Neste protocolo, w e identificou um novo população de células de melanócito-like (também conhecido como melanócitos cardíacos) nos corações de ratos e humanos que contribuem para a arritmia atrial dispara em camundongos.
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Artigo de método
Isolar células de melanócito-like primárias do coração mouse
Neste artigo
Resumo
Resumo
Foi descoberta uma nova população de células de melanócitos tipo (também conhecido como melanócitos cardíaca) nos corações de ratos e seres humanos, que contribuem para os gatilhos de arritmias atriais em ratinhos. Para investigar as propriedades elétricas e biológicos de melanócitos cardíacos foi desenvolvido um procedimento para isolá-los do rato corações que nós derivados das destinadas a isolar cardiomiócitos murinos neonatais. A fim de obter melanócitos cardíacos saudáveis adequados para mais extensa patch clamp ou estudos bioquímicos, foi desenvolvido um procedimento refinado para isolar e cultivar melanócitos cardíacos baseados naqueles originalmente projetado para isolar os melanócitos cutâneos. O procedimento refinado é demonstrado nesta revisão e produz um maior número de células de melanócito-like saudáveis que pode ser banhado em uma população pura ou com cardiomiócitos.
Introdução
Nós recentemente identificada uma população de células romance no coração de camundongos e humanos que expressam enzimas melanina-síntese e morfologicamente se assemelham melanócitos cutâneos. Chamamos 'melanócitos cardíacos' essas células e descobrimos que eles estão presentes em locais anatômicos a partir do qual arritmia atrial desencadeia muitas vezes se originam em seres humanos. Encontramos também melanócitos cardíacos contribuir para arritmias atriais em camundongos com deleção da linhagem germinativa de Dct. Melanócitos cardíacas são escassamente distribuídos por todo o átrio do rato onde eles compreendem menos de 0,1% de todas as células atriais. Par....
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Protocolo
1 Preparar as soluções necessárias e Equipamentos
- Primeiro, esterilizar os instrumentos cirúrgicos (pinças retas forma, fórceps, tesouras forma curva de forma reta, e tesouras forma curva) em autoclave por 15 min. a 121 ° C. Preparar dois conjuntos de instrumentos, onde um conjunto é usado para dissecar os corações e o outro conjunto irá ser utilizados para triturar o tecido.
- Dissolve-se um pacote de meios de cultura MCDB153 em 900 ml de esterilizado, água filtrada e agita-se lentamente até que o pó esteja dissolvido. Adicionar 1,2 g de bicarbonato de sódio, ou de 15,7 ml de uma solução de bicarbonato de sódio [7,5% w / v], por cada litro de volu....
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Resultados
O protocolo descrito neste artigo é uma técnica aprimorada em comparação com o que anteriormente publicado para isolar melanócitos cardíacos do coração murino. Este procedimento emprega a utilização de marcadores fluorescentes accionados por síntese de melanina-específica enzima Cre-recombinase para marcar as células de melanócitos, como cardíacas. É importante a utilização de um marcador para rotular melanócitos cardíacas quando se trabalha com células embrionárias ou neonatais recém-isolados, uma vez que as diferenças.......
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Discussão
Melanócitos cardíacas estão presentes em locais anatômicos dentro do coração que normalmente dão origem a gatilhos arritmia atrial. Essas regiões incluem as veias pulmonares, o anel atrioventricular, a posterior do átrio esquerdo e do forame oval (Figura 4). Para compreender o papel dessas células desempenham na arritmogênese, desenvolvemos técnicas para isolá-los e estudar sua fisiologia. No entanto, reconhecemos que melhorar esta técnica para produzir quantidades mais saudáveis e maiores de melanóci.......
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Divulgações
Não temos nada a divulgar.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado pelo National Institutes of prêmio Saúde R01 HL105734 para VVPMDL é suportado, em parte, pelo National Institutes of Health Research Career Award K08 HL094748. VVP é um pesquisador inovador da American Heart Association apoiada pela concessão 11IRG900384.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| MCDB 153 | Sigma-Aldrich | M7403 | Dissolver em água |
| DPBS, sem cálcio nem magnésio | Invitrogen | 14190136 | Conc. estoque: 1x Conc. de trabalho: 1x |
| Penicilina-estreptomicina | Invitrogen | 15140163 | Conc. estoque: 100x Conc. de trabalho: 1x |
| Soro bovino fetal | Life Technology | Certificado | Conc. de trabalho: 4% |
| TPA | Sigma-Aldrich | P1585 | Dissolver em DMSO Conc. estoque: 3,2 μM Conc. de trabalho: 32 nM |
| Transferrina | Sigma-Aldrich | T8158 | Dissolver em DPBS Conc. estoque: 0,1 mg/ml Conc. de trabalho: 1 μg/ml |
| AMP cíclico dibutiril | Sigma-Aldrich | D0627 | Dissolver em DPBS Conc. estoque: 0,5 mM Conc. de trabalho: 5 μM |
| Insulina | Sigma-Aldrich | I6634 | Dissolver em ácido acético 10 mM Conc. estoque: 1 mg/ml Conc. de trabalho: 5 μg/ml |
| FGF básico | BD Biosciences | 354060 | Dissolver em água Conc. estoque: 4 ng/μl Conc. de trabalho: 4 ng/ml |
Referências
- Hornyak, T. J., et al. Mitf dosage as a primary determinant of melanocyte survival after ultraviolet irradiation. Pigment Cell Melanoma Res. 22, 307-318 (2009).
- Yonetani, S., et al.
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Reimpressões e permissões
