Extração por sonicação de biomarcadores lipídicos de sedimentos

1. Recolher os materiais necessários

1. Amostras (folhas, sujeira, fungos, casca, tecido), geralmente congeladas, congeladas, esmagadas e homogeneizadas antes da extração, extraídas em grupos para maximizar a eficiência. Extraia três amostras.
2. Dependendo do tamanho da amostra, podem ser utilizados frascos com volumes que variam de 4 a 60 mL. Para este experimento, são utilizados frascos de vidro borossilicato (40 mL) e tampas seguras de solventes. Frascos, pipetas de vidro borossilicato e latas de pesagem devem ser queimados a 550 °C por 6h antes de garantir a remoção de possíveis contaminantes orgânicos.
3. Diclorometano e metanol são comuns na maioria dos laboratórios de geoquímica orgânica. Eles são usados individualmente para enxaguar ferramentas de laboratório e vidros antes de usar. Uma mistura de diclorometano (DCM) ao metanol (MeOH; 9:1) é usada em muitos laboratórios para extrair biomarcadores eficientemente com uma ampla gama de polaridades. Os solventes devem estar livres de contaminantes orgânicos.
4. Use um banho de água de sônica em temperatura ambiente. Uma gama de tamanhos de sonicator e sonicação com ou sem calor estão disponíveis nos principais varejistas de equipamentos científicos.
5. Os frascos de frascos, que devem ser impermeáveis, serão colocados em banho de sônica.
6. Capa química aprovada por solvente.

2. Preparação da Amostra

1. Coloque uma lata de pesagem queimada na escala do laboratório e depois na piche.
2. Enxágüe a espátula de laboratório com solvente, em seguida, use-a para transferir uma massa apropriada de amostra para a lata de pesagem, e regissão a massa.
   1. A massa da amostra varia dependendo do seu teor de matéria orgânica. Material magro de matéria relativamente orgânica (lama marinha) pode exigir vários gramas, enquanto material rico em matéria orgânica (tecido de folha) pode exigir muito menos.
3. Transfira todo o material na lata de pesagem em um frasco queimado, pré-pesado e rotulado. Tampe o frasco e descarte a lata de pesagem.
4. Realizar etapas 2.1 - 2.3 para cada amostra a ser extraída.

3. Extração

1. Usando uma pipeta e uma lâmpada pré-combustão, transfira ~20 mL da mistura DCM:MeOH (9:1) em cada frasco (frasco deve estar aproximadamente meio cheio). Recapitulando frascos antes de passar para a próxima amostra, para que os solventes voláteis não evaporem.
   1. As volatilidades do DCM e do MeOH são diferentes. A evaporação do solvente de extração devido a frascos de amostra não tampados tem a capacidade de mudar sua polaridade e, portanto, a extração.
2. Coloque os frascos de amostra em um rack de frasco impermeável.
3. Verifique se o nível de água no banho de sônica é apenas profundo o suficiente para submergir os frascos de amostra até o topo do solvente de extração. Muita água pode fazer com que os frascos flutuem; muito pouca água pode impedir que as amostras sejam devidamente agitadas.
4. Coloque o frasco com as amostras nele diretamente no banho de sônicação.
5. Sonicato por 30 minutos em temperatura ambiente.
6. Remova o rack de amostra do sonicator. Se extrair sedimentos, deixe-o definido por 30 minutos para permitir que a acomodação ocorra. Se extrair outro conjunto de amostras, coloque em sonicator neste momento.
7. Remova a mistura DCM:MeOH do frasco de extração, usando uma pipeta e uma lâmpada pré-queimadas, e insira em outro frasco pré-pesado, pré-queimado e rotulado de 40 mL.
8. Repita 3.1 - 3,7 3x para todas as amostras.
9. Deixe as amostras extraídas secarem em seus frascos, tampas fora, e no capô, cobertos livremente com um pedaço de papel alumínio. Rotular como 'resíduo extraído' e armazenar.
10. Rotule os extratos combinados para cada amostra como 'TLE'.