Injeção intra-uterina de células cancerígenas: uma técnica para entregar células cancerígenas para estabelecer o modelo intra-peritoneal de camundongo com câncer de ovário

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Injeção intra-uterina de células de câncer de ovário humano em camundongos nus atímicos

NOTA: O procedimento a seguir requer a assistência de uma segunda pessoa. Além disso, como se trata de cirurgia de sobrevivência, use instrumentos cirúrgicos estéreis. Este procedimento de cirurgia de sobrevivência deve levar aproximadamente 10 a 15 minutos.

1. Anestesiar o camundongo usando isoflurano a 2%. Camundongos nus atímicos de 7 a 8 semanas de idade são normalmente usados.
2. Verifique se o animal está completamente anestesiado beliscando a pata com os dedos ou uma pinça. O animal deve não responder completamente à dor antes de iniciar a cirurgia.
3. Coloque o camundongo anestesiado com o lado lateral direito para cima, em uma gaze estéril com a cabeça afastada do investigador.
4. Aplique pomada nos olhos com um aplicador de ponta de algodão para evitar o ressecamento durante a anestesia.
5. Insira imediatamente a cabeça em um sistema de cone nasal conectado a um vaporizador de isoflurano (Fig. 1A). Isso fornece a anestesia durante todo o procedimento cirúrgico.
6. Desinfete o lado esquerdo (ou direito) do abdômen usando compressas com álcool (Fig. 1B) seguido de iodo e, em seguida, coloque uma cortina cirúrgica estéril sobre o local da cirurgia.
7. Usando tesouras cirúrgicas estéreis e fórceps, faça uma incisão na pele de 1-2 cm no quadrante inferior esquerdo do camundongo (Fig. 1C).
8. Levante o músculo e faça uma incisão para alcançar o peritônio.
9. Disseque o músculo oblíquo para expor a cavidade abdominal.
10. Localize e identifique o corno uterino esquerdo (Fig. 1D).
11. Usando um hemostático estéril, prenda os lados anterior e posterior do chifre (Fig. 1E). Coloque a pinça anterior logo abaixo da trompa de Falópio e a pinça posterior logo acima do colo do útero.
12. Peça à segunda pessoa que injete a suspensão celular. Coloque a agulha contendo as células em um ângulo de 45° perpendicular ao chifre (Fig. 1F). Injete muito lentamente 50 μl de suspensão celular no lúmen do corno uterino.
13. Remova a agulha e solte o grampo anterior.
14. Solte a pinça posterior e recoloque o corno uterino na cavidade abdominal.
15. Feche o peritônio usando uma sutura absorvível sintética e feche a pele usando um adesivo tecidual.
16. Remova o mouse do cone do nariz e coloque-o de volta na gaiola. Se necessário, troque as roupas de cama para garantir uma gaiola limpa após a cirurgia. Certifique-se de que todos os animais estejam acordados e ativos antes de sair sozinhos.
17. Forneça ibuprofeno a 0,11 mg/ml de água potável nas primeiras 48 horas após a cirurgia. Depois, substitua por água potável normal.
    NOTA: se forem usados camundongos nus atímicos e a pele for fechada com adesivo tecidual em vez de suturas, não é necessário separar os camundongos após a cirurgia. Os camundongos SCID são mais agressivos e podem ter que ser separados.
18. Monitore de perto o local da incisão quanto a uma possível infecção devido a uma ferida aberta.

Figura 1: Injeção intra-uterina de células de câncer de ovário. (A) a anestesia é administrada continuamente por meio de um cone nasal; (B-E) a pele é incisada para localizar e pinçar o corno uterino; (F) as células cancerígenas são injetadas lentamente no lúmen do útero.