Jasna sonda fluorescencyjna NIR-II do obrazowania naczyń krwionośnych i nowotworów

Obecny protokół opisuje szczegółową operację obrazowania fluorescencyjnego NIR-II w czasie rzeczywistym myszy za pomocą urządzenia do obrazowania optycznego NIR-II.

Obrazowanie naczyń krwionośnych i nowotworów w wysokiej rozdzielczości zostało zrealizowane za pomocą nanoprobu w bliskiej podczerwieni do fluorescencji, zapewniając dokładną i skuteczną metodę kierowania chorobami naczyniowymi i rakiem. Obrazowanie in vivo w oknie NIR-II, które pozwala nam dogłębnie przyjrzeć się żywemu obiektowi, stwarza możliwości dla badań biomedycznych i naszych zastosowań klinicznych. Przygotuj się do obrazowania w bliskiej podczerwieni II lub NIR-II, umieszczając dostępny w handlu karton na środku nośnika urządzenia do obrazowania.

Następnie umieść próbkę na czarnym kartonie, tak aby znajdowała się na środku nośnika. Po wybraniu odpowiedniego filtra należy dokonać regulacji wysokości platformy. Naciśnij i przytrzymaj opcję platformy w górę na interfejsie ekranu dotykowego obszaru sterowania konsoli operatora, aby przesunąć ją w górę.

I długo dociśnij platformę, aby przesunąć ją w dół. Po zsyntetyzowaniu barwnika NIR-II HLY1 należy przygotować kropki HLY1 metodą nanoprecypitacji przy użyciu DSPE-PEG-2K jako matrycy enkapsulacji. W tym celu należy umieścić zlewkę zawierającą roztwór 10 miligramów DSPE-PEG-2K w dziewięciu mililitrach wody do sonikacji w temperaturze 25 stopni Celsjusza.

Następnie rozpuść jeden miligram HLY1 w jednym mililitrze tetrahydrofuranu lub THF. I powoli dodawać roztwór do roztworu wodnego DSPE-PEG-2K poddawanego sonikacji. Następnie usunąć THF z mieszaniny za pomocą dializy.

Po zagęszczeniu powyższego roztworu odśrodkowo z ultrafiltracją przy 7,100 G przez 10 minut, umieść go w lodówce o temperaturze czterech stopni Celsjusza do wykorzystania w przyszłości. W przypadku obrazowania in vivo należy wstrzyknąć kropki HLY1 dożylnie znieczulonym myszom. A trzy minuty później przystąp do wykonywania obrazowania fluorescencyjnego NIR-II naczyń krwionośnych całego ciała myszy za pomocą optycznego systemu obrazowania NIR-II.

Skoncentruj się dalej na głowie myszy, aby zebrać obrazowanie naczyń krwionośnych mózgu. Ustaw parametry instrumentu optycznego systemu obrazowania NIR-II na 90 miliwatów na centymetr kwadratowy i laser 808 nm. Zbierz obrazy pięć minut po wstrzyknięciu kropek HLY1 myszom i przetwórz dane za pomocą oprogramowania ImageJ.

Intensywność fluorescencji HLY1 w roztworze 90% THF zawierającym 90% wody była pięciokrotnie większa niż w roztworze THF, co wskazuje na wyraźną emisję indukowaną agregacją lub cechę AIE HLY1. Kropki HLY1 emitowały silne sygnały fluorescencyjne pod filtrem dolnoprzepustowym lub LP o długości 1500 nanometrów, co potwierdzało jego przydatność do obrazowania NIR-IIb. Maksymalna długość fali absorpcji i emisji kropek HLY1 wynosiła odpowiednio 740 nanometrów i 1 040 nanometrów.

Dodatkowo, hydrodynamiczny rozmiar kropek HLY1 został określony na 145 nanometrów przez dynamiczne rozpraszanie światła. U myszy, którym podawano kropki HLY1, naczynia mózgowe i mikronaczynia w kończynie tylnej zostały wyraźnie zidentyfikowane za pomocą obrazowania NIR-II pod filtrem LP 1,500 nanometra. Co więcej, cztery guzy T1 myszy z guzem były również wyraźnie widoczne w obrazowaniu NIR-II, co wskazuje na zwiększoną przepuszczalność i retencję lub efekt EPR kropek HLY1.

Wszystkie te wyniki sugerowały, że kropki HLY1 są jasną sondą fluorescencyjną NIR-II mającą zastosowanie do obrazowania naczyń krwionośnych i nowotworów. Najważniejszą częścią procedury jest przygotowanie nanosondy zawieszonej w wodzie w ramach obrazowania fluorescencyjnego in vivo i NIR-II.