Estimulação transespinhal por corrente contínua do motoneurônio espinhal de um rato

Comece colocando uma esponja embebida em solução salina na vértebra torácica-12 de um rato preparado para o procedimento.

Posicione um eletrodo sobre ele para estimulação de corrente contínua transespinhal ou tsDCS, que envolve a aplicação de uma corrente contínua através da medula espinhal.

Para medir o registro intracelular de um motoneurônio alvo durante a ETCC, insira um microeletrodo na medula espinhal no local de sua origem.

Avalie o potencial de membrana basal do motoneurônio e a frequência dos impulsos elétricos para garantir que o microeletrodo esteja posicionado com segurança para medições precisas durante o tsDCS.

Aplique tsDCS anódico, onde íons carregados positivamente entram no neurônio à medida que a corrente flui do ânodo através do tecido para o cátodo.

Aplique tsDCS catódico, onde íons carregados negativamente entram no neurônio à medida que a corrente flui na direção inversa.

Registre as mudanças nas propriedades elétricas do motoneurônio durante a tsDCS anódica e catódica.

Para colocar os eletrodos de estimulação por corrente contínua transespinhal, coloque uma esponja embebida em solução salina no lado dorsal da vértebra TH-12 e use manipulação fina para pressionar a esponja com um eletrodo de estimulação de corrente contínua transespinhal ativo. Em seguida, monte um microeletrodo puxado sob medida no micromanipulador, permitindo um movimento de passo de 1 a 2 mícrons e calibração estereotáxica, e insira uma ponta de micropipeta em um patch selecionado no PR em um ângulo médio-lateral de 15 a 20 graus.

Para registrar a membrana do neurônio motor e as propriedades de disparo, no modo ponte do amplificador intracelular, estimule os respectivos ramos nervosos a identificar o neurônio motor com base na aparência de tudo ou nada do potencial de ação antidrômico.

No modo de pinça de corrente descontínua do amplificador intracelular com um modo de taxa de comutação de corrente de 4 a 8 kilohertz, use pulsos de corrente despolarizante intracelular de 0,5 milissegundo para evocar um potencial de ação ortodrômica em um neurônio motor.

Para calcular a resistência de entrada da célula, estimule um neurônio motor com 40 pulsos curtos de 100 milissegundos de corrente hiperpolarizante de 1 nanoamper. Para determinar o valor da reobase como a amplitude mínima da corrente despolarizante necessária para provocar um único pico, estimule um neurônio motor com pulsos de onda quadrada de 50 milissegundos em amplitudes crescentes.

Em seguida, injete pulsos de onda quadrada de 500 milissegundos de corrente despolarizante em amplitudes crescentes em passos de 0,122 nanoamperes para evocar descargas rítmicas de neurônios motores. Para estimulação transespinhal por corrente contínua, inicie os procedimentos de polarização por aplicação transespinhal de corrente contínua, mantendo uma penetração estável do neurônio motor.