Induzindo lesão traumática em uma fatia de cérebro usando um dispositivo de tubo de choque

Comece com uma configuração de tubo de choque compreendendo uma seção de acionamento proximal, um conjunto de culatra de diafragma e uma seção de acionamento distal com sensores de pressão e um suporte de amostra.

O dispositivo é conectado a um cilindro de gás pressurizado através da unidade de controle.

Insira uma haste cega no sample suporte para alinhá-lo com a saída do tubo de choque.

Conecte os sensores de pressão a um dispositivo de gravação.

Mantenha o controle do tubo de choque fechado e abra a saída do cilindro de gás para aumentar a pressão na unidade de controle.

Prenda um diafragma de folha de poliéster no conjunto da culatra.

Colocar um saco contendo uma membrana com fatias de cérebro num meio experimental no suporte da amostra.

Abra o botão de controle de gás do tubo de choque, permitindo que o gás entre na seção do driver e aumente a pressão do ar.

Isso rompe o diafragma, liberando alta pressão que gera uma onda de choque.

Essa onda de choque viaja e afeta as fatias do cérebro, induzindo lesão traumática do tecido.

Use uma haste cega para aparafusar a estrutura do suporte do saco estéril ao flange distal do tubo de choque, garantindo que o orifício central esteja alinhado com a saída do tubo de choque. Sensor 1, um transdutor de pressão está localizado na parte central da seção acionada e o sensor 2 está no flange distal do tubo de choque.

Conecte esses transdutores de pressão a um osciloscópio por meio de uma unidade de alimentação de fonte de corrente e ligue o osciloscópio. Certifique-se de que a válvula solenóide do tubo de choque e o controle de fluxo estejam fechados e, em seguida, abra a linha externa de ar comprimido e carregue a válvula solenóide a 2.5 bar. Abra a válvula de segurança do cilindro de ar comprimido e abra lentamente o regulador de pressão para aumentar a pressão para aproximadamente 5 bar.

Em seguida, prepare os diafragmas cortando folhas de poliéster de 23 mícrons de espessura em quadrados de 10 por 10 centímetros. Prepare as alças com fita adesiva de autoclave e cole-as na parte superior e inferior de cada diafragma. Posicione um diafragma na brecha e certifique-se de que estejam centralizados.

Em seguida, prenda o diafragma usando quatro parafusos e porcas M24. Fixe-os sequencialmente de forma diagonalmente simétrica, garantindo que os diafragmas estejam livres de rugas. Prenda um saco estéril na posição vertical na estrutura do suporte, certificando-se de que a superfície do inserto de cultura de tecidos com as fatias organotípicas do hipocampo esteja voltada para a saída do tubo de choque e que o inserto de cultura de tecidos esteja centralizado dentro do saco estéril.

Para a configuração de diafragma duplo, a pressão de ruptura depende do diferencial de pressão do gás entre o acionador e a câmara da culatra dupla. Portanto, para que os diafragmas estourem de forma controlada, a válvula de segurança da culatra dupla é aberta manualmente assim que as pressões alvo são atingidas.

Coloque protetores auriculares e óculos de segurança, se ainda não estiverem usados. Feche a válvula solenóide. Ligue a unidade de alimentação da fonte atual para adquirir os dados da onda de choque.

Manipule o botão de controle de fluxo no painel de controle do tubo de choque para pressurizar lentamente a seção de volume do acionador do tubo de choque para configuração de diafragma único para a seção de volume do acionador e a seção de culatra dupla do tubo de choque para configuração de diafragma duplo. Assim que o diafragma se romper, feche rapidamente o fluxo de ar comprimido usando o botão de fluxo e abra a válvula solenóide.

A combinação ideal de parâmetros de ondas de choque deve ser suficiente para causar lesão tecidual, mas não tão alta que cause distorção ou ruptura da inserção da cultura de tecidos ou da bolsa estéril.