Niedrożność tętnicy środkowej mózgu umożliwiająca reperfuzję poprzez wspólną naprawę tętnicy szyjnej u myszy

Wewnątrzświateł okluzja włókien środkowej tętnicy mózgowej jest najczęściej używanym modelem in vivo eksperymentalnego udaru mózgu u gryzoni. Wykonuje się tutaj alternatywne podejście chirurgiczne umożliwiające naprawę tętnicy szyjnej wspólnej, które umożliwia reperfuzję tętnicy szyjnej wspólnej i pełną reperfuzję do obszaru tętnicy środkowej mózgu.

Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie udaru eksperymentalnego, takie jak sposób redukcji związanej z tymi modelami i jak poprawić odtwarzalność. Główną zaletą tej techniki jest to, że umożliwia ona reperfuzję przez wspólną tętnicę szyjną, a zatem nie jest zależna od koła Willisa, które może różnić się anatomicznie u zwierząt, a zatem może przyczyniać się do zmienności obserwowanej w pomiarach wyników eksperymentalnych. Wizualna demonstracja tej metody ma kluczowe znaczenie, ponieważ etapy naprawy zbiornika CCA są trudne do nauczenia ze względu na trudności techniczne związane z użyciem szczeliwa w celu zapewnienia, że CCA jest w pełni opatentowany po naprawie.

Na początek przygotuj i znieczul mysz zgodnie z protokołem testu. Następnie użyj ostrza skalpela numer 15, aby wykonać 1,5 cm nacięcie w linii środkowej na odsłoniętej szyi brzusznej. Stosując techniki preparowania, delikatnie cofnij gruczoły ślinowe na bok, aby odsłonić tchawicę.

Następnie wypreparuj tętnicę szyjną wspólną lub CCA, wolną od otaczającej tkanki i nerwu błędnego. Następnie przełóż dwa małe odcinki nierozpuszczalnego szwu 6-0 poniżej CCA, grzbietowo do CCA i brzusznie do nerwu błędnego. Przyciągnij jeden jedwabny krawat bliżej chirurga i zawiąż go luźno wokół CCA.

Następnie luźno zawiąż drugą jedwabną opaskę w kierunku rozwidlenia tętnic szyjnych wewnętrznych i zewnętrznych. Następnie przyłóż klips mikronaczyniowy tuż nad dystalnym opaskiem, upewniając się, że rozwidlenie nie jest zablokowane. Użyj nożyczek do mikrożył, aby zrobić mały otwór w CCA.

Włóż mikrofilament pokryty silikonem 7-0 do CCA i przesuń go w kierunku klipsa mikronaczyniowego. Następnie zaciśnij dystalną opaskę, aby zamocować filament na miejscu. I użyj uchwytów na klipsy, aby usunąć klips mikronaczyniowy.

Następnie wsuń włókno do tętnicy szyjnej wewnętrznej lub ICA. Gdy główka filamentu przejdzie przez dystalną opaskę, pociągnij ją mocniej, aby zapobiec utracie krwi. Używając dystalnego jedwabnego krawata, podnieś i pociągnij CCA na zewnętrzną stronę ciała myszy i skieruj włókno do zgięcia, obok otworu tętnicy skrzydłowo-podniebiennej lub PPA.

Gdy filament znajdzie się na miejscu, zabezpiecz go, mocniej zaciskając dystalną jedwabną opaskę. Pod koniec okresu MCAO wycofaj żarnik, aż biała główka żarnika będzie wyraźnie widoczna. Następnie poluzuj dystalną opaskę CCA na tyle, aby całkowicie wyjąć główkę filamentu z naczynia.

Następnie całkowicie wyjmij głowicę filamentu z naczynia. Następnie umieść klips mikronaczyniowy w pozycji poziomej, w kierunku rozwidlenia CCA i obok dystalnego krawata. Następnie umieść kolejny klips poniżej proksymalnego opaski CCA, w kierunku chirurga.

Ostrożnie użyj kleszczy Dumont 5, aby usunąć oba jedwabne krawaty. I osusz obszar za pomocą sterylnych wacików. Następnie dodaj roztwory fibrynogenu i trombiny uszczelniającej jeden i drugi do sterylnej szalki Petriego.

Za pomocą nożyczek mikrożylnych i techniki rozwarstwienia uzyskaj cienki brzuszny wycinek mięśnia mostkowo-obojczykowo-sutkowego. Następnie, za pomocą kleszczy Dumont 5, weź podkładkę tkankową i wymieszaj ją równomiernie z roztworami fibrynogenu i trombiny. W tym przypadku ważne jest, aby upewnić się, że podkładka tkankowa jest wystarczająco duża, aby zakryć nacięcie CCA.

A po zmieszaniu go z dwoma roztworami należy go natychmiast umieścić nad nacięciem, aby zapobiec nadmiernej krzepliwości i słabej przyczepności. Po wymieszaniu między dwoma roztworami wyjmij podkładkę tkankową do nacięcia CCA. Umieść podkładkę tkankową płasko na nacięciu ze średnim naciskiem i otwórz kleszcze.

Szybko zdejmij dystalny klips mikronaczyniowy, przytrzymując opuszkę tkankową na miejscu. Następnie powoli zmniejsz nacisk z poduszki tkankowej, umożliwiając przepływ krwi pod obszarem nacięcia. Teraz powoli i delikatnie zwolnij nacisk z bliższego zacisku mikronaczyniowego, a następnie całkowicie usuń.

Usunięcie górnego klipsa pozwala na aktywację szczeliwa przez niewielką ilość krwi. Równomierne zwalnianie dystalnego klipsa umożliwia stopniowy wzrost ciśnienia w miejscu nacięcia, co powoduje dalszą aktywację i pomaga zapobiec nieudanej naprawie. Na koniec, po uszczelnieniu naczynia, zszyj ranę rozpuszczalnymi szwami 6-0.

W tym protokole niedrożność tętnicy środkowej mózgu (MCAO) przeprowadzono na 24 dorosłych samcach myszy. Unikanie podwiązania ECA i dodanie analgezji wykazało tendencję do zmniejszania utraty masy ciała po 48 godzinach od MCAO. Pięć minut po usunięciu filamentu regionalny przepływ krwi w mózgu znacznie się zwiększył w obszarze mózgu MCA.

Perfuzja utrzymywała się aż do naprawy naczynia, ze wzrostem perfuzji do terytorium MCA, po naprawie naczynia CCA. Sugeruje to, że naprawa CCA pozwoliła na zwiększoną perfuzję krwi do obszaru niedokrwiennego, w porównaniu z poleganiem na samym okręgu Willisa. Do określenia całkowitej LV użyto rezonansu magnetycznego zależnego od T2, a skanów DTI użyto do określenia LV rdzenia po 48 godzinach od MCAO.

Nie było istotnej różnicy między tymi dwiema grupami. Co ciekawe, zmienność całkowitej i rdzeniowej lewej komory była znacznie zmniejszona w grupie naprawczej CCA. Nasza analiza wykazała, że mniejsza liczba zwierząt w grupie leczonej byłaby potrzebna do wykazania 30% zmniejszenia LV po MCAO, przy użyciu naprawy CCA, w porównaniu z typową procedurą podwiązania CCA.

Podczas wykonywania tej procedury należy pamiętać, aby upewnić się, że opakowanie chusteczki jest wystarczająco duże, aby pokryć nacięcie CCA. Ważna jest również prędkość, aby zapobiec nadmiernej koagulacji szczeliwa przed umieszczeniem podkładki na CCA.