Modelagem de morte Neuronal e a degeneração no Mouse grânulo cerebelar primária de neurônios

Matthew Laaper; Takrima Haque; Ruth S. Slack; Arezu Jahani-Asl

doi:10.3791/55871

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Artigo de método

Modelagem de morte Neuronal e a degeneração no Mouse grânulo cerebelar primária de neurônios

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DOI:

10.3791/55871

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6 de novembro de 2017

Matthew Laaper¹^,² , Takrima Haque¹ , Ruth S. Slack³ , Arezu Jahani-Asl¹^,²^,⁴

¹Lady Davis Institute for Medical Research, Jewish General Hospital, ²Integrated Program in Neuroscience, McGill University, ³Department of Cellular and Molecular Medicine, University of Ottawa, ⁴Department of Oncology, Faculty of Medicine, McGill University

Neste artigo

Resumo

Este protocolo descreve um método simples para isolar e neurônios de grânulo cerebral principal do rato (CGNs) de filhotes de 6-7 dias de idade, transdução eficiente de CGNs para perda e ganho de estudos de função, de cultivo e modelagem excitotoxicidade neuronal induzida por NMDA, morte celular baixo potássio-induzida, danos ao DNA e estresse oxidativo usando o mesmo modelo de cultura.

Resumo

Neurônios de grânulo cerebelar (CGNs) são um modelo neuronal comumente usado, formando uma população homogénea abundante no cerebelo. Tendo em conta o seu desenvolvimento pós-natal, abundância e acessibilidade, CGNs são um modelo ideal para estudar processos neuronais, incluindo o desenvolvimento neuronal, a migração neuronal e estimulação da atividade neuronal fisiológica. Além disso, culturas CGN fornecem um modelo excelente para estudar os diferentes modos de morte celular, incluindo excitotoxicidade e apoptose. Dentro de uma semana em cultura, CGNs expressar receptores N-metil-D-aspartato (NMDA), um receptor de glutamato de geleificação específicos com muitas funções críticas em saúde neuronal e doença. A adição de baixas concentrações de NMDA em conjunto com a despolarização da membrana para roedores culturas primárias de CGN tem sido usada para estimulação da atividade neuronal fisiológica do modelo enquanto a adição de altas concentrações de NMDA pode ser empregada para modelar excitotoxic lesão neuronal. Aqui, um método de isolamento e cultivo de CGNs de filhotes 6 dias de idade, bem como a manipulação genética de CGNs por adenovírus e lentivírus são descritos. Estamos também presentes protocolos otimizados em como estimular excitotoxicidade induzida por NMDA, baixo potássio-induzida apoptose, stress oxidativo e dano do ADN após transdução destes neurônios.

Introdução

Neurônios de grânulo cerebelar (CGNs) são bem caracterizados em cultura e têm servido como um modelo eficaz para estudar a morte neuronal e desenvolvimento ¹^,²^,³^,⁴^,⁵^, ⁶. a expressão inicial dos receptores N-metil-D-aspartato (NMDA) no CGN culturas em vitro faz-lhes um modelo atraente para estudar induzida por NMDA sinalização. A ativação destes receptores com NMDA em conjunto com a despolarização da membrana é usada para modelar a estimulação da atividade neuronal....