Um ensaio in vitro para avaliar o impacto imunomodulador dos monócitos na proliferação de leucócitos
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 2:46 min. • July 8th, 2025
Pegue uma placa de vários poços com cultura de células-tronco mesenquimais aderentes, ou MSC.
Adicione células mononucleares do sangue periférico, ou PBMCs, e incube.
As CTMs secretam fator de crescimento de hepatócitos, induzindo os monócitos a adquirir um fenótipo imunomodulador, produzindo interleucina-10 ou IL-10.
Transferir o sobrenadante contendo PBMC para um tubo.
Adicione grânulos magnéticos revestidos com anticorpos ao marcador de superfície de monócitos CD14.
Use um separador magnético para isolar os monócitos CD14+ e adicione-os a poços de placas de vários poços em concentrações crescentes.
Introduza células T CD4+ efetoras marcadas com CFSE de corante fluorescente.
Adicione microesferas conjugadas com anticorpos ligando-se especificamente aos marcadores de superfície de células T CD3 e CD28, ativando as células.
No controle de monócitos bem ausentes, as células T ativadas proliferam, com cada divisão celular diminuindo a intensidade de fluorescência do CFSE nas células-filhas.
No entanto, em co-culturas, os monócitos induzidos por MSC secretam IL-10, suprimindo a proliferação de células T efetoras.
Usando citometria de fluxo, observe menos células T exibindo intensidade
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