Test komórkowy oparty na reporterze do monitorowania wydajności splicingu

Protokół ten opisuje komórkowy test do monitorowania wydajności łączenia przy użyciu elastycznego reportera zarządzającego. Ten test reporterowy może być wykorzystany do badania skutków mutacji związanych z chorobą w miejscach Exxon lub splicingu oraz do projektowania terapii, w szczególności cząstek jednocząsteczkowych, w celu poprawy rozpoznawania zmutowanych miejsc splicingu w pięciu punktach. Pasaż w komórkach Hela odsysa zużytą pożywkę i inkubuje komórki z trzema mililitrami 0,2 5% tripów zawierających jeden milimolowy EDTA, w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez trzy minuty.

Po inkubacji w siedmiu mililitrach świeżego DMEM i przenieś zawiesinę komórek do 10 mililitrowej probówki. Odwirować komórki. Następnie ponownie zawieś osad komórkowy w 10 mililitrach świeżego DMEM i umieść komórki na nowym naczyniu do hodowli tkankowej przy 20% konfluencji, w celu przejściowej transfekcji.