Długoterminowy, ciągły pomiar przepływu krwi w nerkach u przytomnych szczurów

Ciągłe rejestrowanie przepływu krwi przez nerki u szczurów z instrumentami pozwala nam tymczasowo określić sekwencję zdarzeń, które prowadzą do procesu chorobowego, który badamy. W naszym przypadku jest to nadciśnienie tętnicze i staramy się ustalić, czy zmniejszenie przepływu krwi przez nerki, które występuje w nadciśnieniu, poprzedza, czy jest konsekwencją wysokiego ciśnienia krwi. System, który dzisiaj zademonstrujemy i przygotowanie zwierzęcia jest tak naprawdę zaprojektowany, aby umożliwić ciągłe 24-godzinne określanie przepływu krwi w nerkach przez wiele tygodni w celu zbadania przewlekłych zdarzeń i zbadania szczurów w ich środowisku domowym, klatkach.

Podobnie jak w przypadku wszystkich technik chirurgicznych, praktyki, cierpliwości i dbałości o szczegóły, będziemy musieli opanować te procedury, dopóki narzędzie nie będzie mogło zostać wykonane na czas. Na początek ogol cały brzuch w okolicy drzemki wokół siódmego kręgu szyjnego znieczulonego szczura za pomocą elektrycznej maszynki do strzyżenia. Po goleniu przetrzyj obszar trzy razy na przemian 10% jodowidonu i 70% etanolu.

Ułóż szczura w pozycji leżącej. Wykonaj jednocentymetrowe cięcie skalpelem na włosie i lewym boku. Następnie wykonaj wycięcie kleszczami hemostatycznymi w wolnej przestrzeni podskórnej od nacięcia bocznego do tyłu szyi.

Przymocuj przycisk skin do sondy przepływu i przeprowadź sondę przepływu przez ten podskórny tunel od szyi do nacięcia bocznego za pomocą kleszczy hemostatycznych. Następnie umieść szczura w pozycji leżącej na plecach i wykonaj od czterech do pięciu centymetrów nacięcia brzucha w linii środkowej. Wypreparuj obszar wokół lewej tętnicy nerkowej za pomocą zakrzywionych kleszczy do mikropreparacji, odsłaniając przestrzeń wystarczającą do umieszczenia sondy przepływu.

Następnie tępo przekłuć kleszczykami hemostatycznymi lewy mięsień czworoboczny lędźwiowy i przeciągnąć głowicę sondy przepływowej przez tętnicę nerkową pod tkanką tłuszczową do jamy brzusznej. Umieść siatkę z włókna poliestrowego na ścianie brzucha. Zaczepić końcówkę sondy przepływu o lewą tętnicę nerkową i podłączyć ją do przepływomierza.

Dodaj trochę żelu wokół końcówki sondy, a wartość natężenia przepływu pojawi się na przepływomierzu. Przyklej siatkę z włókna poliestrowego przymocowaną do sondy do ściany brzucha za pomocą kleju tkankowego i przytrzymaj, aż wyschnie i zostanie związana. Po umieszczeniu sondy na miejscu odłącz sondę przepływu od przepływomierza i przykryj brzuch gazą nasączoną solą fizjologiczną.

Aby zszyć sondę, obróć szczura do pozycji leżącej. Przymocuj przycisk skin do sondy przepływu i wykonaj okrężną pętlę sondy przepływu podskórnie z boku. Zszyj nacięcie na szyi i guzik do skóry.

Następnie zszyj bok czterema szwami chirurgicznymi ott. Ponownie podłącz sondę przepływu do przepływomierza i obróć szczura z powrotem do pozycji grzbietowej, aby sprawdzić przepływ krwi przez nerki. Dokonaj końcowej regulacji sondy przepływu, aby zoptymalizować jej położenie na tętnicy nerkowej.

Na koniec zszyj mięsień jedwabiem three ott w skórze za pomocą czterech ott szwów chirurgicznych. Kiedy szczur w pełni wyzdrowieje ze znieczulenia, wróć do systemu klatkowego reagującego na ruch, podłącz sondę przepływu do miernika przepływu krwi i poczekaj na okres rekonwalescencji wynoszący około tygodnia, aby ustabilizować sondę i pomiar przepływu. Średnie ciśnienie tętnicze i przepływ krwi były stale mierzone u szczurów wrażliwych na sól podczas przechodzenia z diety o niskiej zawartości soli na dietę o wysokiej zawartości soli.

Te reprezentatywne dane od samca szczura były rejestrowane przez okres czterech tygodni i są pokazane ze średnią minutową. Zaobserwowano wyraźną dobową różnicę w średnim ciśnieniu tętniczym i przepływie krwi. Podczas gdy ciśnienie krwi wzrasta wraz z dietą bogatą w sól, przepływ krwi ma tendencję do zmniejszania się, a nie wzrostu, co sugeruje zwiększony opór naczyniowy nerek.

Ogromną zaletą tej techniki jest to, że może ona badać przepływ krwi przez nerki przez długi czas, a co najważniejsze w warunkach nieznieczulonych. Ma to ogromne znaczenie podczas badania reakcji na różne bodźce, gdzie można użyć tego samego zwierzęcia w kontrolowanych, nieznieczulonych warunkach i śledzić to samo zwierzę przez krótkie lub bardzo długie okresy, aby zobaczyć, jaka jest reakcja na jakiś konkretny bodziec lub chorobę patologiczną.