Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 4:59 min. • April 30th, 2023
Os neutrófilos de baixa densidade, ou LDNs, são uma subpopulação distinta de neutrófilos encontrada em números elevados durante condições patológicas como câncer gastrointestinal. Os LDNs podem ser isolados das lavagens da cavidade peritoneal ou do fluido de lavagem dos pacientes.
Primeiro, filtre o fluido de lavagem para remover os detritos do tecido. Centrifugar o filtrado para obter um sedimento contendo células sanguíneas, incluindo LDNs. Ressuspendê-lo num tampão adequado. Colocar esta suspensão sobre um meio de gradiente de densidade adequado, ideal para isolamento LDN.
Centrifugue para separar os diferentes componentes do sangue com base em suas densidades relativas. As hemácias mais densas formam a camada inferior, enquanto a fração de plasma menos densa forma a camada superior. Os LDNs menos densos ocupam a camada intermediária junto com outras células mononucleares.
Transferir a camada intermédia para um novo tubo contendo um reagente bloqueador. Os componentes do reagente bloqueiam locais de ligação não específicos em todas as superfícies de células não-alvo e aumentam a especificidade para LDN durante a marcação subsequente.
Adicione microesferas conjugadas com anticorp
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