Modelagem da colonização de células de câncer de ovário do omento: um método ex vivo para estabelecer a colonização por manchas leitosas de células de câncer de ovário marcadas com fluorescência em explantes de omento murino

O omento, um tecido rico em tecido adiposo dentro da cavidade peritoneal, consiste em depósitos de gordura que fornecem um microambiente adequado para as células cancerígenas metastáticas colonizarem e formarem tumores secundários. Para estudar essa colonização ex vivo, comece posicionando uma inserção de cultura de células membranosas permeáveis dentro de uma placa de cultura.

Aplique um adesivo de tecido sobre a região interna da membrana de inserção. Coloque um explante omental de camundongo no adesivo para imobilizar o tecido. Semeie suavemente uma suspensão de células de câncer de ovário marcadas com fluorescência em cima do omento.

Em seguida, encha as laterais do poço com um meio adequado para complementar o crescimento celular e incube pelo tempo desejado. O tecido omental contém estruturas especializadas chamadas manchas leitosas, que são aglomerados de células imunes agrupadas em torno de redes de vasos sanguíneos. Essas células imunológicas secretam certos fatores químicos que atraem as células cancerígenas e promovem sua implantação. As células cancerígenas colonizadas proliferam, simulando condições metastáticas.

Por fim, descarte a mídia gasta. Observe a cultura usando um microscópio fluorescente para avaliar as colônias de células cancerígenas fluorescentes dentro do tecido omental.

Cultive e prepare células marcadas com fluorescência e ressuspenda a uma concentração de 2 milhões de células por mililitro. Aplique aproximadamente 6 microlitros do adesivo tecidual na membrana do inserto de cultura e deixe secar ao ar. Em seguida, lave a membrana duas vezes com água estéril para remover qualquer excesso de adesivo antes de secar as membranas ao ar sob uma capa laminar.

Extirpar cuidadosamente o omenta e fixá-lo à membrana revestida com adesivo usando uma pinça estéril. Depois de permitir que o tecido adira à membrana por um minuto, adicione 500 microlitros da suspensão celular em cima de cada omento em cada inserto de cultura.

Em seguida, preencha a área ao redor da câmara do poço com 2,5 mililitros de meio DME/F-12. Incubar a omenta com suspensão celular por seis horas a 37 graus Celsius em um ambiente de 5% de CO2. Remova e lave cuidadosamente a omenta com cerca de 10 mililitros de PBS. Finalmente, visualize focos de células cancerígenas fluorescentes usando um sistema de imagem fluorescente apropriado.