Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Fonte: Laboratório de Jeff Salacup - Universidade de Massachusetts Amherst
Ao longo desta série de vídeos, amostras naturais foram extraídas e purificadas em busca de compostos orgânicos, chamados de biomarcadores, que podem relacionar informações sobre climas e ambientes do passado. Uma das amostras analisadas foi sedimento. Sedimentos se acumulam ao longo do tempo geológico em bacias, depressões na Terra nas quais os sedimentos fluem através da ação de fluido (água ou ar), movimento e gravidade. Existem dois tipos principais de bacias, marinha (oceanos e mares) e lacustrina (lagos). Como se pode imaginar, tipos muito diferentes de vida vivem nessas configurações, impulsionados em grande parte pela diferença de salinidade entre eles. Ao longo das últimas décadas, geoquímicos orgânicos descobriram uma caixa de ferramentas de proxies biomarcadores, ou compostos que podem ser usados para descrever o clima ou o meio ambiente, alguns dos quais trabalham em ambientes marinhos e alguns dos quais trabalham em lacustrina. Voltamos nossa atenção aqui para o reino lacustrina e tetraethers glicerol dialkyl gliceol ramificados (Figura1).
Nesta seção focamos na análise da paleotemperatura terrestre utilizando tetrathers de glicerol ramal(Figura 1; brGDGTs) e proxy MBT/CBT. Este proxy foi inicialmente descrito por Weijers et al. 1 e baseia-se na distribuição de estruturas de anéis e filiais em brGDGTs. Eles descobriram que a ciclização dos tetraetores ramificados (TCC) estava diretamente relacionada ao pH do solo.
CBT = -log ((Ib + IIb) / (I + II))
E que a metilação de tetraetores ramificados (MBT) foi determinada pela temperatura média anual do ar (MAAT) e, em menor grau, pelo pH do solo.
MBT = (I + Ib + Ic) / (I + Ib + Ic) + (II + IIb + IIc) + (III + IIIb + IIIc)
Assim, juntamente e calibrado, o MBT/TCC relaciona a distribuição de brGDGTs tanto à temperatura do solo quanto ao pH.
MBT = 0,122 + (0,187 x TCC) + (0,020 x MAAT)
Acredita-se que os GDGTs ramificados sejam lipídios de membrana e sua produção foi inicialmente atribuída a bactérias acidobactérias anaeróbicas que vivem em solos e turfa2-5,mas trabalhos subsequentes sugeriram que eles também poderiam ser produzidos em lagos oxicos e anoxicos e colunas de água marinha e sedimentos6-9. A hipótese sustenta que as acidobactérias transformam locais de metilação em ciclizações em resposta à redução da temperatura, a fim de aumentar a insaturação (a ciclização efetivamente remove dois átomos de hidrogênio) e manter a fluidez da membrana (por analogia, A gordura saturada (manteiga) é uma temperatura ambiente sólida, enquanto a gordura insaturada (azeite de oliva) é um líquido), mas os GDGTs ramificados ainda não foram identificados como os principais lipídios de membrana nas culturas de Acidobacteria. Assim, sua procedência exata é desconhecida.
Calibração de GDGTs ramificados para variáveis ambientais (temperatura, pH, salinidade, precipitação, etc.) é um tema de pesquisa generalizada. Laboratórios de geoquímica orgânica em todo o mundo estão envolvidos na tarefa de desenvolver calibrações globais1,10 e regionais11-13 entre GDGTs ramificados e (principalmente) temperatura. Assim, as equações dadas acima estão sendo regularmente refinadas e aperfeiçoadas.
GDGTs ramificados são geralmente extraídos de sedimentos lacotrinas, embora sedimentos marinhos costeiros também tenham sido investigados. Os extratos passam por uma coluna de gel de sílica para purificar os GDGTs de outros compostos que podem não ser amenáveis lc ou que podem co-elute com GDGTs cromatograficamente. Os GDGTs saem na fração polar que elutes em metanol.
Uma vez purificado o extrato lipídico total, a amostra extraída e purificada é executada em um cromatógrafo líquido de alto desempenho acoplado a um espectrômetro de massa de ionização química. A concentração relativa dos GDGTs é determinada pela obtenção da área sob a curva para o íon de massa selecionado (m/z; Figura 1) para cada um dos compostos em software de computador projetado para este fim (como Agilent Chemstation). Essas áreas são então colocadas na equação de calibração selecionada, a fim de chegar a uma determinação paleotemperatura.
Figura 1. Estruturas dos GDGTs ramificados utilizados para o cálculo da temperatura via proxy MBT/CBT (usado com permissão da Dra. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Compostos orgânicos chamados biomarcadores podem ser usados na Ciência da Terra como paleotermômetros para relacionar informações sobre climas e ambientes do passado.
Organismos vivos produzem esses biomarcadores, que nos fornecem informações sobre o ambiente em que viviam. Eles podem agir como um proxy para nos dizer informações sobre eventos passados, como a temperatura da Terra milhões de anos atrás.
A paleotemperatura terrestre pode ser analisada usando biomarcadores encontrados em sedimentos de bacias de água doce. Uma classe chave desses biomarcadores são tetraeadores de glicerol de glicerol ramificados ou GDGTs ramificados.
Este vídeo apresentará a área de estudo, chamada paleoclimatologia, que investiga mudanças passadas em ambientes de água doce ao longo de centenas de milhões de anos. Isso ajuda a elucidar as mudanças climáticas e ambientais atuais e futuras.
Sedimentos se acumulam ao longo do tempo geológico, devido ao movimento e gravidade dos fluidos, em bacias sedimentares, ou áreas baixas na crosta terrestre. As bacias sedimentares incluem oceanos, que coletam sedimentos marinhos, ou lagos, que coletam sedimentos lacodários. Bacias marinhas e lacotrinas contêm diferentes tipos de organismos, impulsionados em grande parte pela diferença de salinidade entre eles. Assim, as bacias marinhas e lacotrinas contêm diferentes biomarcadores.
Acredita-se que os GDGTs ramificados sejam lipídios de membrana de acidóbas anaeróbicas. Pesquisas sugerem que os organismos produtores mudam as propriedades da membrana em resposta à mudança de temperatura.
Essa mudança é causada pela transformação de sítios metilados nos GDGT ramificados para locais ciclizados a temperaturas mais frias, aumentando assim a fluidez da membrana. Essa mudança na estrutura pode então ser correlacionada com a temperatura através de um proxy. Proxies são fenômenos físicos mensuráveis que estão correlacionados a variáveis imensuráveis.
Este proxy relaciona o número de metilações ou MBT, e ciclizações, ou TCC, no biomarcador à temperatura. Uma equação derivada experimentalmente pode relacionar MBT e TCC com a temperatura média anual do ar.
Para estudar a relação entre biomarcadores GDGT ramificados e temperatura do solo, deve-se coletar sedimentos lacotrinas, extraídos por uma das três técnicas, purificadas e analisadas.
Para começar a estudar a relação entre biomarcadores GDGT ramificados e temperatura do solo, as moléculas lipídicas são primeiramente extraídas de sedimentos lacotrinas, usando uma variedade de técnicas. A extração via sônica é o método mais simples e menos caro de obter o extrato lipídedo total, ou TLE, a partir de uma amostra de sedimentos. Para isso, um banho ultrassônico é usado para agitar a amostra em um frasco contendo solvente orgânico. Uma mistura de metanol e diclorometano é usada para extrair biomarcadores com uma ampla gama de polaridades. Outra técnica de extração utiliza a extração de Soxhlet. Um extrator Soxhlet permite o refluxo, ou ciclismo contínuo, de solvente orgânico de um frasco de fundo redondo para cima em um condensador, que é resfriado por água fria e devolvido. O solvente condensado cai em um dedal de fibra de vidro contendo a amostra. Uma vez cheia, a câmara desliza o solvente orgânico de volta para o frasco de fundo redondo, permitindo a extração contínua ao longo do tempo.
Esta técnica é útil na extração de grandes massas de sedimentos, e na elaboração de grandes volumes de padrões para calibração de instrumentos. Finalmente, a extração acelerada de solventes, ou ASE, é um método de extração registrado que utiliza alta temperatura e pressão para aumentar a cinética do processo de extração. O instrumento ASE contém até 24 amostras individuais e permite o controle preciso de todos os parâmetros no processo de extração. Devido à sua velocidade e simplicidade de uso, o ASE é comumente usado como o método padrão de extração de solventes.
Uma vez que a amostra lipídica é extraída usando uma dessas técnicas, ela é purificada na preparação para análise. Tipicamente, a cromatografia da coluna de gel de sílica é usada para purificar a amostra lipídica com base em sua polaridade. Para isso, uma pequena coluna de vidro é carregada com um pó fino de sílica, chamado de gel. A coluna é então saturada com um solvente apolar, tipicamente hexano, e, em seguida, a amostra carregada na parte superior. A separação do extrato baseia-se na afinidade do composto alvo para a fase sólida ou para a fase do solvente.
Compostos polares, neste caso ramificados GDGT, são mais atraídos pela sílica polar do que o hexano apolar. Assim, os compostos apolares, como hidrocarbonetos, os compostos médios polares, como cetonas e álcoois, e os compostos altamente polares, viajarão a coluna a diferentes taxas e em resposta a solventes de crescente polaridade.
Os eluentes são então coletados em frações separadas.
Os GDGT purificados são então analisados usando cromatografia líquida de alto desempenho acoplada a um espectrômetro de massa, ou LC-MS. O LC-MS primeiro separa os compostos e, em seguida, analisa-os com base em sua relação massa-carga.
Isso permite a determinação da concentração relativa de cada tipo de GDGT utilizando a área sob a curva para o íon de massa selecionado. O MBT é calculado como a fração das moléculas do grupo 1 para o total.
A TCC é então calculada como um tronco negativo usando moléculas nos grupos 1 e 2. MBT e TCC são então conectados a uma equação derivada experimentalmente, a fim de chegar a uma determinação paleotemperatura.
A determinação da paleotemperatura usando proxies biomarcadores é útil em uma série de aplicações na ciência da Terra.
Primeiro, a paleotermmetria permite a determinação da temperatura da Terra por longos períodos de tempo. Usando várias técnicas, a temperatura da Terra foi estimada em 500 milhões de anos. Isso nos diz o envelope de temperatura dentro do qual diferentes formas de vida evoluíram e informa investigações sobre os efeitos da temperatura na biosfera, hidrosfera, litosfera e atmosfera da Terra no passado, e por extensão, o futuro.
Tendências mais recentes na temperatura da Terra também podem ser quantificadas contra registros construídos usando paleotermometria. A temperatura da superfície da Terra aumentou quase 1 grau de 1850 até o presente com uma tendência de aquecimento acentuada nas últimas duas décadas. Para entender o impacto antropogênico no clima global, registros paleoclima precisos devem ser desenvolvidos e usados como contexto.
Você acabou de assistir a visão geral da JoVE sobre a Paleotermometria de Gliceol Dialkyl Glycerol Tetraether. Agora você deve entender como os biomarcadores GDGT ramificados são usados, e a técnica geral de extraí-los e purificá-los. Os vídeos a seguir desta série entrarão em mais detalhes sobre este processo complexo.
Obrigado por assistir!
Compostos orgânicos chamados biomarcadores podem ser usados na Ciência da Terra como paleotermômetros para relacionar informações sobre climas e ambientes do passado.
Organismos vivos produzem esses biomarcadores, que nos fornecem informações sobre o ambiente em que viviam. Eles podem agir como um proxy para nos dizer informações sobre eventos passados, como a temperatura da Terra milhões de anos atrás.
A paleotemperatura terrestre pode ser analisada usando biomarcadores encontrados em sedimentos de bacias de água doce. Uma classe chave desses biomarcadores são tetraeadores de glicerol de glicerol ramificados ou GDGTs ramificados.
Este vídeo apresentará a área de estudo, chamada paleoclimatologia, que investiga mudanças passadas em ambientes de água doce ao longo de centenas de milhões de anos. Isso ajuda a elucidar as mudanças climáticas e ambientais atuais e futuras.
Sedimentos se acumulam ao longo do tempo geológico, devido ao movimento e gravidade dos fluidos, em bacias sedimentares, ou áreas baixas na crosta terrestre. As bacias sedimentares incluem oceanos, que coletam sedimentos marinhos, ou lagos, que coletam sedimentos lacodários. Bacias marinhas e lacotrinas contêm diferentes tipos de organismos, impulsionados em grande parte pela diferença de salinidade entre eles. Assim, as bacias marinhas e lacotrinas contêm diferentes biomarcadores.
Acredita-se que os GDGTs ramificados sejam lipídios de membrana de acidóbas anaeróbicas. Pesquisas sugerem que os organismos produtores mudam as propriedades da membrana em resposta à mudança de temperatura.
Essa mudança é causada pela transformação de sítios metilados nos GDGT ramificados para locais ciclizados a temperaturas mais frias, aumentando assim a fluidez da membrana. Essa mudança na estrutura pode então ser correlacionada com a temperatura através de um proxy. Proxies são fenômenos físicos mensuráveis que estão correlacionados a variáveis imensuráveis.
Este proxy relaciona o número de metilações ou MBT, e ciclizações, ou TCC, no biomarcador à temperatura. Uma equação derivada experimentalmente pode relacionar MBT e TCC com a temperatura média anual do ar.
Para estudar a relação entre biomarcadores GDGT ramificados e temperatura do solo, deve-se coletar sedimentos lacotrinas, extraídos por uma das três técnicas, purificadas e analisadas.
Para começar a estudar a relação entre biomarcadores GDGT ramificados e temperatura do solo, as moléculas lipídicas são primeiramente extraídas de sedimentos lacotrinas, usando uma variedade de técnicas. A extração via sônica é o método mais simples e menos caro de obter o extrato lipídedo total, ou TLE, a partir de uma amostra de sedimentos. Para isso, um banho ultrassônico é usado para agitar a amostra em um frasco contendo solvente orgânico. Uma mistura de metanol e diclorometano é usada para extrair biomarcadores com uma ampla gama de polaridades. Outra técnica de extração utiliza a extração de Soxhlet. Um extrator Soxhlet permite o refluxo, ou ciclismo contínuo, de solvente orgânico de um frasco de fundo redondo para cima em um condensador, que é resfriado por água fria e devolvido. O solvente condensado cai em um dedal de fibra de vidro contendo a amostra. Uma vez cheia, a câmara desliza o solvente orgânico de volta para o frasco de fundo redondo, permitindo a extração contínua ao longo do tempo.
Esta técnica é útil na extração de grandes massas de sedimentos, e na elaboração de grandes volumes de padrões para calibração de instrumentos. Finalmente, a extração acelerada de solventes, ou ASE, é um método de extração registrado que utiliza alta temperatura e pressão para aumentar a cinética do processo de extração. O instrumento ASE contém até 24 amostras individuais e permite o controle preciso de todos os parâmetros no processo de extração. Devido à sua velocidade e simplicidade de uso, o ASE é comumente usado como o método padrão de extração de solventes.
Uma vez que a amostra lipídica é extraída usando uma dessas técnicas, ela é purificada na preparação para análise. Tipicamente, a cromatografia da coluna de gel de sílica é usada para purificar a amostra lipídica com base em sua polaridade. Para isso, uma pequena coluna de vidro é carregada com um pó fino de sílica, chamado de gel. A coluna é então saturada com um solvente apolar, tipicamente hexano, e, em seguida, a amostra carregada na parte superior. A separação do extrato baseia-se na afinidade do composto alvo para a fase sólida ou para a fase do solvente.
Compostos polares, neste caso ramificados GDGT, são mais atraídos pela sílica polar do que o hexano apolar. Assim, os compostos apolares, como hidrocarbonetos, os compostos médios polares, como cetonas e álcoois, e os compostos altamente polares, viajarão a coluna a diferentes taxas e em resposta a solventes de crescente polaridade.
Os eluentes são então coletados em frações separadas.
Os GDGT purificados são então analisados usando cromatografia líquida de alto desempenho acoplada a um espectrômetro de massa, ou LC-MS. O LC-MS primeiro separa os compostos e, em seguida, analisa-os com base em sua relação massa-carga.
Isso permite a determinação da concentração relativa de cada tipo de GDGT utilizando a área sob a curva para o íon de massa selecionado. O MBT é calculado como a fração das moléculas do grupo 1 para o total.
A TCC é então calculada como um tronco negativo usando moléculas nos grupos 1 e 2. MBT e TCC são então conectados a uma equação derivada experimentalmente, a fim de chegar a uma determinação paleotemperatura.
A determinação da paleotemperatura usando proxies biomarcadores é útil em uma série de aplicações na ciência da Terra.
Primeiro, a paleotermmetria permite a determinação da temperatura da Terra por longos períodos de tempo. Usando várias técnicas, a temperatura da Terra foi estimada em 500 milhões de anos. Isso nos diz o envelope de temperatura dentro do qual diferentes formas de vida evoluíram e informa investigações sobre os efeitos da temperatura na biosfera, hidrosfera, litosfera e atmosfera da Terra no passado, e por extensão, o futuro.
Tendências mais recentes na temperatura da Terra também podem ser quantificadas contra registros construídos usando paleotermometria. A temperatura da superfície da Terra aumentou quase 1 grau de 1850 até o presente com uma tendência de aquecimento acentuada nas últimas duas décadas. Para entender o impacto antropogênico no clima global, registros paleoclima precisos devem ser desenvolvidos e usados como contexto.
Você acabou de assistir a visão geral da JoVE sobre a Paleotermometria de Gliceol Dialkyl Glycerol Tetraether. Agora você deve entender como os biomarcadores GDGT ramificados são usados, e a técnica geral de extraí-los e purificá-los. Os vídeos a seguir desta série entrarão em mais detalhes sobre este processo complexo.
Obrigado por assistir!
Compostos orgânicos chamados biomarcadores podem ser usados em Ciências da Terra como paleotermômetros para relacionar informações sobre climas e ambientes do passado.
Os organismos vivos produzem esses biomarcadores, que nos fornecem informações sobre o ambiente em que viviam. Eles podem atuar como um "proxy" para nos dar informações sobre eventos passados, como a temperatura da Terra há milhões de anos.
A paleotemperatura terrestre pode ser analisada usando biomarcadores encontrados em sedimentos de bacias de água doce. Uma classe-chave desses biomarcadores são os tetraéteres de glicerol dialquil glicerol ramificados, ou GDGTs ramificados.
Este vídeo apresentará a área de estudo, chamada paleoclimatologia, que investiga mudanças passadas em ambientes de água doce ao longo de centenas de milhões de anos. Isso ajuda a elucidar as mudanças climáticas e ambientais atuais e futuras.
Os sedimentos se acumulam ao longo do tempo geológico, devido ao movimento e à gravidade dos fluidos, em bacias sedimentares ou áreas baixas na crosta terrestre. As bacias sedimentares incluem oceanos, que coletam sedimentos marinhos, ou lagos, que coletam sedimentos lacustres. As bacias marinhas e lacustres contêm diferentes tipos de organismos, impulsionados em grande parte pela diferença de salinidade entre eles. Assim, as bacias marinhas e lacustres contêm diferentes biomarcadores.
Acredita-se que os GDGTs ramificados sejam lipídios que atravessam a membrana de acidobactérias anaeróbicas. A pesquisa sugere que os organismos produtores mudam as propriedades da membrana em resposta à mudança de temperatura.
Essa mudança é causada pela transformação de sítios metilados nos GDGT?s ramificados em locais ciclizados em temperaturas mais frias, aumentando assim a fluidez da membrana. Essa mudança na estrutura pode então ser correlacionada à temperatura por meio de um proxy. Proxies são fenômenos físicos mensuráveis que estão correlacionados a variáveis imensuráveis.
Este proxy relaciona o número de metilações ou MBT e ciclizações, ou CBT, no biomarcador à temperatura. Uma equação derivada experimentalmente pode relacionar MBT e CBT com a temperatura média anual do ar passada.
Para estudar a relação entre biomarcadores GDGT ramificados e a temperatura do solo, sedimentos lacustres devem ser coletados, extraídos por uma das três técnicas, purificados e analisados.
Para começar a estudar a relação entre biomarcadores GDGT ramificados e a temperatura do solo, as moléculas lipídicas são primeiro extraídas de sedimentos lacustres, usando uma variedade de técnicas. A extração por sonicação é o método mais simples e menos dispendioso de obter o extrato lipídico total, ou TLE, de uma amostra de sedimento. Para isso, um banho ultrassônico é usado para agitar a amostra em um frasco contendo solvente orgânico. Uma mistura de metanol e diclorometano é usada para extrair biomarcadores com uma ampla gama de polaridades. Outra técnica de extração utiliza a extração de Soxhlet. Um extrator Soxhlet permite o refluxo, ou ciclo contínuo, de solvente orgânico de um frasco de fundo redondo para cima em um condensador, que é resfriado por água fria e retornado. O solvente condensado cai em um dedal de fibra de vidro contendo a amostra. Uma vez cheia, a câmara suga o solvente orgânico de volta para o balão de fundo redondo, permitindo uma extração contínua ao longo do tempo.
Esta técnica é útil na extração de grandes massas de sedimentos e na preparação de grandes volumes de padrões para calibração de instrumentos. Finalmente, a extração acelerada por solvente, ou ASE, é um método de extração de marca registrada que utiliza alta temperatura e pressão para aumentar a cinética do processo de extração. O instrumento ASE comporta até 24 amostras individuais e permite o controle preciso de todos os parâmetros no processo de extração. Devido à sua velocidade e simplicidade de uso, o ASE é comumente usado como o método padrão de extração por solvente.
Uma vez que a amostra lipídica é extraída usando uma dessas técnicas, ela é purificada em preparação para análise. Normalmente, a cromatografia em coluna de sílica gel é usada para purificar a amostra lipídica com base em sua polaridade. Para isso, uma pequena coluna de vidro é carregada com um pó fino de sílica, chamado gel. A coluna é então saturada com um solvente apolar, normalmente hexano, e então a amostra carregada no topo. A separação do extrato é baseada na afinidade do composto-alvo para a fase sólida ou para a fase solvente.
Os compostos polares, neste caso GDGTs ramificados, são mais atraídos pela sílica polar do que pelo hexano apolar. Assim, os compostos apolares, como hidrocarbonetos, os compostos polares médios, como cetonas e álcoois, e os compostos altamente polares, percorrerão a coluna em taxas diferentes e em resposta a solventes de polaridade crescente.
Os eluentes são então coletados em frações separadas.
Os GDGTs purificados são então analisados usando cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a um espectrômetro de massa, ou LC-MS. LC-MS primeiro separa os compostos e depois os analisa com base em sua relação massa-carga.
Isso permite a determinação da concentração relativa de cada tipo de GDGT usando a área sob a curva para o íon de massa selecionado. O MBT é calculado como a fração das moléculas do grupo 1 em relação ao total.
A TCC é então calculada como um log negativo usando moléculas nos grupos 1 e 2. MBT e CBT são então conectados a uma equação derivada experimentalmente, a fim de chegar a uma determinação de paleotemperatura.
A determinação da paleotemperatura usando proxies de biomarcadores é útil em uma variedade de aplicações em ciências da terra.
Primeiro, a paleotermometria permite a determinação da temperatura da Terra por longos períodos de tempo. Usando várias técnicas, a temperatura da Terra foi estimada em 500 milhões de anos. Isso nos diz o envelope de temperatura dentro do qual diferentes formas de vida evoluíram e informa as investigações dos efeitos da temperatura na biosfera, hidrosfera, litosfera e atmosfera da Terra no passado e, por extensão, no futuro.
Tendências mais recentes na temperatura da Terra também podem ser quantificadas em relação a registros construídos usando paleotermometria. A temperatura da superfície da Terra aumentou quase 1 grau de 1850 até o presente, com uma tendência de aquecimento acentuada nas últimas duas décadas. Para entender o impacto antropogênico no clima global, registros paleoclimáticos precisos devem ser desenvolvidos e usados como contexto.
Você acabou de assistir a Visão geral da JoVE sobre a paleotermometria ramificada de glicerol dialquil glicerol tetraéter. Agora você deve entender como os biomarcadores GDGT ramificados são usados e a técnica geral de extraí-los e purificá-los. Os vídeos a seguir desta série entrarão em mais detalhes sobre esse processo complexo.
Obrigado por assistir!
Earth Science
27.8K Visualizações
Earth Science
34.0K Visualizações
Earth Science
49.5K Visualizações
Earth Science
53.8K Visualizações
Earth Science
40.0K Visualizações
Earth Science
42.0K Visualizações
Earth Science
34.2K Visualizações
Earth Science
7.9K Visualizações
Earth Science
13.1K Visualizações
Earth Science
19.9K Visualizações
Earth Science
13.1K Visualizações
Earth Science
10.6K Visualizações
Earth Science
13.5K Visualizações
Earth Science
6.9K Visualizações
