Estabelecendo uma cultura de células gliais de Müller obtida de retinas de camundongos

Pegue retinas de camundongos contendo células Müller Glial, ou MG, e neurônios.

Coloque-os em uma solução de dissociação com enzimas digestivas e incube com um balanço suave para garantir uma distribuição uniforme das enzimas.

Essas enzimas quebram a matriz extracelular, separando células individuais.

Pipete as retinas para cima e para baixo várias vezes para liberar as células.

Adicione um inibidor para interromper a atividade enzimática e centrifugue.

Descarte o sobrenadante.

Ressuspenda as células em meios contendo um fator de crescimento específico das células MG.

Transfira as células para um poço e incuba.

Com o tempo, o fator de crescimento no meio facilita o crescimento e a multiplicação das células MG, enquanto as células neuronais que não se dividem perecem.

Remova a mídia. Lave com um tampão de sal.

Incube com uma enzima digestiva para separar as células do poço.

Recolha as células num tubo e centrifugue.

Descarte o sobrenadante que contém as células neuronais mortas.

Ressuspenda as células MG em meio para análise posterior.

Prepare a mistura de dissociação de papaína DNase I conforme descrito no manuscrito. Agora, com uma pipeta de transferência com ponta alargada, pegue