Registro in vivo de fibras C do nervo ciático em ratos

Pegue um rato anestesiado e faça uma incisão em sua coxa para expor o nervo ciático, um nervo periférico que fornece suprimento sensorial e motor aos membros inferiores.

Aplique uma solução fisiológica para manter o tecido exposto umedecido.

Suturar a pele incisa a um aro de metal, criando uma câmara para medições eletrofisiológicas.

Coloque uma plataforma sob o nervo para aumentar a visibilidade do nervo. Aplique parafina líquida para evitar que o nervo seque.

Coloque um eletrodo de referência por via subcutânea para estabelecer uma atividade elétrica de linha de base.

Remova a cobertura do nervo membranoso para expor as fibras C. Suspenda uma única fibra sobre um eletrodo de gravação.

Aplique estímulos mecânicos e térmicos no pé e observe a resposta da fibra a ambos, confirmando-a como uma fibra C polimodal.

Eletrodos de estímulo de implante no pé para estimulação direcionada de fibra única.

A estimulação gera potenciais de ação que viajam ao longo da fibra e são monitorados pelo eletrodo de registro.

Para iniciar este procedimento, prepare e desinfete todos os instrumentos cirúrgicos, antes da cirurgia. Em seguida, prepare de um a dois litros de solução extracelular de Ringer normal e armazene a quatro graus Celsius até o uso. Para expor o tronco do nervo ciático para registro primeiro, abra a pele e os músculos do rato anestesiados na parte dorsal da coxa. Em seguida, faça uma dissecção romba ao longo do bíceps femoral.

Isole cuidadosamente o tronco do nervo ciático usando uma tesoura oftálmica e uma agulha de separação de vidro e mantenha o tecido úmido usando a solução de Ringer. Em seguida, fixe o animal em um aro de metal caseiro costurando a pele na fenda ao redor dele.

Puxe a pele ligeiramente para cima, para estabelecer um banho fluido. Exponha 1 centímetro do tronco do nervo ciático no lado proximal. Coloque uma pequena plataforma marrom sob o tronco nervoso para aumentar o contraste, a fim de observar claramente o tronco nervoso fino. Em seguida, aplique um pouco de parafina líquida quente na parte superior do tronco nervoso para evitar o ressecamento da superfície da fibra. Remova o fluido se houver uma exsudação ao redor do tronco nervoso.

Para realizar a gravação, selecione um filamento de platina como eletrodo de gravação. Aqueça e crie um pequeno gancho no final. Em seguida, conecte o eletrodo a um micromanipulador. No banho, coloque um eletrodo de referência próximo ao tecido subcutâneo. Divida a dura-máter espinhal e a pia-máter e obtenha o nervo ciático. Sob um estereomicroscópio com ampliação de 25%, pegue um fascículo fino e suspenda a extremidade proximal do axônio no gancho do eletrodo de registro.

Identifique o campo receptivo de uma única fibra C nociceptiva usando um estímulo mecânico e um estímulo térmico. Se o disparo da fibra nervosa responder aos estímulos mecânicos e à água quente, considere-a como uma fibra C polimodal não receptiva.

Em seguida, insira dois eletrodos de estímulo de agulha com um intervalo de dois milímetros na pele do campo identificado para a entrega de estímulos elétricos. Exiba a forma de onda de um potencial de ação no osciloscópio e empregue uma placa A/D de computador com uma taxa de amostragem de sinal de 20 kilohertz. Em seguida, registre os picos usando um software de aquisição de dados e analise-os posteriormente com um software profissional.