Colheita de DRG da Coluna de Rato: Um Procedimento para Extrair o Gânglio da Raiz Dorsal da Coluna de um Modelo de Rato

Os gânglios da raiz dorsal ou DRG são aglomerados de corpos celulares de neurônios sensoriais alojados nas vértebras de ambos os lados da medula espinhal. Sua função principal é transmitir sinais neuronais sensoriais do sistema nervoso periférico para o sistema nervoso central.

Para isolar os gânglios da raiz dorsal, comece pegando uma espinha de rato recém-colhida. Disseque a coluna para separar as regiões cervical, torácica e lombar. Mantenha as seções da coluna em um tampão adequado para garantir a hidratação do tecido.

Agora, posicione a seção torácica com o lado dorsal voltado para cima. Divida a seção em duas metades laterais. Em seguida, prenda a metade dissecada do segmento da coluna, com o lado medial para cima. Separe suavemente a medula espinhal dividida - uma estrutura tubular longa - dos ossos vertebrais segmentados da seção para revelar o DRG subjacente.

O DRG aparece como massas brancas distintas com raízes dorsais e ventrais embutidas no canal vertebral. Com uma pinça fina, puxe cuidadosamente o DRG para desalojá-lo do canal espinhal. Por fim, transfira o DRG coletado para um meio adequado para outras aplicações downstream.

Limpe a pele dorsal de um rato sacrificado com etanol a 70% e use uma tesoura para remover a coluna. Separe as regiões cervical, torácica e lombar e coloque as seções da coluna em uma placa de cultura de 10 centímetros com PBS para manter as amostras de tecido hidratadas.

Usando uma tesoura de osso delicada, abra os ossos vertebrais torácicos e cervicais nos aspectos dorsal e ventral para separar a coluna em duas metades laterais e coloque as seções de tecido em um prato limpo de 10 centímetros com PBS fresco. Usando uma pinça, separe suavemente a medula espinhal dos ossos vertebrais para visualizar os gânglios da raiz dorsal.

Colocando as pontas de um par de pinças finas presas sob cada gânglio, segure o tecido e puxe-o da cavidade óssea em que está alojado. Imediatamente após a colheita, coloque cada gânglio em meio de cultura DMEM suplementado com 2% de penicilina e estreptomicina ou caneta / estreptococo e 10% de soro fetal bovino ou FBS para ajudar a prevenir a contaminação bacteriana dos tecidos nervosos.