Estabelecendo um modelo de neurodegeneração induzida pelo vírus Zika em um camundongo adulto

Pegue um rato anestesiado preso em uma estrutura estereotáxica. Uma almofada de aquecimento mantém a temperatura do corpo.

Depile e esterilize o couro cabeludo, faça uma incisão na linha média para expor o bregma, um ponto de referência no crânio para identificar o local da injeção, e faça um pequeno orifício.

Injete uma suspensão do vírus Zika no tecido cerebral. Retire lentamente a agulha para evitar o refluxo.

Suture o couro cabeludo e transfira o mouse para uma gaiola para recuperação.

O vírus atinge a zona subventricular, uma área rica em células progenitoras neurais, ou NPCs, e células gliais.

O vírus se liga aos receptores NPC e é endocitado. A replicação viral desencadeia uma resposta celular ao estresse, induzindo a apoptose.

A microglia, as células imunes residentes, engolem o vírus e produzem explosões oxidativas que danificam o tecido circundante. Eles também liberam citocinas e fatores neurotóxicos, que recrutam células T citotóxicas para matar as células infectadas pelo vírus.

O esgotamento resultante de NPCs e células gliais reflete a neurodegeneração induzida por vírus.

Imobilize a cabeça de um camundongo adulto anestesiado no instrumento estereotáxico e coloque uma almofada de aquecimento sob o mouse.

Após uma pitada no dedo do pé ou na cauda para garantir um plano cirúrgico de anestesia, raspe o couro cabeludo começando atrás dos olhos até o início das orelhas. Esterilizou a pele exposta com iodo e etanol 70%. Depois de fazer uma incisão de 0,5 centímetro ao longo da linha sagital medial da cabeça no local esterilizado para expor o bregma, limpe a superfície do crânio dos tecidos meníngeos e, ao mesmo tempo, afaste a pele dos locais de injeção.

Alinhe a broca cirúrgica com o bregma e, em seguida, identifique o local da injeção pelas coordenadas estereotáxicas. Usando o pedal de controle, perfure lentamente o crânio até que o orifício esteja livre para a agulha. Substitua a broca pela bomba microinjetora e pela seringa estanque a gás de 10 microlitros.

Deixe uma pequena bolha de ar entre a solução salina e o vírus e retire de 4 a 5 microlitros de vírus. Abaixe a agulha para 1,5 milímetros abaixo da superfície do cérebro a partir da superfície do cérebro e injete 1 microlitro de vírus a uma taxa de 10 nanômetros por segundo, injetando o 1 microlitro em 1,5 minutos. Depois de remover a agulha do cérebro em incrementos como antes, use uma pinça para soltar a pele e recuperar o crânio exposto. Uma vez que o couro cabeludo tenha sido suturado com suturas 4-O, remova o mouse do stereotax e monitore em uma almofada de aquecimento até se recuperar.