilament pokryty silikonem 7-0 do CCA i przesuń go w kierunku klipsa mikronaczyniowego. Następnie zaciśnij dystalną opaskę, aby zamocować filament na miejscu. I użyj uchwytów na klipsy, aby usunąć klips mikronaczyniowy.Następnie wsuń włókno do tętnicy szyjnej wewnętrznej lub ICA. Gdy główka filamentu przejdzie przez dystalną opaskę, pociągnij ją mocniej, aby zapobiec utracie krwi. Używając dystalnego jedwabnego krawata, podnieś i pociągnij CCA na zewnętrzną stronę ciała myszy i skieruj włókno do zgięcia, obok otworu tętnicy skrzydłowo-podniebiennej lub PPA.Gdy filament znajdzie się na miejscu, zabezpiecz go, mocniej zaciskając dystalną jedwabną opaskę. Pod koniec okresu MCAO wycofaj żarnik, aż biała główka żarnika będzie wyraźnie widoczna. Następnie poluzuj dystalną opaskę CCA na tyle, aby całkowicie wyjąć główkę filamentu z naczynia.Następnie całkowicie wyjmij głowicę filamentu z naczynia. Następnie umieść klips mikronaczyniowy w pozycji poziomej, w kierunku rozwidlenia CCA i obok dystalnego krawata. Następnie umieść kolejny klips poniżej proksymalnego opaski CCA, w kierunku chirurga.Ostrożnie użyj kleszczy Dumont 5, aby usunąć oba jedwabne krawaty. I osusz obszar za pomocą sterylnych wacików. Następnie dodaj roztwory fibrynogenu i trombiny uszczelniającej jeden i drugi do sterylnej szalki Petriego.Za pomocą nożyczek mikrożylnych i techniki rozwarstwienia uzyskaj cienki brzuszny wycinek mięśnia mostkowo-obojczykowo-sutkowego. Następnie, za pomocą kleszczy Dumont 5, weź podkładkę tkankową i wymieszaj ją równomiernie z roztworami fibrynogenu i trombiny. W tym przypadku ważne jest, aby upewnić się, że podkładka tkankowa jest wystarczająco duża, aby zakryć nacięcie CCA.A po zmieszaniu go z dwoma roztworami należy go natychmiast umieścić nad nacięciem, aby zapobiec nadmiernej krzepliwości i słabej przyczepności. Po wymieszaniu między dwoma roztworami wyjmij podkładkę tkankową do nacięcia CCA. Umieść podkładkę tkankową płasko na nacięciu ze średnim naciskiem i otwórz kleszcze.Szybko zdejmij dystalny klips mikronaczyniowy, przytrzymując opuszkę tkankową na miejscu. Następnie powoli zmniejsz nacisk z poduszki tkankowej, umożliwiając przepływ krwi pod obszarem nacięcia. Teraz powoli i delikatnie zwolnij nacisk z bliższego zacisku mikronaczyniowego, a następnie całkowicie usuń.Usunięcie górnego klipsa pozwala na aktywację szczeliwa przez niewielką ilość krwi. Równomierne zwalnianie dystalnego klipsa umożliwia stopniowy wzrost ciśnienia w miejscu nacięcia, co powoduje dalszą aktywację i pomaga zapobiec nieudanej naprawie. Na koniec, po uszczelnieniu naczynia, zszyj ranę rozpuszczalnymi szwami 6-0.W tym protokole niedrożność tętnicy środkowej mózgu (MCAO) przeprowadzono na 24 dorosłych samcach myszy. Unikanie podwiązania ECA i dodanie analgezji wykazało tendencję do zmniejszania utraty masy ciała po 48 godzinach od MCAO. Pięć minut po usunięciu filamentu regionalny przepływ krwi w mózgu znacznie się zwiększył w obszarze mózgu MCA.Perfuzja utrzymywała się aż do naprawy naczynia, ze wzrostem perfuzji do terytorium MCA, po naprawie naczynia CCA. Sugeruje to, że naprawa CCA pozwoliła na zwiększoną perfuzję krwi do obszaru niedokrwiennego, w porównaniu z poleganiem na samym okręgu Willisa. Do określenia całkowitej LV użyto rezonansu magnetycznego zależnego od T2, a skanów DTI użyto do określenia LV rdzenia po 48 godzinach od MCAO.Nie było istotnej różnicy między tymi dwiema grupami. Co ciekawe, zmienność całkowitej i rdzeniowej lewej komory była znacznie zmniejszona w grupie naprawczej CCA. Nasza analiza wykazała, że mniejsza liczba zwierząt w grupie leczonej byłaby potrzebna do wykazania 30% zmniejszenia LV po MCAO, przy użyciu naprawy CCA, w porównaniu z typową procedurą podwiązania CCA.Podczas wykonywania tej procedury należy pamiętać, aby upewnić się, że opakowanie chusteczki jest wystarczająco duże, aby pokryć nacięcie CCA. Ważna jest również prędkość, aby zapobiec nadmiernej koagulacji szczeliwa przed umieszczeniem podkładki na CCA.

middle-cerebral-artery-occlusion-allowing-reperfusion-via-common

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Włóknista okluzja tętnicy środkowej mózgu jest powszechnie stosowanym modelem badania udaru niedokrwiennego u myszy.

Modelowanie udaru u myszy – zator tętnicy środkowej mózgu z wykorzystaniem modelu filamentowego

Model intraluminalnego zamknięcia tętnicy środkowej mózgu (MCAO) jest najczęściej stosowanym modelem wśród eksperymentalnych modeli udaru niedokrwiennego. W niniejszym materiale szczegółowo zaprezentujemy cały model z wykorzystaniem laserowej flowmetrii dopplerowskiej oraz przedstawimy reprezentatywne wyniki.

Model wewnątrznaczyniowego zamknięcia tętnicy środkowej mózgu (MCAO) w udarze niedokrwiennym u myszy z prowadzeniem za pomocą laserowej dopplerometrii przepływu

W niniejszej pracy przedstawiono model intraluminalnego zamknięcia tętnicy środkowej mózgu u myszy. Zakres zawału mózgu oceniano za pomocą skali neurologicznej oraz barwienia fioletem krezylowym, który stanowi alternatywę dla barwienia TTC, oferując znaczącą zaletę w postaci możliwości równoległego badania wielu interesujących markerów.

Model mysi wewnątrzluminalnego MCAO: ocena zawału mózgu za pomocą barwienia fioletem krezylu

Ten film przedstawia procedurę wykonywania trwałej dystalnej niedrożności tętnicy środkowej mózgu lub MCAO z tętnicą szyjną wspólną lub podwiązaniem CCA u starszych szczurów w celu modelowania udaru niedokrwiennego. Blokuje to przepływ krwi do mózgu, prowadząc do śmierci neuronów i generowania modelu do badania mechanizmów udaru i potencjalnych metod leczenia.

Wywoływanie niedokrwienia poprzez niedrożność środkowej części mózgu i tętnicy szyjnej wspólnej w modelu szczurzym

Aby zrozumieć patofizjologię udaru, ważne jest korzystanie z wiarygodnych modeli. W artykule opisano jeden z najczęściej stosowanych modeli udaru u myszy, określany jako model niedrożności tętnicy środkowej mózgu (MCAo) (określany również jako model włókna śródświetlnego lub szewu) z reperfuzją.

Podejście chirurgiczne do niedrożności tętnicy środkowej mózgu i udaru wywołanego reperfuzją u myszy

Opisujemy mysi model udaru wywołanego przez zamknięcie środkowej tętnicy mózgowej za pomocą szwu pokrytego silikonem. Protokół może być stosowany w celu wywołania trwałej okluzji lub tymczasowego niedokrwienia, a następnie reperfuzji.

Indukcja udaru niedokrwiennego i reperfuzji niedokrwiennej u myszy przy użyciu techniki niedrożności tętnicy środkowej i wizualizacji obszaru zawału

Mysi model niedokrwienia i reperfuzji mózgu został stworzony w celu zbadania patofizjologii udaru. Podwiązujemy dystalnie prawą środkową tętnicę mózgową i prawą tętnicę szyjną wspólną i przywracamy przepływ krwi po 10 lub 40 minutach niedokrwienia.

Mysi model zamknięcia dwóch naczyń niedokrwienia mózgu-reperfuzji

Protokół ma na celu dostarczenie metod dla encefalomiozyangiozy - przeszczepu płata mięśnia skroniowego naczynia krwiotwórczego na powierzchni niedokrwionej tkanki mózgowej - do leczenia ostrego udaru niedokrwiennego bez Moyamoya. Skuteczność tego podejścia w zwiększaniu angiogenezy ocenia się przy użyciu przejściowego modelu niedrożności tętnicy środkowej mózgu u myszy.

Model leczenia encefalomiozyangiozy po udarze wywołanym niedrożnością środkowej tętnicy mózgowej u myszy

Ten protokół opisuje model przejściowego ogniskowego niedokrwienia mózgu u myszy poprzez śródświetlne zamknięcie środkowej tętnicy mózgowej. Dodatkowo przedstawiono przykłady oceny wyników z wykorzystaniem rezonansu magnetycznego i testów behawioralnych.

Przejściowy model niedrożności tętnicy środkowej mózgu

Ten protokół przedstawia przewodnik krok po kroku dla badaczy, jak przeprowadzić procedurę zamknięcia tętnicy środkowej mózgu na myszach przy użyciu zmodyfikowanej metody Longa tętnicy szyjnej zewnętrznej. Modyfikacje przedstawione w artykule mają na celu zwiększenie dokładności niedrożności tętnicy środkowej mózgu i zapewnienie pełnej reperfuzji.

Optymalizacja metody zamykania tętnic środkowych Longa w celu uzyskania pełnej reperfuzji

Ten protokół opisuje proces przygotowania do reperfuzji niedrożności tętnicy środkowej mózgu przez tętnicę szyjną wspólną.

Zmodyfikowany model preparatu do reperfuzji niedrożności tętnicy środkowej mózgu

Poznaj technikę naprawy tętnicy szyjnej wspólnej u myszy, która umożliwia reperfuzję tętnicy środkowej mózgu. Metoda zwiększa przepływ krwi i redukuje zmienność wyników w modelach udaru.

Niedrożność tętnicy środkowej mózgu umożliwiająca reperfuzję poprzez wspólną naprawę tętnicy szyjnej u myszy

Przeglądaj więcej filmów