Co-cultura de um explante de gânglio da raiz dorsal com células de Schwann para mielinização de neurônios

Comece com uma placa de vários poços contendo uma lamínula revestida com poli-D-lisina e um meio de crescimento de neurônios.

Coloque o gânglio da raiz dorsal embrionária do camundongo, ou DRG, rico em neurônios sensoriais, neste poço e incuba.

Os neurônios DRG utilizam os nutrientes e fatores de crescimento que facilitam seu crescimento, seguidos pela extensão das projeções neuronais, formando axônios.

Esses axônios crescem a partir do tecido DRG, estabelecendo a cultura de explante DRG.

Substitua o meio por um meio de co-cultura suplementado com ácido ascórbico por células de Schwann, uma célula glial especializada.

Com o tempo, os axônios secretam moléculas de sinalização que desencadeiam a migração das células de Schwann em direção aos axônios.

Enquanto isso, o ácido ascórbico estimula várias vias de sinalização nas células de Schwann.

Essas células ativadas começam a estender suas membranas plasmáticas ricas em lipídios ao redor dos axônios, envolvendo-as em várias camadas para formar a bainha de mielina.

Essa mielinização resulta em uma cobertura isolante ao redor dos axônios, o que é essencial para uma comunicação neuronal eficiente.

Pegue uma placa de quatro poços contendo 190 microlitros de meio de crescimento DRG em cada poço e transfira cuidadosamente um único DRG para o centro de cada poço usando uma pinça fina e uma espátula. Em seguida, coloque as culturas de explante DRG na incubadora a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono. No dia seguinte, adicione cuidadosamente 50 microlitros do meio de crescimento DRG a cada poço e observe a aderência do explante DRG e o crescimento do axônio usando um microscópio diariamente. Para co-cultura no terceiro dia da cultura de explante DRG, substituiu cuidadosamente o meio de crescimento DRG por 250 microlitros do meio de co-cultura contendo 30.000 células de Schwann por poço.