Reação em cadeia da polimerase quantitativa para enumerar bacteriófagos

Prepare a pré-mistura de qPCR para 10 amostras de fagos biopanned de concentração desconhecida e 7 amostras de concentrações padrão em triplicata, resultando em uma pré-mistura para 51 amostras contendo 255 microlitros de qPCR Master Mix, 51 microlitros de primers e 102 microlitros de água.

Alíquota de 8 microlitros da mistura de PCR preparada em 51 poços de uma placa qPCR de 96 poços. Em seguida, adicione dois microlitros de amostras de fagos T7 tratadas termicamente a cada um desses poços, dispensando-os abaixo da superfície da pré-mistura de qPCR. Usando filme adesivo, sele a placa.

Enrole a placa em papel alumínio para minimizar o fotobranqueamento de fluorescência e, em seguida, prossiga para executar a placa no equipamento qPCR. Defina as condições de ciclo e as configurações da curva de fusão conforme descrito no protocolo de texto.