Name: Hodowla i obrazowanie ludzkich organoidów nabłonkowych nosa (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-12-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 20 s
Description: Poznaj metodologię hodowli i obrazowania ludzkich organoidów nabłonkowych nosa do badań nad mukowiscydozą. Model HNE umożliwia ocenę aktywności CFTR i transportu jonów w epiteliach.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Z wdzięcznością dziękujemy za wkład wszystkich uczestników, którzy przekazali biopsje szczoteczką HNE w celu opracowania tego protokołu. Dziękujemy Latonie Kersh i pracownikom Children's Research Unit za koordynację rekrutacji ochotników do badania i pobieranie próbek. Dziękujemy Lily Deng, Johnathanowi Baileyowi i Stephenowi Mackayowi, byłym stażystom w naszym laboratorium, za pomoc techniczną. Dziękujemy Zhong Liu i Rui Zhao za ich pomoc techniczną. Steven M. Rowe, dyrektor Centrum Badań nad Mukowiscydozą w UAB, zapewnia przywództwo i zasoby, bez których ta praca nie byłaby możliwa. Chcielibyśmy również podziękować Sarze Guadianie z firmy Biotek za pomoc w szkoleniu instrumentów, Robertowi Grabskiemu za pomoc w zakresie mikroskopii konfokalnej w Zakładzie Obrazowania Wysokorozdzielczego UAB oraz Dezhi Wang za pomoc histologiczną w Centrum Histologii UAB. Prace te były wspierane przez National Institutes of Health (NIH). Grant K23HL143167 (dla JSG), Grant Fundacji Mukowiscydozy (CFF) GUIMBE18A0-Q (dla JSG), Centrum Mukowiscydozy im. Gregory'ego Fleminga Jamesa [NIH Grants R35HL135816 i DK072482 oraz CFF University of Alabama at Birmingham (UAB) Research and Development Program (Rowe19RO)] oraz Centrum Nauk Klinicznych i Translacyjnych UAB (NIH Grant UL1TR001417).

<ol><li>Brewington, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brushed+nasal+epithelial+cells+are+a+surrogate+for+bronchial+epithelial+CFTR+studies%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Brushed nasal epithelial cells are a surrogate for bronchial epithelial CFTR studies.</a> JCI Insight. 3 (13), (2018).</li>
<li>Brewington, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+human+nasal+epithelial+cell+spheroids+for+individualized+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Generation of human nasal epithelial cell spheroids for individualized cystic fibrosis transmembrane conductance regulator study.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (134), e57492(2018).</li>
<li>Brewington, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+CFTR+function+and+modulation+in+primary+human+nasal+cell+spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cystic+Fibrosis%22%5BJournal%5D)">Detection of CFTR function and modulation in primary human nasal cell spheroids.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 17 (1), 26-33 (2017).</li>
<li>Bridges, M. A., Walker, D. C., Davidson, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystic+fibrosis+and+control+nasal+epithelial+cells+harvested+by+a+brushing+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cellular+%26+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Cystic fibrosis and control nasal epithelial cells harvested by a brushing procedure.</a> In Vitro Cellular & Developmental Biology. 27 (9), 684-686 (1991).</li>
<li>Bridges, M. A., Walker, D. C., Harris, R. A., Wilson, B. R., Davidson, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cultured+human+nasal+epithelial+multicellular+spheroids%3A+polar+cyst-like+model+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry+and+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Cultured human nasal epithelial multicellular spheroids: polar cyst-like model tissues.</a> Biochemistry and Cell Biology. 69 (2-3), 102-108 (1991).</li>
<li>Collie, G., Buchwald, M., Harper, P., Riordan, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+sweat+gland+epithelial+cells+from+normal+individuals+and+patients+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cellular+%26+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Culture of sweat gland epithelial cells from normal individuals and patients with cystic fibrosis.</a> In Vitro Cellular & Developmental Biology. 21 (10), 597-602 (1985).</li>
<li>Conger, B. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+%28CFTR%29+and+ciliary+beat+frequency+activation+by+the+CFTR+Modulators+Genistein%2C+VRT-532%2C+and+UCCF-152+in+primary+sinonasal+epithelial+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Otolaryngology-Head+%26+Neck+Surgery%22%5BJournal%5D)">Comparison of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) and ciliary beat frequency activation by the CFTR Modulators Genistein, VRT-532, and UCCF-152 in primary sinonasal epithelial cultures.</a> JAMA Otolaryngology-Head & Neck Surgery. 139 (8), 822-827 (2013).</li>
<li>de Courcey, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+primary+human+nasal+epithelial+cell+cultures+for+the+study+of+cystic+fibrosis+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">Development of primary human nasal epithelial cell cultures for the study of cystic fibrosis pathophysiology.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 303 (11), 1173-1179 (2012).</li>
<li>Gruenert, D. C., Basbaum, C. B., Widdicombe, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+culture+of+normal+and+cystic+fibrosis+epithelial+cells+grown+under+serum-free+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cellular+%26+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Long-term culture of normal and cystic fibrosis epithelial cells grown under serum-free conditions.</a> In Vitro Cellular & Developmental Biology. 26 (4), 411-418 (1990).</li>
<li>Mosler, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feasibility+of+nasal+epithelial+brushing+for+the+study+of+airway+epithelial+functions+in+CF+infants%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cystic+Fibrosis%22%5BJournal%5D)">Feasibility of nasal epithelial brushing for the study of airway epithelial functions in CF infants.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 7 (1), 44-53 (2008).</li>
<li>Anderson, J. D., Liu, Z., Odom, L. V., Kersh, L., Guimbellot, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CFTR+function+and+clinical+response+to+modulators+parallel+nasal+epithelial+organoid+swelling%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Physiology+-+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">CFTR function and clinical response to modulators parallel nasal epithelial organoid swelling.</a> The American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 321 (1), 119-129 (2021).</li>
<li>Guimbellot, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasospheroids+permit+measurements+of+CFTR-dependent+fluid+transport%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Nasospheroids permit measurements of CFTR-dependent fluid transport.</a> JCI Insight. 2 (22), (2017).</li>
<li>Liu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+nasal+epithelial+organoids+for+therapeutic+development+in+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Human nasal epithelial organoids for therapeutic development in cystic fibrosis.</a> Genes (Basel). 11 (6), (2020).</li>
<li>Muller, L., Brighton, L. E., Carson, J. L., Fischer, W. A., Jaspers, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culturing+of+human+nasal+epithelial+cells+at+the+air+liquid+interface%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Culturing of human nasal epithelial cells at the air liquid interface.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. , (2013).</li>
<li>Dekkers, J. F., vander Ent, C. K., Beekman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+opportunities+for+CFTR-targeting+drug+development+using+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Rare+Diseases%22%5BJournal%5D)">Novel opportunities for CFTR-targeting drug development using organoids.</a> Rare Diseases. 1, 27112(2013).</li>
<li>Dekkers, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functional+CFTR+assay+using+primary+cystic+fibrosis+intestinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">A functional CFTR assay using primary cystic fibrosis intestinal organoids.</a> Nature Medicine. 19 (7), 939-945 (2013).</li>
<li>Okiyoneda, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism-based+corrector+combination+restores+DeltaF508-CFTR+folding+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Mechanism-based corrector combination restores DeltaF508-CFTR folding and function.</a> Nature Chemical Biology. 9 (7), 444-454 (2013).</li>
<li>Schwank, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+repair+of+CFTR+by+CRISPR%2FCas9+in+intestinal+stem+cell+organoids+of+cystic+fibrosis+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Functional repair of CFTR by CRISPR/Cas9 in intestinal stem cell organoids of cystic fibrosis patients.</a> Cell Stem Cell. 13 (6), 653-658 (2013).</li>
<li>Geurts, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-based+adenine+editors+correct+nonsense+mutations+in+a+cystic+fibrosis+organoid+biobank%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">CRISPR-based adenine editors correct nonsense mutations in a cystic fibrosis organoid biobank.</a> Cell Stem Cell. 26 (4), 503-510 (2020).</li>
<li>Bove, P. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breaking+the+in+vitro+alveolar+type+II+cell+proliferation+barrier+while+retaining+ion+transport+properties%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+Cell+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Breaking the in vitro alveolar type II cell proliferation barrier while retaining ion transport properties.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 50 (4), 767-776 (2014).</li>
<li>Chapman, S., Liu, X., Meyers, C., Schlegel, R., McBride, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+keratinocytes+are+efficiently+immortalized+by+a+Rho+kinase+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Human keratinocytes are efficiently immortalized by a Rho kinase inhibitor.</a> Journal of Clinical Investigation. 120 (7), 2619-2626 (2010).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ROCK+inhibitor+and+feeder+cells+induce+the+conditional+reprogramming+of+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">ROCK inhibitor and feeder cells induce the conditional reprogramming of epithelial cells.</a> The American Journal of Pathology. 180 (2), 599-607 (2012).</li>
<li>Palechor-Ceron, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiation+induces+diffusible+feeder+cell+factor%28s%29+that+cooperate+with+ROCK+inhibitor+to+conditionally+reprogram+and+immortalize+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Radiation induces diffusible feeder cell factor(s) that cooperate with ROCK inhibitor to conditionally reprogram and immortalize epithelial cells.</a> The American Journal of Pathology. 183 (6), 1862-1870 (2013).</li>
<li>Scudieri, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ionocytes+and+CFTR+chloride+channel+expression+in+normal+and+cystic+fibrosis+nasal+and+bronchial+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Ionocytes and CFTR chloride channel expression in normal and cystic fibrosis nasal and bronchial epithelial cells.</a> Cells. 9 (9), (2020).</li>
<li>Marthin, J. K., Stevens, E. M., Larsen, L. A., Christensen, S. T., Nielsen, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-specific+three-dimensional+explant+spheroids+derived+from+human+nasal+airway+epithelium%3A+a+simple+methodological+approach+for+ex+vivo+studies+of+primary+ciliary+dyskinesia%5BTitle%5D)+AND+%22Cilia%22%5BJournal%5D)">Patient-specific three-dimensional explant spheroids derived from human nasal airway epithelium: a simple methodological approach for ex vivo studies of primary ciliary dyskinesia.</a> Cilia. 6, 3(2017).</li>
<li>Blouquit, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion+and+fluid+transport+properties+of+small+airways+in+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+Cell+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Ion and fluid transport properties of small airways in cystic fibrosis.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 174 (3), 299-305 (2006).</li>
<li>Birket, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+therapy+with+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+modulators+augment+the+airway+functional+microanatomy%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Physiology+-+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Combination therapy with cystic fibrosis transmembrane conductance regulator modulators augment the airway functional microanatomy.</a> The American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 310 (10), 928-939 (2016).</li>
<li>Birket, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functional+anatomic+defect+of+the+cystic+fibrosis+airway%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">A functional anatomic defect of the cystic fibrosis airway.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 190 (4), 421-432 (2014).</li>
<li>Chu, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Particle-tracking+microrheology+using+micro-optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Particle-tracking microrheology using micro-optical coherence tomography.</a> Biophysical Journal. 111 (5), 1053-1063 (2016).</li>
<li>Chu, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((et+al.+In+vivo+imaging+of+airway+cilia+and+mucus+clearance+with+micro-optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">et al. In vivo imaging of airway cilia and mucus clearance with micro-optical coherence tomography.</a> Biomedical Optics Express. 7 (7), 2494-2505 (2016).</li>
<li>Liu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+quantitative+study+of+airway+functional+microanatomy+using+micro-optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Method for quantitative study of airway functional microanatomy using micro-optical coherence tomography.</a> PLoS One. 8 (1), 54473(2013).</li>
<li>Tuggle, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+defects+in+ion+transport+and+tissue+development+in+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+%28CFTR%29-knockout+rats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Characterization of defects in ion transport and tissue development in cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-knockout rats.</a> PLoS One. 9 (3), 91253(2014).</li>
<li>McCravy, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Personalised+medicine+for+non-classic+cystic+fibrosis+resulting+from+rare+CFTR+mutations%5BTitle%5D)+AND+%22European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">Personalised medicine for non-classic cystic fibrosis resulting from rare CFTR mutations.</a> European Respiratory Journal. 56 (1), 2000062(2020).</li>
<li>Mutyam, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+benefit+observed+with+the+CFTR+potentiator%2C+ivacaftor%2C+in+a+CF+patient+homozygous+for+the+W1282X+CFTR+nonsense+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cystic+Fibrosis%22%5BJournal%5D)">Therapeutic benefit observed with the CFTR potentiator, ivacaftor, in a CF patient homozygous for the W1282X CFTR nonsense mutation.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 16 (1), 24-29 (2017).</li>
<li>Corning Inc. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22CORNING+CELL-TAK+CELL+AND+TISSUE+ADHESIVE%22">CORNING CELL-TAK CELL AND TISSUE ADHESIVE</a>. , Discovery Labware, Inc. Bedford, MA. (2013).</li>
<li>Anderson, J. D., Liu, Z., Odom, L. V., Kersh, L., Guimbellot, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CFTR+function+and+clinical+response+to+modulators+parallel+nasal+epithelial+organoid+swelling%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Physiology+-+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">CFTR function and clinical response to modulators parallel nasal epithelial organoid swelling.</a> The American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 321 (1), 119-129 (2021).</li>
<li>Biotek Instruments, Incorporated. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Lionheart+FX+Live+Cell+Imager+Operator%27s+Manual%22">Lionheart FX Live Cell Imager Operator's Manual</a>. , (2016).</li>
<li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIH+Image+to+ImageJ%3A+25+years+of+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 671-675 (2012).</li>
<li>Simmonds, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+it+cystic+fibrosis%3F+The+challenges+of+diagnosing+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Paediatric+Respiratory+Reviews%22%5BJournal%5D)">Is it cystic fibrosis? The challenges of diagnosing cystic fibrosis.</a> Paediatric Respiratory Reviews. 31, 6-8 (2019).</li>
<li>McGarry, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+and+in+vitro+ivacaftor+response+in+cystic+fibrosis+patients+with+residual+CFTR+function%3A+N-of-1+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Pulmonology%22%5BJournal%5D)">In vivo and in vitro ivacaftor response in cystic fibrosis patients with residual CFTR function: N-of-1 studies.</a> Pediatric Pulmonology. 52 (4), 472-479 (2017).</li>
<li>Garratt, L. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determinants+of+culture+success+in+an+airway+epithelium+sampling+program+of+young+children+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Lung+Research%22%5BJournal%5D)">Determinants of culture success in an airway epithelium sampling program of young children with cystic fibrosis.</a> Experimental Lung Research. 40 (9), 447-459 (2014).</li>
</ol>

JSG jest wymieniony jako wynalazca w zgłoszeniu patentowym 20170242033 z Uniwersytetu Północnej Karoliny, które opisuje podobny model. Kiedy licencjonowana technologia od UNC generuje tantiemy, wynalazcy otrzymują część dochodów. W przeciwnym razie autorzy deklarują brak konfliktu interesów. Fundatorzy nie odgrywali żadnej roli w projektowaniu badania, w gromadzeniu, analizach lub interpretacji danych, w pisaniu manuskryptu ani w podejmowaniu decyzji o publikacji wyników.

Niniejszy manuskrypt zawiera szczegółowe metodologie kompleksowego obrazowania na żywo i utrwalonego organoidów nabłonka dróg oddechowych pochodzących z biopsji szczoteczki HNE. Opisuje testy funkcjonalne, które mogą określić aktywność CFTR u danej osoby. HNE zapewniają minimalnie inwazyjną, pierwotną tkankę do różnych zastosowań. Oferowane tu techniki ekspansji mogą być wykorzystywane do modelowania chorób dróg oddechowych, w tym organoidów. Organoidy mogą być wykorzystywane do precyzyjnych podejść terapeutycznych i mon...

Wprowadzenie do techniki 
Testy oparte na hodowlach ex vivo są coraz częściej wykorzystywanym narzędziem w medycynie precyzyjnej i badaniu patofizjologii chorób. Pierwotna hodowla komórek ludzkiego nabłonka nosa (HNE) została wykorzystana w licznych badaniach mukowiscydozy1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13, choroba dziedziczona autosomalnie recesywnie, która wpływa na funkcję komórek nabłonkowych w wielu narządach. Posiew HNE stanowi odnawialne źródło nabłonka dróg oddechowych, które można uzyskać prospektywnie i podsumowuje właściwości elektrofizjologiczne i biochemiczne w celu zbadania aktywności transbłonowego regulatora przewodnictwa (CFTR) mukowiscydozy. Próbki komórek HNE można pobierać przy minimalnych skutkach ubocznych14, podobnie jak w przypadku popularnych wirusowych wymazów z dróg oddechowych. Niedawno opublikowano pracę badawczą opisującą model badania mukowiscydozy uzyskany z biopsji szczoteczki HNE11,13. Chociaż podobnie jak w przypadku innych modeli wykorzystujących podstawowy HNE2,3 i tkanki jelitowej15,16,17,18,19, szczegółowa charakterystyka różnicowania i obrazowania tego modelu jest opisana tutaj do wykorzystania w badaniach nad mukowiscydozą i jako pomoc w badaniach nad innymi chorobami dróg oddechowych13. Model organoidu nie jest nieograniczony, jak unieśmiertelnione linie komórkowe, ale może być rozszerzony poprzez warunkowe przeprogramowanie (przy użyciu napromieniowanych i inaktywowanych fibroblastów zasilających i inhibitorów kinazy Rho) do stanu bardziej przypominającego komórki macierzyste20,21,22,23. Przetwarzanie biopsji szczoteczki HNE przy użyciu tej metody pozwala uzyskać dużą liczbę komórek nabłonkowych do wykorzystania w wielu zastosowaniach przy wyższej przepustowości, przy jednoczesnym zachowaniu zdolności do pełnego różnicowania. Chociaż protokół ten został opracowany przy użyciu komórek zasilających, inne metodologie mogą być stosowane przez badaczy, którzy chcą uniknąć technologii ogniw zasilających14,24.
Znaczenie tej techniki dla biologii pulmonologicznej 
Znaczące badanie poświęcono zrozumieniu, w jaki sposób brak regularnego, funkcjonującego CFTR w błonie komórkowej komórek nabłonkowych powoduje dysfunkcję płuc, trzustki, wątroby, jelit lub innych tkanek. Dysfunkcyjny transport jonów nabłonkowych, szczególnie chlorków i wodorowęglanów, powoduje zmniejszenie objętości płynów wyściełających nabłonek i zmiany w wydzielinie śluzowej, co prowadzi do zastoju i niedrożności błony śluzowej. W innych chorobach dróg oddechowych, takich jak pierwotna dyskineza rzęsek, zmieniony ruch rzęsek upośledza klirens śluzowo-rzęskowy i prowadzi do zastoju śluzu i niedrożności25. W związku z tym obecny model organoidu HNE został opracowany do różnych zastosowań, w zależności od projektu eksperymentalnego i zasobów badacza. Obejmuje to obrazowanie żywych komórek za pomocą barwienia żywych komórek; utrwalenie i cięcie w celu scharakteryzowania morfologii; barwienie immunofluorescencyjne przeciwciałami i obrazowanie konfokalne w całości w celu uniknięcia zakłócenia struktur wewnątrzświetlnych; oraz obrazowanie w jasnym polu i mikrooptyczna koherentna tomografia do ilościowych pomiarów częstotliwości dudnienia rzęsek i transportu śluzowo-rzęskowego13. Aby ułatwić ekspansję innym badaczom, do hodowli wykorzystano dostępne na rynku odczynniki i materiały eksploatacyjne. Opracowano test funkcjonalny, w którym wykorzystano popularne techniki mikroskopowe i bardziej specjalistyczny sprzęt. Ogólnie rzecz biorąc, chociaż obecny model został zaprojektowany do oceny aktywności CFTR na początku badania lub w odpowiedzi na terapię, techniki opisane w tym protokole można zastosować do innych chorób związanych z funkcjonowaniem komórek nabłonka, zwłaszcza transportu płynu w komórkach nabłonka.
Porównanie do innych metodologii 
Ostatnio opracowano użyteczność tego modelu organoidowego poprzez korelację in vitro odpowiedzi modulatora CFTR organoidów pacjentów z ich odpowiedzią kliniczną11. Warto zauważyć, że wykazano również, że obecny model był równoległy do odpowiedzi na prąd zwarciowy, który jest obecnie złotym standardem oceny funkcji CFTR, u tych samych pacjentów. Prąd zwarciowy różni się od testu pęcznienia, ponieważ ten pierwszy mierzy funkcję CFTR poprzez transport jonów26. W przeciwieństwie do tego, ten test mierzy bardziej końcowy efekt transportu płynów, dostarczając dodatkowych informacji na temat ogólnej funkcji CFTR27,28,29,30,31,32. Pomiary prądu zwarciowego nadal są powszechną i niezawodną metodą określania aktywności kanału chlorkowego CFTR1,33. Te testy elektrofizjologiczne wymagają specjalistycznego, drogiego sprzętu, wymagają wielokrotnie więcej komórek do każdej repliki eksperymentalnej niż test organoidowy, nie mogą być łatwo zautomatyzowane i nie można ich skalować do zastosowań o wyższej przepustowości. Inny model organoidowy wywodzący się z nabłonka jelit ma dodatkowe zalety15,16,17,18, takie jak lepsza zdolność replikacji, ale nie pochodzi z tkanki dróg oddechowych ani nie jest powszechnie dostępny. Szczotkowanie HNE uzyskuje się za pomocą niedrogich szczoteczek cytologicznych bez konieczności sedacji i przy minimalnym ryzyku. Szczotkowanie nie wymaga kontaktu z klinicystą i może być wykonywane przez przeszkolonych koordynatorów badań i inny personel badawczy14. Model organoidu HNE może być hodowany przez dowolne laboratorium z możliwością podstawowej hodowli komórek, a niektóre zastosowania można wykonać za pomocą standardowych technik mikroskopowych. Wszystkie te zalety zapewniają dodatkowy dostęp do technologii do oceny funkcji nabłonka dróg oddechowych, która w innym przypadku mogłaby być niedostępna dla niektórych laboratoriów. Ponadto organoidy HNE mogą być wykorzystywane do badania innych stanów chorobowych, które wpływają na drogi oddechowe, takich jak pierwotna dyskineza rzęsek25 lub infekcja wirusowa, której organoidy jelitowe nie mogą.

<table><tbody><tr><td>Szczoteczka do nosa</td><td>Opakowania medyczne CYB1</td><td>CYB-1</td><td>Długość: 8 cali, szerokość około 7 mm</td></tr><tr><td>Końcówki do pipet z dużymi otworami</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>02-707-141</td><td>Końcówki do pipet o dużej średnicy</td></tr><tr><td>Accutase</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A1110501</td><td>Roztwór do odrywania komórek</td></tr><tr><td>0,05% trypsyny -EDTA</td><td>Gibco</td><td>25300-054</td><td></td></tr><tr><td>Trypsyna inhibitor z soi</td><td>Sigma</td><td>T6522</td><td>Roztwór roboczy: 1 mg / ml w matrycy 1XDPBS</td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>356255</td><td>Macierz zewnątrzkomórkowa (EM)</td></tr> <tr><td>i angiogeneza mikro-szkiełkowa</td><td>Ibidi</td><td>81506</td><td>15-dołkowy szkiełko</td></tr><tr><td>24-dołkowe Transwell</td><td>Corning</td><td>7200154</td><td>Wkład do hodowli</td></tr><tr><td>Komorowe szkło nakrywkowe</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>155409</td><td>8-dołkowe szkiełka komorowe</td></tr><tr><td>Cell-Tak Klej do komórek i tkanek</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>354240</td><td>Klej komórkowy</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd</td><td>Mikroskopia elektronowa Nauki</td><td>50980487</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Alfa</td><td>Aesar A16046</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>ThermoFisher</td><td>Scientific BP1600-100</td><td></td></tr><tr><td>NucBlue</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>R37605</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>Eclipse Ts2-FL (odwrócony mikroskop rutynowy)</td><td>Nikon</td><td></td><td>Odwrócony mikroskop epifluorescencyjny lub mikroskop jasnego pola</td></tr><tr><td>Nikon A1R-HD25</td><td>Mikroskop konfokalny</td><td>Nikon</td><td></td></tr><tr><td>Elementy NIS- Badania podstawowe</td><td>Oprogramowanie do ręcznej analizy obrazowania</td><td>firmy Nikon</td><td></td></tr><tr><td>Histogel</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>HG-4000-012</td><td></td></tr><tr><td>Jednorazowe formy bazowe</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>41-740</td><td></td></tr><tr><td>Lionheart FX</td><td>BioTek</td><td>BTLFX</td><td>Zautomatyzowany system obrazowania</td></tr><tr><td>Lionheart Cover</td><td>BioTek</td><td>BT1450009</td><td>Kontrola środowiska</td></tr><tr><td>Pokrywa Komora wilgotności</td><td>BioTek</td><td>BT1450006</td><td>Stage insert (komora środowiskowa)</td></tr><tr><td>Kontroler gazu do CO2 i O2</td><td>BioTek</td><td>BT1210013</td><td>Kontroler gazu</td></tr><tr><td>Wkładka do mikropłytek/szkiełek</td><td>BioTek</td><td>BT1450527</td><td>Uchwyt na suwak</td></tr><tr><td>Oprogramowanie Gen5 Imaging Prime</td><td>BioTek</td><td>BTGEN5IPRIM</td><td>Oprogramowanie do automatycznej analizy obrazowania</td></tr><tr><td>4x Obiektyw z kontrastem fazowym</td><td>BioTek</td><td>BT1320515</td><td></td></tr><tr><td>10x Obiektyw z kontrastem fazowym</td><td>BioTek</td><td></td><td></td>BT1320516</tr><tr><td>LED Cube</td><td>BioTek</td><td>BT1225007</td><td></td></tr><tr><td>Filter Cube (DAPI)</td><td>BioTek</td><td>BT1225100</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>CFTRinh-172</td><td>Selleck Chemicals</td><td>S7139</td><td></td></tr><tr><td>Forskolin</td><td>Sigma</td><td>F6886</td><td></td></tr><tr><td>IBMX</td><td>Sigma</td><td>I5879</td><td></td></tr><tr><td>Expansion Media</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11965</td><td></td></tr><tr><td>F12 Mieszanka odżywcza</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11765</td><td></td></tr><tr><td>Płodowa surowica bydlęca</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>&nbsp; 16140-071</td><td></td></tr><tr><td>Penicylina/Streptomycyna</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>&nbsp; 15-140-122</td><td></td></tr><tr><td>Toksyna</td><td>Sigma</td><td>&nbsp; C8052</td><td></td></tr><tr><td>Naskórkowy czynnik wzrostu (EGF)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>&nbsp; </td><td></td>PHG0314</tr><tr><td>Hydrokortyzon (HC)</td><td>Sigma</td><td>&nbsp; H0888</td><td></td></tr><tr><td>Insulina</td><td>Sigma</td><td>&nbsp; I9278</td><td></td></tr><tr><td>Adenina</td><td>Sigma</td><td>&nbsp; A2786</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632</td><td>Stemgent</td><td>&nbsp; 04-0012-02</td><td></td></tr><tr><td>Antybiotyk Media</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ceftazidime</td><td>Alfa Aesar</td><td>&nbsp; J66460-03</td><td></td></tr><tr><td>Tobramycin</td><td>Alfa Aesar</td><td>&nbsp; J67340</td><td></td></tr><tr><td>Wankomycyna</td><td>Alfa Aesar</td><td>&nbsp; J67251</td><td></td></tr><tr><td>Amfoterycyna B</td><td>Sigma</td><td>&nbsp; A2942</td><td></td></tr><tr><td>Podłoże różnicujące</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12 (1:1)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>&nbsp; 11330-32</td><td></td></tr><tr><td>Ultroser-G</td><td>Pal.</td><td>&nbsp; 15950-017</td><td></td></tr><tr><td>Hyklon płodu II</td><td></td><td>&nbsp; SH30066.03</td><td></td></tr><tr><td>Ekstrakt z mózgu bydlęcego</td><td>Lonza</td><td>&nbsp; CC-4098</td><td></td></tr><tr><td>Insulina</td><td>Sigma</td><td>&nbsp; I-9278</td><td></td></tr><tr><td>Hydrokortyzon</td><td>Sigma</td><td>&nbsp; H-0888</td><td></td></tr><tr><td>Trijodotyronina</td><td>Sigma</td><td>&nbsp; T-6397</td><td></td></tr><tr><td>Transferrin</td><td>Sigma</td><td>&nbsp; T-0665</td><td></td></tr><tr><td>Etanoloamina</td><td>Sigma</td><td>&nbsp; E-0135</td><td></td></tr><tr><td>Epinefryna</td><td>Sigma</td><td>E-4250</td><td></td></tr><tr><td>O-fosforyloetanoloamina</td><td>Sigma</td><td>P-0503</td><td></td></tr><tr><td>Kwas retinowy</td><td>Sigma</td><td>R-2625</td><td></td></tr><tr><td>Przeciwciała pierwszorzędowe< / silne></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ludzkie przeciwciało CFTR</td><td>R& Systemy D</td><td>MAB1660</td><td>Rozcieńczenie: 100x</td></tr><tr><td>przeciwciało ZO-1</td><td>Thermo Fisher</td><td>MA3-39100-A647</td><td>Rozcieńczenie: 1000x</td></tr><tr><td>przeciwciało anty-MUC5B</td><td>Sigma</td><td>HPA008246</td><td>Rozcieńczenie: 100x</td></tr><tr><td>Anty-acetylowana tubulina</td><td>Sigma</td><td>T7451</td><td>Rozcieńczenie: 100x</td></tr><tr><td>Przeciwciało anty-beta IV tubuliny</td><td>Abcam</td><td>Ab11315</td><td>Rozcieńczenie: 100x</td></tr><tr><td><silne> Przeciwciała drugorzędowe< / silne></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>osły anty-mysie IgG (H+L), Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>A21202</td><td>Rozcieńczenie: 2000x</td></tr><tr><td>Osioł anty-królik IgG (H+L), Alexa Fluor 594</td><td>Invitrogen</td><td>A21207</td><td>Rozcieńczenie: 2000x</td></tr></tbody></table>

hodowla i obrazowanie ludzkich organoidów nabłonkowych nosa

Culture and Imaging of Human Nasal Epithelial Organoids

Zindywidualizowana terapia dla pacjentów z mukowiscydozą (CF) może być osiągnięta za pomocą modelu choroby in vitro, aby zrozumieć podstawową aktywność i odbudowę mikrocząsteczkowego regulatora przewodnictwa (CFTR) mukowiscydozy Transmembrane Conductance Regulator. Nasza grupa skupiła się ostatnio na stworzeniu dobrze zróżnicowanego modelu organoidowego pochodzącego bezpośrednio z pierwotnych ludzkich komórek nabłonka nosa (HNE). Histologia podzielonych organoidów, barwienie immunofluorescencyjne w całości i obrazowanie (przy użyciu mikroskopii konfokalnej, mikroskopii immunofluorescencyjnej i jasnego pola) są niezbędne do scharakteryzowania organoidów i potwierdzenia różnicowania nabłonka w ramach przygotowań do testów funkcjonalnych. Ponadto organoidy HNE wytwarzają lumeny o różnych rozmiarach, które korelują z aktywnością CFTR, rozróżniając organoidy CF i bez mukowiscydozy. W niniejszym artykule szczegółowo opisano metodologię hodowli organoidów HNE, koncentrując się na ocenie różnicowania przy użyciu metod obrazowania, w tym pomiaru podstawowej powierzchni światła (metoda pomiaru aktywności CFTR w organoidach, którą może zastosować każde laboratorium dysponujące mikroskopem), a także opracowanego zautomatyzowanego podejścia do testu funkcjonalnego (które wymaga bardziej specjalistycznego sprzętu).

Ekspansja HNE jest niezbędna dla pomywnego rozwoju hodowli organoidów. HNE pochodzące z prawidłowo pobranej próbki powinny osiągnąć ponad 70% konfluencji około 10. dnia. Przykład próbek udanych i nieudanych przedstawiono w Rysunek 1A i Rysunek 1Bodpowiednio. Komórki należy zutylizować, jeśli nie osiągną 70% konfluencji w ciągu 14 dni od rozpoczęcia kokultury z napromieniowanymi komórkami 3T3. Wszelkie zanieczyszczone komórki należy natychmiast u...

Szczegółowy protokół jest tutaj przedstawiony w celu opisania modelu organoidowego in vitro z ludzkich komórek nabłonka nosa. Protokół posiada opcje pomiarów wymagających standardowego sprzętu laboratoryjnego, z dodatkowymi możliwościami dla specjalistycznego sprzętu i oprogramowania.

Hodowla i obrazowanie ludzkich organoidów nabłonkowych nosa

Individualized therapy for cystic fibrosis (CF) patients can be achieved with an in vitro disease model to understand baseline Cystic Fibrosis ...

Zindywidualizowaną terapię u pacjentów z mukowiscydozą można osiągnąć za pomocą modelu choroby in vitro, aby zrozumieć aktywność CFTR na początku badania. Ludzkie organoidy nabłonkowe nosa lub organoidy HNE wytwarzają światła o różnych rozmiarach, które korelują z aktywnością CFTR, rozróżniając organoidy CF i bez mukowiscydozy. Tutaj szczegółowo opisaliśmy metodologię hodowli i obrazowania tych organoidów HNE.Dysfunkcyjny transport jonów nabłonkowych, szczególnie chlorków i wodorowęglanów, powoduje zmniejszenie objętości płynów wyściełających nabłonek. Wpływa to również na wydzielinę śluzu, prowadząc do śluzowicy i niedrożności. Dlatego nasz model HNE został opracowany do różnych zastosowań, w zależności od projektu eksperymentalnego i zasobów badacza.Oprócz oceny aktywności CFTR na początku badania lub w odpowiedzi na terapię, technika ta może być również stosowana w innych chorobach związanych z funkcjonowaniem komórek nabłonka, zwłaszcza transportu płynów w komórkach nabłonka. Metody te zostały opracowane przede wszystkim do stosowania w badaniach nad mukowiscydozą. Inne badania oceniające nabłonek dróg oddechowych, takie jak pierwotna dyskineza rzęsek, mogą również uznać te met

culture-and-imaging-of-human-nasal-epithelial-organoids

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Komórki nabłonka nosa, uzyskane poprzez powierzchowną biopsję zeskrobaną ludzkich ochotników, są rozszerzane i przenoszone do wkładek do hodowli tkankowych. Po osiągnięciu konfluencji komórki są hodowane na granicy faz powietrze-ciecz, dając kultury komórek rzęskowych i nierzęskowych. Zróżnicowane hodowle komórek nabłonka nosa dostarczają realnych modeli eksperymentalnych do badania błony śluzowej układu oddechowego.

Hodowla ludzkich komórek nabłonka nosa na granicy faz powietrza i cieczy

Ta publikacja demonstruje metody skutecznego pobierania próbek i hodowli błony śluzowej nabłonka nosa od dzieci oraz przeprogramowania tych komórek na indukowane pluripotencjalne komórki macierzyste (iPSC).

Hoduj pierwotne komórki nabłonka nosa od dzieci i przeprogramuj je w indukowane pluripotencjalne komórki macierzyste

Opisujemy prosty protokół tworzenia organoidów nabłonkowych śluzowo-rzęskowych z głębokich komórek ektodermy wyizolowanych z zarodków Xenopus laevis. Multipotencjalne komórki progenitorowe regenerują prekursory nabłonkowych komórek kubkowych i umożliwiają śledzenie na żywo inicjacji i progresji przemian komórkowych na powierzchni organoidów.

Organoidy nabłonkowe śluzowo-rzęskowe z komórek embrionalnych Xendopus: generacja, hodowla i obrazowanie na żywo w wysokiej rozdzielczości

Ten protokół opisuje zbieranie, rozszerzanie i różnicowanie komórek nabłonka nosa do organotypowych modeli komórek nabłonka dróg oddechowych oraz kwantyfikację częstotliwości uderzeń rzęsek za pomocą obrazowania żywych komórek i niestandardowych skryptów.

Zbieranie, rozszerzanie i różnicowanie pierwotnych modeli ludzkich komórek nabłonka nosa w celu ilościowego określenia częstotliwości uderzeń rzęsek

Protokół przedstawia metodę pozyskiwania ludzkich organoidów płucnych z pierwotnych tkanek płuc, rozszerzania organoidów płuc i wywoływania różnicowania proksymalnego w celu wygenerowania organoidów dróg oddechowych 3D i 2D, które wiernie kopiują nabłonek ludzkich dróg oddechowych.

Ustalanie ludzkich organoidów płuc i różnicowanie proksymalne w celu wytworzenia dojrzałych organoidów dróg oddechowych

Ten artykuł przedstawia protokół produkcji nowego typu substratu hodowlanego z setkami mikropojemników namm2, w których organoidy mogą być hodowane i obserwowane za pomocą mikroskopii o wysokiej rozdzielczości. Szczegółowo opisano również protokoły wysiewu komórek i barwienia immunologicznego.

Wysokoprzepustowa platforma do hodowli i obrazowania 3D organoidów

Ten protokół omawia podejście do generowania organoidów nabłonkowych z pierwotnej normalnej i nowotworowej tkanki sutkowej poprzez wirowanie różnicowe. Ponadto dołączono instrukcje dotyczące trójwymiarowej hodowli, a także obrazowania immunofluorescencyjnego osadzonych organoidów.

Generowanie i obrazowanie organoidów nabłonkowych myszy i ludzi z normalnej i nowotworowej tkanki sutka bez pasażowania

Nabłonek nosa jest główną barierą, z którą spotykają się wszystkie patogeny układu oddechowego. W tym miejscu przedstawiamy metody wykorzystania pierwotnych komórek nabłonka nosa hodowanych jako kultury interfejsu powietrze-ciecz (ALI) w celu scharakteryzowania interakcji człowieka między koronawirusem a gospodarzem w fizjologicznie istotnym systemie.

Zakażenie pierwotnych komórek nabłonka nosa hodowanych na granicy faz powietrze-ciecz w celu scharakteryzowania interakcji między człowiekiem a koronawirusem

Tutaj pokazujemy, jak komórki nabłonkowe hodowane z fibroblastami w dwuwarstwowym systemie opartym na błonie nanowłóknistej mogą stabilnie przylegać do błony i rosnąć na niej.

Stworzenie trójwymiarowego modułu kokultury komórek nabłonkowych z wykorzystaniem błon nanowłóknistych

Opisano protokół izolacji, hodowli i obrazowania klastrów komórek wysp trzustkowych (ICC) pochodzących z ludzkich komórek trzustki płodu. Metoda szczegółowo opisuje kroki niezbędne do wygenerowania ICC z tkanki, hodowli jako monowarstw lub w zawiesinie jako agregatów, oraz obrazu dla markerów proliferacji i decyzji o losie komórek trzustki.

Izolacja, hodowla i obrazowanie klastrów ludzkich płodowych komórek trzustkowych

Poznaj metodologię hodowli i obrazowania ludzkich organoidów nabłonkowych nosa do badań nad mukowiscydozą. Model HNE umożliwia ocenę aktywności CFTR i transportu jonów w epiteliach.

Hodowla i obrazowanie ludzkich organoidów nabłonkowych nosa

Przeglądaj więcej filmów